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Método de Ensaio - MET

Determinação de cálcio em produtos de origem animal por oxidimetria

1 Escopo
Este método visa determinar o teor de cálcio em produtos origem animal.

2 Fundamentos
O método se baseia na precipitação do cálcio em uma solução obtida das cinzas da amostra,
por adição de oxalato de amônio. O precipitado formado (oxalato de cálcio) é dissolvido em meio
ácido, formando ácido oxálico, que é determinado por oxidimetria com permanganato de
potássio. Quando o resultado deve ser expresso em base seca, a determinação da umidade da
amostra deverá ser efetuada concomitantemente à execução deste método.

3 Reagentes, padrões e materiais

Todos os reagentes são de grau analítico (p.a.), exceto quando especificado. Toda a água
utilizada nos procedimentos é destilada/deionizada, exceto quando especificada.

3.1 Reagentes
• Ácido clorídrico (HCl);
• Ácido nítrico (HNO3);
• Ácido sulfúrico (H2SO4);
• Álcool etílico (C2H6O);
• Hidróxido de amônio (NH4OH);
• Oxalato de amônio ((NH4)2C2O4.H2O);
• Permanganato de potássio (KMnO4);
• Vermelho de metila (C15H15N3O2).

3.2 Padrão
• Oxalato de sódio (Na2C2O4).

3.3 Materiais
• Balões volumétricos;
• Bastões de vidro;
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• Béqueres de forma alta (capacidade: 300mL);

• Cadinhos filtrantes de vidro borossilicato (capacidade: 50 mL) com placa porosa (10 a 16 µ);
• Funis analíticos;
• Pipetas volumétricas;
• Pipetas graduadas;
• Pissetes;
• Provetas de 50 mL;
• Papel de filtro qualitativo;
• Vidro de relógio.

4 Equipamentos
• Agitador magnético;
• Balança analítica, com precisão mínima de quatro casas decimais;
• Placa aquecedora;
• Titulador automático ou bureta de vidro.

5 Precauções analíticas
Este método emprega substâncias químicas nocivas e procedimentos que podem representar
risco ao operador. Equipamentos de proteção individual e uniforme apropriado à condução da
marcha analítica devem ser utilizados durante todo o processo.
Amostras de alimentos em geral devem ser consideradas como de risco biológico, evitando-se o
contato direto com pele e mucosas.
O preparo das soluções reagentes deve ser feito em capela de exaustão.
Deixar o item de ensaio atingir a temperatura ambiente antes da pesagem, em frascos
totalmente fechados.
Sempre correr um branco sujeito a todos os procedimentos analíticos.
Correr um ponto de padrão na faixa analítica de trabalho sujeito a todos os procedimentos
analíticos com a periodicidade estipulada pelo analista e de acordo com a rotina.
Os cadinhos de porcelana devem ser fervidos com ácido clorídrico 1:1 antes de serem utilizados.
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Os cadinhos de vidro borossilicato ou cadinhos de Gooch devem ser submetidos pelo menos
uma vez por semana ao banho de ácido nítrico para limpeza.

6 Procedimentos
Todas as operações são registradas no formulário “Dados brutos”, Anexo A do POP
POA/SLAV/15 “Procedimentos de rotina na análise físico-química de produtos de origem
animal”.
Realizar o ensaio em duplicata. O mesmo pode ser realizado com as cinzas obtidas da
Determinação gravimétrica do resíduo mineral fixo de produtos de origem animal (MET
POA/SLAV/41), seguindo o procedimento a partir do item 6.3.

6.1 Preparo de soluções e reagentes

6.1.1 Solução de ácido clorídrico 1:1
Diluir uma parte de ácido clorídrico em uma parte de água.

6.1.2 Solução de hidróxido de amônio 1:1

Diluir uma parte de hidróxido de amônio em uma parte de água.

6.1.3 Solução de hidróxido de amônio 1:50

Diluir uma parte de hidróxido de amônio em cinquenta partes de água.

6.1.4 Solução hidro-alcóolica de vermelho de metila 0,1% (m/v)

Em um balão volumétrico de 100 mL, dissolver 0,1 g de vermelho de metila em 40 mL de etanol.
Completar volume com água. Homogeneizar e armazenar em frasco âmbar identificado.

6.1.5 Solução saturada de oxalato de amônio

Pesar 35 g de oxalato de amônio, solubilizar e transferir para béquer. Adicionar 500 mL de água.
Aquecer até completa dissolução. Esfriar à temperatura ambiente.
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6.1.6 Solução volumétrica de permanganato de potássio 0,01 mol/L

Dissolver 1,6 g de permanganato de potássio em béquer contendo aproximadamente 400 mL de
água. Aquecer a aproximadamente 65°C por duas horas. Esfriar, transferir quantitativamente
para balão volumétrico de 1000 mL e completar o volume. Deixar em repouso por no mínimo
doze horas ao abrigo da luz. Filtrar sobre o cadinho de placa porosa e estocar em frasco âmbar.

6.1.7 Solução padrão de cálcio de 1000 ppm (1 mL = 1 mg Ca)

Aquecer previamente o carbonato de cálcio em estufa a 105ºC durante 15 horas. Esfriar. Pesar
exatamente 0,249 g e transferir para erlenmeyer de 250 mL com auxílio de água deionizada.
Adicionar aos poucos, ácido clorídrico (1+1) até dissolver todo carbonato. Acrescentar 50 mL de
água destilada e aquecer a ebulição para eliminar todo gás carbônico. Esfriar. Adicionar três
gotas de vermelho de metila e ajustar até coloração alaranjada com gotas de hidróxido de
amônio diluído. Transferir para balão volumétrico de 100 mL e completar com água destilada.
Essa solução deverá ser armazenada sob refrigeração e tem prazo de validade de 3 meses.

6.2 Obtenção das cinzas

Pesar cerca de 3 g de amostra homogeneizada em cadinhos de porcelana identificados,
previamente secos em mufla a 600°C por trinta minutos, resfriados em dessecador e tarados.
Levar os cadinhos com amostras ao interior da mufla, ajustada para 200°C, até que não haja
mais emissão de vapores. Aumentar gradativamente a temperatura da mufla entre 550º a 600°C.
Incinerar por no mínimo quatro horas, ou até que se obtenham cinzas claras. Reduzir a
temperatura a cerca de 150°C, retirar os cadinhos, esfriar em dessecador por no mínimo trinta
minutos e pesar. Se não se obtiver cinzas claras, adicionar duas a três gotas de ácido nítrico e
água destilada. Secar em estufa a aproximadamente 100°C e depois incinerar novamente,
conforme descrito anteriormente.

6.3 Preparo de solução-estoque

Transferir quantitativamente as cinzas das amostras para um béquer, com auxílio de bastão de
vidro. Lavar cada cadinho com pequenas porções de solução de ácido clorídrico 1:1, totalizando
20 mL. Em seguida, lavar com água destilada e levar à placa aquecedora, até que haja redução
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de 1/3 do volume. Esfriar, filtrar sobre papel de filtro qualitativo para balão volumétrico de 100
mL. Completar o volume com água. Homogeneizar.

6.4 Neutralização e precipitação da amostra

Pipetar volumetricamente uma alíquota de 50 mL para béquer de forma alta. Adicionar três a
cinco gotas de vermelho de metila 0,1% e diluir com água até aproximadamente 150 mL.
Aquecer brandamente em placa aquecedora até próximo a fervura e acrescentar, sob agitação
constante, 20 mL de solução saturada de oxalato de amônio quente.
Gotejar, sob agitação constante, solução de hidróxido de amônio 1:1, até que a coloração mude
de vermelho para amarelo. Deixar em repouso por uma hora.
Filtrar, sob vácuo, em cadinho de vidro borossilicato de placa porosa.
Lavar o béquer e o precipitado por três vezes com hidróxido de amônio 1/50 (em pissete).
Transferir o cadinho com o precipitado para o béquer original. Adicionar água destilada até cobrir
o cadinho. Adicionar 5 mL de ácido sulfúrico e misturar com bastão. Aquecer até completa
dissolução do precipitado (próximo à ebulição).
Correr um ponto de padrão sujeito a todos os procedimentos descritos acima. Sua alíquota
deverá ser de acordo com a faixa de trabalho. Essa alíquota deverá ser retirada diretamente da
solução padrão de 1000 ppm de Ca.

6.5 Titulação
Titular com solução de permanganato de potássio 0,01 mol/L, sob constante agitação, até a
viragem para coloração rósea clara persistente por 30 segundos. A temperatura durante a
titulação não deve ser inferior a 60°C.

6.6 Padronização da solução titulante

Colocar cerca de 5 g de oxalato de sódio em estufa a 105ºC por duas horas. Esfriar em
dessecador. Armazenar em um frasco hermético dentro do dessecador destinado para padrões.
Pesar 0,0835 g em balança analítica com ajuda de papéis de seda transferindo cuidadosamente
para erlenmeyer de 250 mL com ajuda de água. Adicionar 75 mL de água e 10 mL de H2SO4
1:1. Aquecer a 70-80°C e titular nessa temperatura, gotejando KMnO4 até coloração levemente
rósea persistente por 30 segundos. Trabalhar em triplicata. Fazer o cálculo de acordo com o
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item 7.1.1. Os registros da padronização da solução titulante devem ser feitos no formulário
Padronização da solução titulante, Anexo D do POP POA/SLAV/09 “Controle de reagentes,
preparo de soluções, curvas de calibração e padronização de soluções titulantes”.

7 Resultados
Todos os resultados devem ser aceitos se os requisitos para execução do ensaio forem
atendidos. Em caso de funcionamento inadequado do equipamento ou perda de amostra o
ensaio deve ser interrompido e repetido; caso contrário, os resultados não devem ser emitidos.

7.1 Cálculos e expressão dos resultados

Os cálculos são realizados através da planilha eletrônica “Cálculos – Determinação de cálcio”
(Anexo A).

7.1.1 Cálculo do fator de correção (FC) da solução titulante

Onde:
m = massa de oxalato de sódio (g);
V = volume (mL) de permanganato gasto na titulação;
0,067 = equivalente-grama (g) do oxalato de sódio;
M = molaridade (mol/L) da solução titulante;

7.1.2 Cálculo de cálcio em g/100 g

V × C × FC × 0,02004 × S × 100
Ca =
m× A
Onde:
Ca = cálcio (g/100g);
V = Volume gasto de solução titulante (KMnO4), em mL;
C = concentração da solução titulante (0,01mol/L);
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FC = fator de correção;
S = volume da solução-estoque;
m = massa de amostra (g);
A = volume da alíquota (mL);
0,02004 = mili-equivalente-grama do cálcio (1 mL de permanganato de potássio 0,01 mol/L
equivale a 0,02004g de cálcio).

7.1.3 Cálculo de cálcio em base seca (g/100 g)

Realizar o cálculo de cálcio em base seca a partir dos valores médios de cálcio e umidade das
replicatas, de acordo com a fórmula abaixo:

(Ca × 100)
CaBS =
100 − UM

Onde:
CaBS = cálcio em base seca (g/100g);
Ca = cálcio (g/100 g);
UM = umidade (g/100 g), determinada conforme MET POA/SLAV/27.

7.2 Validação da Planilha

A planilha “Cálculos – Determinação de cálcio” (Anexo A) deve ser validada conforme descrito
no POP POA/SLAV/15, através de cálculos manuais os quais devem ser registrados no
formulário “Validação de planilhas eletrônicas”, Anexo M do POP POA/SLAV/15.

8 Arquivamento dos registros

A planilha de “Cálculos – Determinação de cálcio” (Anexo A) deve ser mantida protegida na
pasta eletrônica “Resultados”. O formulário de validação da planilha de cálculos deve ser
arquivado conforme descrito no POP POA/SLAV/15 e o formulário de padronização da solução
titulante conforme POP POA/SLAV/09.
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9 Referências
BRASIL. Ministério da Agricultura, Pecuária e Abastecimento. Métodos analíticos físico-
químicos para controle de produtos cárneos e seus ingredientes, sal e salmoura. Instrução
Normativa nº. 20, de 21de julho de 1999. Brasília: Diário Oficial da União (Seção 1), 27/07/99.

10 Anexos
Anexo A MET POA/SLAV/32/02 Planilha “Cálculos – Determinação de cálcio”.

11 Alterações
Item 3.1: incluído “Ácido nítrico (HNO3)”;
Item 5: incluído “Sempre correr um branco sujeito a todos os procedimentos analíticos. Correr
um ponto de padrão na faixa analítica de trabalho sujeito a todos os procedimentos analíticos
com a periodicidade estipulada pelo analista e de acordo com a rotina. Os cadinhos de
porcelana devem ser fervidos com ácido clorídrico 1:1 antes de serem utilizados. Os cadinhos de
vidro borossilicato ou cadinhos de Gooch devem ser submetidos pelo menos uma vez por
semana ao banho de ácido nítrico para limpeza”;
Item 6: excluído ““Dados brutos – Determinação de cálcio” (Anexo A).”, incluído ““Dados
brutos”, Anexo A do POP POA/SLAV/15 - Procedimentos de rotina na análise físico-química de
produtos de origem animal.”. Incluído “Realizar o ensaio em duplicata. O mesmo pode ser
realizado com as cinzas obtidas da Determinação gravimétrica do resíduo mineral fixo de
produtos de origem animal (MET POA/SLAV/41), seguindo o procedimento a partir do item 6.3”;
Item 6.1.3: excluído “Armazenar em pissete”;
Item 6.1.6: concentração do permanganato de potássio substituída de 0,05 N para 0,01 mol/L;
Item 6.1.7: incluído;
Item 6.2: “conforme descrito anteriormente”; e segundo parágrafo, incluído “550”;
Item 6.4: terceiro parágrafo, excluído “três horas, no máximo”. Incluído “Correr um ponto de
padrão sujeito a todos os procedimentos descritos acima. Sua alíquota deverá ser de acordo
com a faixa de trabalho. Essa alíquota deverá ser retirada diretamente da solução padrão de
1000 ppm de Ca”;
Item 6.5: concentração do permanganato de potássio substituída de 0,05 N para 0,01 mol/L;
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Item 6.6: conteúdo reformulado;

Item 7.1: substituído “Anexo B” por “Anexo A”;
Item 7.1.1: excluído “Cálculo da normalidade real (NR) da solução titulante”, incluído “Cálculo
do fator de correção da solução titulante”;
Item 7.1.2: agora “Cálculo de cálcio em g/100 g”, concentração da solução titulante substituída
de 0,05 N para 0,01 mol/L;
Item 7.1.3: agora “Cálculo de cálcio em base seca (g/100 g)”, incluído “Realizar o cálculo de
cálcio em base seca a partir dos valores médios de cálcio e umidade das replicatas, de acordo
com a fórmula abaixo”;
Item 7.2: substituído “Anexo B” por “Anexo A”. Excluído “quinzenalmente, através de cálculos
manuais que devem ser registrados no formulário “Validação da Planilha de Cálculos –
Determinação de cálcio” (Anexo C).”. Incluído procedimento de validação conforme POP
POA/SLAV/15;
Item 8: excluído “O formulário “Dados Brutos – Determinação de cálcio” (Anexo A) deve ser
arquivado na pasta “Dados Brutos””. Substituído “Anexo B” por “Anexo A”. Excluído “O
formulário “Validação da Planilha de Cálculos – Determinação de cálcio” (Anexo C) deve ser
arquivado na Pasta “Validação de Planilha de Cálculos”.”, incluído “O formulário de validação da
planilha de cálculos deve ser arquivado conforme descrito no POP POA/SLAV/15 e o formulário
de padronização da solução titulante conforme POP POA/SLAV/09.”;
Item 10: excluídos “Anexo A MET POA/SLAV/32/01 Formulário “Dados Brutos - Determinação
de cálcio” e “Anexo C MET POA/SLAV/32/01 Formulário “Validação da Planilha de Cálculos –
Determinação de cálcio”. Substituído “Anexo B” por “Anexo A”;
Anexo A: Formulário “Dados Brutos - Determinação de cálcio”, excluído;
Anexo B: agora Anexo A, excluído cálculos para determinação de umidade. Campos de
observação, registro das transcrições, verificação das transcrições, verificação e data,
excluídos;
Anexo C: excluído.

Não há necessidade de complemento de relatório de confirmação de desempenho em

função das alterações realizadas.
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12 Responsabilidades
O Responsável pelo POA/SLAV deve garantir a elaboração, aprovação, emissão, distribuição de
cópias, implementação, capacitação do pessoal para execução, gerenciamento de não
conformidades, análise crítica e revisão deste MET.
O Responsável pelo POA/SLAV é responsável pela aprovação técnica deste MET.
A UGQ é responsável pela verificação deste MET.

Elaboração/Revisão: Aprovação: Verificação:

Ana Paula Pereira de Melo – POA/SLAV
Cristhiane Cattani – POA/SLAV Rosane Carlessi – UGQ
Jacson N. dos Santos – ALA/SLAV
Data: 18/07/2014 Data: 18/07/2014 Data: 23/07/2014