1

Eduardo Alécio – CEFET/PE

Métodos Microbiológicos para

Contagem de Fungos e Bactérias

PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com

 Eduardo Alécio – CEFET/PE 2

Contagem Padrão em Placa

É um método de inoculação, onde se introduz uma quantidade de
amostra num meio de cultura adequado.
• Inoculação em placas de Petri:
Técnica em superfície (Spread Plate)
Adiciona-se 0,1 mL de uma diluição da amostra com pipeta estéril no centro da placa e espalha-se com
o auxílio de uma alça de Drigalski ou um bastão estéril.

Amostra

Meio Espalhamento Incubação

Sólido

PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com

 Eduardo Alécio – CEFET/PE 3
Contagem Padrão em Placa (cont.)

• Inoculação em placas de Petri:

Técnica em Profundidade (Pour Plate)
Adiciona-se 1 mL da amostra ou sua diluição na placa de Petri vazia. Verte-se 20 mL de meio de
cultura fundido e resfriado a 45ºC. Agita-se a placa em movimentos circulares .

Meio
Líquido

Amostra
Incubação

PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com

 Eduardo Alécio – CEFET/PE 4

Contagem Padrão em Placa (cont.)

Resultado a ser alcançado:

• Que no meio sólido cada célula viável (UFC) dê origem a

uma colônia isolada.

PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com

 Eduardo Alécio – CEFET/PE 5

Número Mais Provável - NMP

Técnica de diluição idealizada por McCrady (1915), onde se faz uma
estimativa da densidade média dos microrganismos na amostra

De fácil execução, mas é laboriosa.

Baseia-se em fórmulas de probabilidade

É estimada utilizando fórmula ou tabelas

A densidade microbiana é estimada pela relação de tubos positivos e

negativos

Aplicado apenas para contagem de Bactérias

PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com

 Eduardo Alécio – CEFET/PE 6

Número Mais Provável - NMP (cont.)

1. Diluições sucessivas: 2. Incubação: Em meios adequados

1mL 1mL

10 g
da
Amostra 90mL
9 mL 9 mL 1 mL Dil. 1/10

Dil 1/10 Dil 1/100 Dil 1/100

1 mL Dil. 1/100

1 mL Dil. 1/1000

1 mL Diluente

PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com

 Eduardo Alécio – CEFET/PE 7

Número Mais Provável - NMP (cont.)

Leitura: Tabela estatística Número de tubos cujo crescimento

é visível para cada quantidade do
Número
Mais
Limite NMP

produto sob exame Provável

de
microrga
100 mg 10 mg ou 1 mg ou Inferio Inferio
nismos
ou 0,1 mL 0,01 mL 0,001 mL r r
por g ou
/tubo /tubo /tubo
mL
0 0 0 <3 - -
0 0 1 3 <0,5 9
0 1 0 3 <0,5 13
1 0 0 4 0,5 20
1 0 1 7 1 21
1 1 0 7 1 23
1 1 1 11 3 36
1 2 0 11 3 36
2 0 0 9 1 36
2 0 1 14 3 37
2 1 0 15 3 44
2 1 1 20 7 89
3 2 2 210 35 470
3 3 0 240 36 1300
3 3 1 460 71 2400
3 3 2 1100 50 4800
3 3 3 >2.400 - -

PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com

 Eduardo Alécio – CEFET/PE 8

Filtração por Membrana

O método baseia-se na filtração de volumes adequados da amostra diluída
através de membrana filtrante com porosidade de 0,45 µm.
As bactérias e fungos a serem detectados, apresentando dimensões
maiores, ficarão retidas na superfície da membrana, a qual é então
transferida para placa de Petri contendo meio seletivo e diferencial.

PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com

 Eduardo Alécio – CEFET/PE 9
Filtração por Membrana (cont.)

1. Diluir a amostra

2. Montar assepticamente a membrana no sistema de filtração

3. Ligar a fonte de vácuo

PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com

 Eduardo Alécio – CEFET/PE 10

Filtração por Membrana (cont.)

4. Filtrar a amostra diluída (Equivalente a 1g da amostra)

5. Transferir o filtro para o meio sólido em placa de Petri

PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com

 Eduardo Alécio – CEFET/PE 11

Filtração por Membrana (cont.)

6. Incubar em temperatura para bactéria e fungo

7. Contar as colônias e calcular o nº de microrganismo / g ou mL

PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com

 Eduardo Alécio – CEFET/PE 12

Contagem de Microrganismos Viáveis Totais em

Produtos Farmacêuticos (Farmacopéia Brasileira 4ª edição, 1988)
•Determinar o número total de bactérias e fungos em produtos e
matérias-primas Não-estéreis

-Contagem da população microbiana que cresce após 4 dias em

ágar Caseína-soja a 30-35ºC

-Contagem da população microbiana que cresce após 7 dias em

ágar Sabouraud Dextrose a 20-25ºC

Sobre o Método:
Realizar o teste preferencialmente em capela
de fluxo laminar.
Quando possível utilizar filtração por
membrana.

PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com

 Eduardo Alécio – CEFET/PE 13

Contagem de Microrganismos Viáveis Totais em Produtos

Farmacêuticos (cont.)

•Limites Microbianos para Produtos Farmacêuticos (USP XXIV)

-Preparações para Uso Oral e Tópico:

Bactérias mesófilas aeróbias: Máximo 500/g ou mL

Bolores e leveduras: Ausência

-Outros Produtos

Bactérias mesófilas aeróbias: Máximo 103/g ou mL

Bolores e leveduras: Máximo 102/g ou mL

PDF created with pdfFactory trial version www.pdffactory.com