AULA PRÁTICA N° 10: Cinética de hidrólise do amido I-

Hidrólise ácida

1. MATERIAL

 Amido em solução aquosa 2mg/mL

 HCl 2M
 Reativo: ADNS (ácido 3,5-dinitrossalicílico)
 Tubos de ensaio
 Espectrofotômetro
 Banho de gelo
 Banho Maria a 100°C
 Solução padrão de glicose-5moles/mL

2. OBJETIVO

Acompanhar a cinética de hidrólise do amido utilizando um catalisador

químico (ácido).

3. PROCEDIMENTO

Seguir o protocolo abaixo

Tubos B 0 3 6 9 12 15 20 30
H2O (mL) 0,5 -- -- -- -- -- -- -- --
Amido (mL) 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
HCl (mL) -- 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5

1. Após a adição dos reagentes agitar e proceder a hidrólise, incubando

os tubos em banho-maria a 100°C.
OBS: Os tubos B e 0 não devem ser aquecidos.
2. Nos tempos 3, 6, 9, 12, 15, 20 e 30 minutos interromper a hidrólise
colocando os tubos em banho de gelo.
3. Neutralizar todos os tubos com adição de 1mL de NaOH 1M
4. Após a neutralização adicionar a cada tubo 1mL de ADNS.
5. Aquecer em banho-maria a 100°C por 5 minutos. Resfriar. Completar o
volume para 10mL com água destilada. Homogeneizar. Ler a Abs a
540nm

4-ESTUDO DIRIGIDO

 Lançar em gráfico os valores de ABS X tempo

 AULA PRÁTICA N° 11: Cinética de hidrólise do amido II-
Hidrólise enzimática

1. MATERIAL

 Amido em solução 2mg/mL em tampão fosfato de sódio 0,02M pH

6,9
 NaCl 0,05M
 Reativo: ADNS (ácido 3,5-dinitrossalicílico)
 Enzima
 Tubos de ensaio
 Espectrofotômetro
 Banho de gelo
 Banho Maria a 100°C

2. OBJETIVO

Acompanhar a cinética de hidrólise do amido utilizando um catalisador

biológico (enzima)

3. PROCEDIMENTO

Seguir o protocolo abaixo

Tubos B 0 3 6 9 12 15 20 30
H2O (mL) 0,5 -- -- -- -- -- -- -- --
Amido (mL) -- 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
Enzima 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5 0,5
(mL)

1. Após a adição dos reagentes agitar e proceder a hidrólise, incubando

os tubos em temperatura ambiente.
2. No tubo 0 adicionar 1mL de ADNS antes da adição da enzima.
3. Nos tempos 3, 6, 9, 12, 15, 20 e 30 minutos interromper a hidrólise
adicionando 1mL de ADNS em cada Tubo.
4. Adicionar 1Ml de ADNS ao Tubo B
5. Após o término da hidrólise aquecer em banho-maria a 100°C por 5
minutos. Resfriar. Completar o volume para 10mL com água
destilada. Homogeneizar. Ler a Abs a 540nm

4-ESTUDO DIRIGIDO

 Lançar em gráfico os valores de ABS X tempo