MODULO 8 – Estratégias para isolamento de genes específicos

Etiquetamento de genes – Gene tagging

Desenho de um segmento de DNA (etiqueta), cuja sequencia é

conhecida e estratégicamente montada

Um sistema de transformação permite a inserção da etiqueta no

genoma da planta alvo, de forma aleatória

Inserção aleatória dá origem a linhas geneticamente modificadas

Inserção aleatória pode levar a perda/ganho de função de um

gene funcional que reside nas proximidades do sítio de inserção

Perda/ganho de função pode levar a um fenótipo de fácil

identificação

Experimentos de co-segregação estabelece o local de inserção

da etiqueta (map based cloning) e permite a identificação da
natureza molecular do gene
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Etiquetamento de genes – Gene tagging
gene de seleção gene reporter

A etiqueta deve ser bem caracterizada e deve ter a habilidade de

se inserir de forma aleatória e estável no genoma

Um sistema de transformação de plantas deve estar disponível

É mais eficiente se um fenótipo de fácil identificação é gerado

 MODULO 8 – Estratégias para isolamento de genes específicos
Etiquetamento de genes – Gene tagging

gene reporter gene de seleção

LB ori RB
Etiqueta não-especializada

gene reporter gene de seleção

Etiqueta especializada passiva LB RB
ou enhancer trapping

gene de seleção promotor

LB RB
Etiqueta especializada ativa
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Etiquetamento de genes – Gene tagging
Etiqueta especializada ativa
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Etiquetamento de genes – Gene tagging
Exemplo 1:
Etiqueta para enhancer trapping em arroz (Wu et al. 2003)
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Etiquetamento de genes – Gene tagging
Exemplo 1:
Etiqueta para enhancer trapping em arroz (Wu et al. 2003)
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Etiquetamento de genes – Gene tagging
Exemplo 1:
Etiqueta para enhancer trapping em arroz (Wu et al. 2003)
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Etiquetamento de genes – Gene tagging
Exemplo 1:
Etiqueta para enhancer trapping em arroz (Wu et al. 2003)
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Etiquetamento de genes – Gene tagging
Exemplo 1: enhancer trapping em arroz

The subcellular localization showed that OsAP65 is a pre-vacuolar

compartment (PVC) protein. These results indicated that OsAP65
was essential for rice pollen germination and tube growth.
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Etiquetamento de genes – Gene tagging
Exemplo 1: enhancer trapping em arroz

Our results indicated that OsELF3 acts

as a floral activator in the long-day
photoperiodic pathway via its crosstalk
with the circadian clock in rice.
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Etiquetamento de genes – Gene tagging
Exemplo 2:
Isolamento de promotores em banana (Santos et al. 2009)
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Etiquetamento de genes – Gene tagging
Exemplo 2:
Isolamento de promotores em banana (Santos et al. 2009)
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Etiquetamento de genes – Gene tagging
Exemplo 2:
Isolamento de promotores em banana (Santos et al. 2009)
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Etiquetamento de genes – Gene tagging
Exemplo 2:
Isolamento de promotores em banana (Santos et al. 2009)
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Etiquetamento de genes – Gene tagging
Exemplo 2:
Isolamento de promotores em banana (Santos et al. 2009)