Espectrofotometria

&
Curva Padrão
Radiação ionizante Radiação não ionizante
 Histórico
• Pierre Bouger 1760 • August Beer
• Essai d’optique sur la • Descobriu uma lei
• Johann Lambert
gradation de la relacionada.
Lumiere (Teste óptico • Citou a descoberta
na gradação da luz). de Bouger no seu
trabalho
Photometria.
1729 1852
• Mediu a intensidade da luz.
• Observou que a intensidade era alterada
por reflexão ou por absorção.
• Explicou como calcular a diminuição da Absorvância de uma amostra é
diretamente proporcional ao Absorvância é proporcional à
intensidade depois que a luz passou por concentração da amostra.
várias espessuras do meio absorvente. comprimento do caminho da luz.
 𝑰 𝐸𝑙𝐶 𝟏
T=
𝑰𝒐
=𝑒 Abs = log
𝑻
𝐴𝐵𝑆 = 𝐸𝑙𝐶
Equação de Lambert-Beer O cálculo da absorvância de uma amostra
usando a equação depende de duas
suposições:
𝐴𝐵𝑆 = 𝐸𝑙𝒞 1. A absorvância é diretamente
proporcional ao comprimento do caminho
da amostra (a largura da cubeta).
𝐴𝐵𝑆 = Κ𝒞 2. A absorvância é diretamente
proporcional à concentração da amostra.

ABS = absorvância (não tem unidade)

ε = coeficiente de extinção molar ou absortividade (L mol-1 cm-1)
ι = caminho ótico (cm)
C = concentração (mol L-1)
𝐴𝐵𝑆 = Κ𝒞
 Limitações da Lei de Beer
Desvios reais
• A lei de Lambert-Beer é válida
apenas para soluções diluídas
(≥ 𝟎, 𝟎𝟏𝒎𝒐𝒍/𝑳).

• Em altas concentrações a distância

média entre as moléculas ou íons
responsáveis pela absorção é
pequena, de forma que cada
partícula afeta na distribuição de
carga da partícula vizinha.
Branco ou solução de referência

0,00

Leitura do tubo 1
0,279