SEMANA 14 e 15 - AULA 12, 13 e 14
MICROBIOLOGIA II
Generalidades
VIROLOGÍA!
Antigamente, acreditava-se que os vírus eram
substancias tóxicas como, veneno. Atualmente, se sabe
que são partículas e não se consideram seres vivos, já
que, carecem de retículo endoplasmático, complexo de
Golgi, mitocôndrias, citoesqueleto e entre outros
componentes. Ainda há pessoas que afirmam serem ser
vivos, pelo simples fato de conterem genoma, DNA ou
RNA. Contudo, esse ultimo conceito não é adotado.
Sendo acelulares, não realizam reprodução e sim,
replicação. Assim como, não morrem e sim, se inativam.
DEFINIÇÃO
São partículas intracelulares obrigatórias que
dependem dos mecanismos da célula hospedeira-diana
para replicar-se, de onde obtém enzimas, aminoácidos,
retículo endoplasmático e todos os componentes de uma
célula. Em ausência desta, não consegue replicar-se de
forma eficiente.
Carecem de energia própria, dependendo da energia
da célula hospedeira. O vírus utiliza substratos como
ATP, NADH e FADH2 assim como as células, contudo,
não consegue sintetizar-los, necessitando assim da célula
para prover-los.
ESTRUTURAS
TAMANHO
A unidade de tamanho dos vírus se da em
nanômetros, podendo variar de 20 a 250nm. Os vírus de
maior tamanho apresentam um genoma maior e mais
complexo.
• Clamidia (300nm) - antigamente acreditava-se
ser um vírus por seu tamanho, atualmente se sabe
que são bactérias (procariota) devido a detecção de
ribossomas em sua estrutura.
• Bacteriófago - tipo de vírus que infecta bactérias,
não possuindo a capacidade de infectar células
eucariontes. São portadores de genes de resistência
ou virulência, podendo introduzir-los em bactérias
que infectam, como Corynebacterium. São
utilizados também para produção de medicamentos.
INTERIOR
O genoma possui um nucleoide constituído de DNA
(ácido desoxirribonucleico) ou RNA (ácido ribonucleico)
e ainda, há alguns que apresentam os dois como,
Citomegalovírus (genoma de DNA, mas no interior
existe pequena fração de RNA). Ademais, há exceções
nas quais os vírus apresentam ribossomas (arenavírus). O
genoma determina a infecciosidade.
O DNA e RNA constituem o nucleoide, este pode
estar associado a proteínas virais sintetizadas dentro da
célula, essa combinação se denomina Core/Centro.
O Core atua como imunógeno (gera resposta imune),
deixando assim, anticorpos detectáveis para diagnostico.
Se encontra em todos os vírus e é responsável pela
infectividade, já que esta formado por ácidos nucleicos.
Sua estrutura lhe prove proteção contra o meio externo,
sendo composta por uma proteína conhecida como,
capsíde.
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DR.CARLOS MELGAREJO
CAPSÍDE
A capsíde, por sua vez, é formada por polímeros de
capsômeros. A partir do vírus da capsíde surgem as PAV
(Proteínas de Adesão Viral), que provem adesão a célula
hospedeira através dos receptores celulares (ex:
neurotransmissor de acetilcolina) e assim, permite ao
vírus afinidade por algum tecido ou sistema completo.
PAV é considerada uma proteína imunógena, que
induz a produção de anticorpos que se unem a PAV no
intuito de impedi-lo de aderir-se a célula (neutralizando-
a), contudo, em certas situações esse mecanismo
contribui para o vírus adentrar na célula.
• Provee simetría, forma helicoidal, esfeiroidal ou
icosaédrica (prisma)
• Protege o ácido nucleico do meio externo, da
dessecação e de enzimas tissulares
• Apresenta estrutura (PAV) que permite a união a
célula hospedeira
• Atua como imunógeno
• Reprimi expressão de genes virais tempranos (no
genoma existe um grupo de genes temperados e
tardios, há genomas que se expressam primeiro - não
deve ocorrer a expressão antes de infectar uma
célula). Há vírus que contem suas próprias
polimerassas sintetizadas dentro da célula, estas são
enzimas que fazem copias do genoma (transcrição).
A capsíde reprimi a expressão dos genes virais
(inibe as polimerasas), impedindo que atuem antes
da infecção da celular.
A capsíde pode estar separada da envoltura ou unida,
como é o caso do vírus Sarampion.
ENVOLTURA
A envoltura é de origem lipoproteíca (semelhante e
adquirida da célula hospedeira), cumprindo função de
proteção ao nucleoide, permitindo união aos receptores
celulares e expressão de determinantes antigênicos
(proteínas que atuam como antígeno, gerando resposta
imune).
A presença da envoltura define a resistência do vírus
ao meio externo:
✓ V. DESNUDO - não apresentam envoltura e devido
a sua ausência, são resistentes a infectantes e ao
meio externo. Produzem infecções líticas (para sair
da célula hospedeira, causam lises). Possui PAV.
Como exemplo de vírus desnudos, podemos citar HPV-
poliovírus e o vírus da Hepatite A. O vírus da hepatite A pode
ser transmitido via fecal-oral, sendo resistente ao pH estomacal
e sais biliares, conservando sua infectividade na água.
✓ V. C/ENVOLTURA - providos de envoltura de
natureza fosfolípidica, obtida através da membrana
plasmática da célula hospedeira. Não mata a célula
hospedeira e sim, a utiliza como fabrica, gerando
uma infecção não lítica (não mata). Ao contrario
dos vírus desnudos, estes são sensíveis a
desinfectantes e ao meio externo, transmitidos
através da troca de fluído (não resistindo a
ambientes que não sejam úmidos). Possui PAV.
1 EDUARDA DA SILVA
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Algumas proteínas que se projetam para fora da
envoltura, conhecidas como proteínas espiga (ex:
hemaglutinina), são responsáveis pela infecciosidade
permitindo a rápida união a receptores celulares e
ativando a resposta imune (atuam como antígenos).
ÁCIDOS NUCLEICOS
O genoma independentemente se for DNA ou RNA,
pode ser mono (uma fita) ou bicaternário antiparalelo
(dupla fita). Sendo de forma lineal ou circular.
Ademais, os vírus podem ser classificados segundo
sua polaridade:
‣ Polaridade Positiva - iniciam com 5’ e terminam
com 3’. Ribossomas possuem capacidade de leitura
dos genomas de polaridade positiva.
‣ Polaridade Negativa - iniciam com 3’ e terminam
com 5’. Ribossomas não possuem capacidade de
leitura de genomas com polaridade negativa, logo, o
vírus necessita realizar uma copia desta fita, porém
de polaridade distinta. Para isso, necessita sintetizar
um intermediário replicativo de polaridade positiva.
‣ Polaridade Dupla - vírus de RNA bicaternário e
de dupla capsíde, como os Rotavírus (família dos
Reovírus - causam diarreia).
Há vírus que possuem RNA e o utilizam para
sintetizar DNA e, este por sua vez, são utilizados para
sintetizar RNA (ex: vírus do HIV da família Retrovírus).
Estes possuem uma enzima em particular, a
Transcriptasa Inversa/Reversa, enzima causadora de
muitos erros nas cópias, impossibilitando assim a
fabricação de uma vacina eficaz.
Os ácidos nucleicos pelo fato de determinarem a
infecciosidade, em caso de alguma mutação tornam o
vírus muito mais ou menos infeccioso.
Os vírus para realizarem replicação necessitam de
proteínas chamadas, polimerasas, estas realizam copia
do genoma. Há polimerasas mais propensas a cometerem
erros no momento da copia, gerando assim as variantes
(mais frequente entre polimerasas de RNA).
PROTEÍNAS
✓ ESTRUTURAIS - formam a estrutura do vírus
superficialmente ou internamente, como por
exemplo, o capsômero (forma a capsíde).
✓ NÃO ESTRUTURAIS - não possuem função
estrutural e sim, replicativa. Como, por exemplo, as
polimerasas, enzimas que fazem copias do genoma
e se associam a estrutura viral (unidas a capsíde,
quando se desprendem realizam replicação).
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REPLICAÇÃO VIRAL
O tropismo viral se refere a uma célula suscetível
(permite o ingresso) e permissível (possui maquinaria de
replicação) ao vírus. As duas condições devem estar
presentes para ocorrer tropismo celular.
A replicação viral esta dada em 7 etapas.
ADSORÇÃO
A primeira etapa se caracteriza pelo tropismo
celular, onde ocorre a união da proteína de união viral e
receptor celular (localizado ou generalizado).
PENETRAÇÃO
Há tres tipos de penetração:
‣ DIRETA - realizada pelos vírus desnudos, onde
passam diretamente para dentro da célula, sem
causar lises desta.
‣ FUSÃO DE MEMBRANA - realizada pelos vírus
com envoltura, estes para ingressar dentro da
célula fusionam sua envoltura com a membrana
FASE TEMPRANA
celular, processo mediado por uma proteína de
fusão. As proteínas virais presentes na envoltura
após o processo de penetração permanecem na
membrana celular, o que por um lado gera processo
inflamatório e por outro, permite a identificação e
formação de anticorpos.
‣ VIROPEXIS - mecanismo de endocitose mediado
por receptores. Os vírus são capazes de estimular
sua fagocitose, onde a membrana celular se estende
e o engloba. Posteriormente, se forma uma vesícula
e esta é degrada pelo vírus para possibilitar sua
saída.
DESCAPSIDAÇÃO - DESNUDAMENTO
O vírus perde capsíde/envoltura e inicia a expressão
de seus genes tempranos e tardios. Ao mesmo tempo que
perde a capsíde, perde a infectividade (não pode infectar
outra célula) devido a liberação de seu genoma no
citoplasma/nucleoplasma celular. A partir daí, esta pronto
para iniciar sua replicação.
ECLIPSE
Se refere ao tempo de incubação (etapa latência),
quando o vírus inicia sua replicação livremente no
citoplasma e sintetiza suas próprias proteínas.
FASE TARDIA
Ocorre em duas etapas:
‣ EXPRESSÃO DO GENOMA - transcrição de
grupos de genes, essa etapa ocorre somente em vírus
de DNA (ex: de DNA se sintetiza RNA)
2 EDUARDA DA SILVA
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‣ TRADUÇÃO - sintetiza proteínas não estruturais,
como por exemplo, as polimerasas. Essa etapa
ocorre tanto em vírus de DNA, como RNA.
Os mecanismos de replicação variam de acordo com
o genoma (DNA ou RNA).
No caso dos vírus de RNA, estes não necessitam
passar pelo processo de transcrição (primeira etapa
eclipse), logo, passam diretamente para a tradução.
‣ TRANSCRIPTASA INVERSA/REVERSA - enzimas
que sintetizam DNA a partir de RNA (RNA>DNA).
Estas cometem erros, inserindo nucleotídeos
distintos dos corretos. As enzimas do Retrovírus e
polimerasas de RNA, em particular, cometem
muitos erros gerando novas variantes.
LATÊNCIA
Coincide com período de replicação (etapa eclipse),
neste o vírus não se encontra nem dentro e fora da célula.
Em alguns casos o genoma permanece livre, porém não ocorre
replicação devido a atuação do sistema imune. O sistema imunológico
atua sequestrando todas as proteínas/maquinaria necessária para
replicação viral, logo, este vírus permanece em estado de latência até que
o sistema imune enfraqueça e assim, o vírus possa continuar sua
replicação. Neste caso, se trata de uma infecção latente e recorrente, a
célula é suscetível e não permissível. Ex: Herpes
FASE TARDIA
MATURAÇÃO
Ao final da replicação, ocorre o ensamble/embalagem
dos ácidos nucleicos e formação da capsíde.
LIBERAÇÃO
Assim que estiver finalizado a etapa anterior, se
libera da célula. Essa liberação pode ocorrer de duas
formas:
‣ LÍTICA - frequente entre os vírus desnudos,
onde ao sair rompem a célula gerando processo
inflamatório (DAMP). Ex: herpes
‣ NÃO LÍTICA - frequente entre os vírus com
envoltura, ocorre por um processo denominado
brotação/gemação onde com a liberação do vírus,
este leva consigo parte da membrana celular,
nuclear ou do retículo endoplasmático rugoso. Ex:
Togavírus (dengue/zika) e Hepanovírus (hepatite B)
No caso de uma infecção não lítica, as células
hospedeiras se tornam uma fábrica viral, já que, estas
não morrem e continuam liberando vírus, gerando assim
uma infecção persistente.
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DR.CARLOS MELGAREJO
VÍRUS DE DNA
A maioria dos vírus de DNA são de cadeia dupla (cd)
antiparalela (5'3', 3'5'), porém existe em menor
quantidade os de cadeia simples como, herpesvírus,
papillomavírus, adenovírus e polyomavírus.
Na transcrição (primeira etapa eclipse), se transcreve
um grupo de genes conhecido como, genes tempranos.
Os genes tempranos portam informação para síntese de
enzimas e proteínas não estruturais, como polimerasas. A
seguir, se transcreve o grupo de genes tardios que
portam informação para síntese de proteínas estruturais,
como capsômeros.
VÍRUS DE RNA
A maioria dos vírus de RNA são de cadeia simples
(semelhantes ao RNAm), quando possuem polaridade
positiva são diretamente reconhecidos pelos ribossomas.
Já aqueles de polaridade negativa não são reconhecidos
pelos ribossomas, logo, estes vírus necessitam de uma
enzima “x” que utiliza o genoma de polaridade negativa
para sintetizar um genoma de polaridade positiva, isso
ocorre através de um intermediário replicativo.
VÍRUS C/ TRANSCRIPTASA INVERSA
Esta enzima se encontra em duas famílias, na
Retroviridae (HIV) e Hepadnaviridae (hepatite B).
Os retrovírus são vírus de RNA e sintetizam DNA a
partir do seu RNA.
Já os hepavírus são vírus de DNA que possuem uma
estrutura circular com pequena fração aberta, possuindo
uma enzima para sintetizar RNA (DNA>RNA) e deste
sintetizar DNA (RNA>DNA), completando assim o
genoma. Pode suceder que este RNA sintetizado em vez
de adentrar o genoma viral, adentra o núcleo dos
hepatocitos, gerando um hepatocarcinoma.
VARIAÇÃO VIRAL
Os erros cometidos na hora da replicação viral, lhes
prove vantagens (mais infeccioso) ou desvantagens
(inativação).
‣ MUTAÇÕES PONTUAIS - erros de polimerasas
inserindo nucleotídeo distinto, em grande quantidade
ou até mesmo a ausência de algum nucleotídeo.
‣ RECOMBINAÇÃO GÉNICA - acomete vírus da
mesma família, onde ocorre a união covalente entre
dois genomas.
‣ REORDENAMENTO GENÓMICO - ocorre quando
dois vírus infectam a mesma célula e desse ensamble
surge uma partícula com segmentos de ambos vírus.
Ex: H1N1, H2N3, H2N2 e H3N5.
TERMINOLOGIAS
‣ CEPA - vírus mutantes, mas que mantem mesma
infecctividade que o original.
‣ VARIANTE - se apresenta mais infeccioso que o
vírus original, sendo genotipicamente distinto
‣ TIPO/SEROTIPO - antígenos que se apresentam
em um grupo especifico da mesma família e gênero
(ex: H1N1, H2N2).
3 EDUARDA DA SILVA
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TROPISMO VIRAL
Os vírus podem infectar seres vivos e células
especificas.
Além da classificação segundo o genoma, os vírus
podem ser classificados segundo o tropismo celular:
dermotropo (afinidade pela pele), neumotropo (afinidade
pelo pulmão), hepatotropos (afinidade pelo fígado),
neurotropos (afinidade por neurônios) e pantropos
(afinidade por todas as células).
A maioria dos vírus se replicam em um sitio
especifico (pelo qual tem afinidade celular) e ao terminar
a replicação, saem desse órgão e infectam outro órgão
que irá manifestar os casos clínicos. Como, por exemplo,
o sarampo apresenta manifestações cutâneas (vesículas),
mas antes disso já esteve presente nos pulmões sem
apresentação clínica. No caso, este não é um vírus
dermotropo e sim, neumotropo.
EFEITOS VIRAIS SOBRE AS CÉLULAS
Quando os vírus infectam uma célula, causam dano
ao citoesqueleto ou até mesmo em sua estrutura
completa, alterando sua morfologia celular.
Esse efeito se conhece como, Ação Citopática ou
Efeito Citopatogênico, causando assim, uma infecção
obstrutiva.
PATOGÊNESE DAS INFECÇÕES
‣ Segundo Hospedeiro - imunocompetente ou
imunodeficiente
‣ Segundo Especialidade - localizada (ex:
infecções respiratórias) ou sistémica
‣ Segundo Temporalidade - aguda ou persistente.
Quando persistente, pode-se apresentar crônica
(infecção de muito tempo), latente (vírus não se
replica), lenta ou transformante (imortalizador - não
permite que a célula morra).
PERÍODO DE INCUBAÇÃO
Neste período o vírus se encontra em estado
replicativo, sendo de duas formas:
‣ CURTO - quando a porta de entrada é próxima a
célula diana/alvo
‣ LONGO - quando a porta de entrada é distante da
célula diana/alvo
Todavia, não depende somente da porta de entrada
e célula alvo, mas também outros fatores como, carga
viral e fatores de risco.
Recordando que, este é o período onde não se
encontra vírus ou anticorpos. Podendo durar por dias,
meses ou anos. Assim que finalizado este período, o
vírus sai da célula e infecta outras, em seguida o
paciente inicia apresentação dos quadros clínicos.
Contudo, é possível o período de incubação
finalizar, o vírus sair da célula e o paciente ainda não
apresentar os quadros clínicos. Nesse caso, o paciente
começa a apresentar os quadros clínicos depois do vírus
já ter afetados outros tecidos.
EX: Sarampo e Varicela
O Sarampo tem como porta de entrada a cavidade oro-faringe. No
interior do hospedeiro suscetível sua replicação inicialmente ocorre no
sistema respiratório, somente tempo depois se replica em outros tecidos
(pele) e nestes manifesta os quadros clínicos (vesículas).
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DR.CARLOS MELGAREJO
RESULTADOS DA INFECÇÃO
✓ Infecção Abortiva - quando a célula é suscetível,
mas não permissível. Logo, ocorre fracasso da infecção
✓ Infecção Lítica - quando o vírus se replica e ao sair
da célula causa lises desta
✓ Infecção Persistente - é o mesmo que infecção não
lítica, onde o vírus sai da célula por brotação
✓ Infecção Recorrente-Latente - quando o vírus não
pode se replicar imediatamente devido a ação do
sistema imune, porém quando o sistema imunológico
estiver debilitado o vírus inicia sua replicação (ex:herpes)
A SUCEPTIBILIDADE E GRAU DA ENFERMEDADE
A susceptibilidade e o quão grave se manifestara a
enfermidade, depende de fatores como:
‣ Exposição e localização - quais são as células alvo
suscetíveis ao vírus, se forem muito estéreis/debeis ao
serem infectadas desenvolveram enfermidade grave.
Como exemplo de células debeis, células do SNC.
‣ Sistema imunitário
‣ Dose viral
‣ Genética do vírus (ex: variantes) e Genética do
hospedeiro (ex: Sx.Down, Lupus, Celiaquia, Guillain
barre)
EVASÃO VIRAL
Os vírus conseguem causar enfermidades graças aos
mecanismos de evasão ao sistema imunológico, dessa
forma, o atacando, invadindo e contra-atacando.
A virulência é outro fator que possibilita a evasão,
provendo a capacidade de controlar a resposta imune.
INFECCTIVIDADE VIRULENCIA
Facilidade de Capacidade de evadir e
ingressar na célula controlar sistema imunológico
Mas afinal de contas, como consegue fazer isso?
O vírus atua evitando seu reconhecimento pelo
sistema imune e também alterando os mecanismos de
defesa do hospedeiro.
COMO EVITA RECONHECIMENTO DO S.I
‣ Variação antigenica - cambia seus antigenos
‣ Diminui a expressão viral
‣ Dissociação da expressão genica viral - inibe sua
própria replicação até que o sistema imunológico se
encontre em um estado debilitado, é quando volta a
replicar-se (ex: herpes)
COMO ALTERA O MECANISMO DE DEFESA DO HOSP
‣ Inibe replicação antigentica
‣ Inibe Sistema Interferon (IFN) - controla atividade
mediada por antígenos endógenos, assim, o sistema
imune não consegue se ativar
‣ Reprime liberação de citocinas
‣ Infecção das células do sistema imunológico
‣ Inibição do sistema de transcrição - impede a
expressão dos genes que portam informação interferon
4 EDUARDA DA SILVA
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DIAGNOSTICO VIROLOGICO SOROCONVERSÃO

O diagnostico de um quadro virológico é classificado 14-21 dias depois

segundo o objetivo, que pode ser: 1º soro 2º soro

✓ D. EPIDEMIOLOGICO Amostra Amostra

Observação Resultado/Paciente
Fase Aguda Fase Convalecencia
Determina a incidencia e prevalencia. Depende da
clínica e epidemiologia 32
Paciente já se infectou Infecção Previa
(+) 32 (+) em algum momento da
vida, possuindo Paciente Imune
memória imunológica
✓ D. INDIVIDUAL
Este diagnostico se divide em etapas. < ou (-) 8 < ou (-) 8
Paciente nunca entrou
em contato com o vírus,
Ausência de Infecção
Paciente Suscetível
- Intervenção Terapêutica: exames laboratoriais de logo, é suscetível

enfermidades infecciosas Ocorreu uma Conversão Sorol.

8 (+) > 32 conversão sorológica
- Prognostico: por exemplo, exame prospectivo de < ou (-)
Infecção Recente
câncer do colo uterino
- Monitorar Resposta Terapêutica: por exemplo, os
pacientes diagnosticados com HIV imediatamente Esse tipo de método, conversão sorológica, prove um
iniciam o tratamento antiretroviral e 3 meses depois resultado retrospectivo. Normalmente não é realizado,
se faz necessário o retorno para verificar a carga viral, salvo algumas situações como, pacientes recém-
observando assim se há resistência ao tratamento nascidos.
Por exemplo, uma mulher com sífilis pode dar a luz a
O diagnostico de um quadro virológico é classificado recém-nascido aparentemente saudável, contudo, se faz
segundo o método dependendo do tempo, que pode ser: necessário uma prova para saber se este se contaminou
✓ M. DIRETO com o vírus proveniente da mãe. Se solicita IgM e esta
Detectar o vírus diretamente, ou seja, buscar resulta negativo, porém 14-21 dias depois resulta
antígenos. Se realiza nos primeiros dias dos positivo, ou seja, ocorreu conversão sorológica. Logo, o
quadros virais, 3 a 5 dias antes até 3 a 5 dias bebê esta infectado e necessita ser tratado.
depois do inicio dos signos e sintomas.
Independentemente do método a ser utilizado, sempre
Realizado através de: se deve ter em conta a clínica (signos e sintomas) e
• Cultivo - não se realiza em meio axênicos, ou epidemiologia (tempo, lugar e pessoa).
seja, sem células (Agar Sangue, McKonkey).
Logo, o cultivo é realizado em meio de
cultivo celular, com células ELA. Porém, para
se realizar necessita de um laboratório de
investigação, tornando-se um método pouco
viável.
• Microscopia Eletrônica - a microscopia pode
ser realizada, contudo, para um laboratório
deve haver somente um microscópio sendo
utilizado, tornando-se um método pouco
viável.
• Identificação de Antígenos - todos os vírus
possuem antígenos, porém nem todos são
detectáveis
• Identificação de Genoma* - é a técnica
molecular, realizando uma reação em cadeia
polimerase. É uma técnica muito especifica.

✓ M. INDIRETO
Detectar o vírus indiretamente, ou seja, buscar
anticorpos. Se realiza de 5 a 7 dias dos quadros
virais, através da sorologia - IgG e IgM.
• Conversão Sorológica - possui finalidade
retrospectiva, identifica que paciente gerou
imunidade
• Detecção de IgM - normalmente solicitado
para casos virais*, indica a enfermidade ativa.
IgG é solicitado geralmente para prognostico
(por exemplo: se a mulher deseja engravidar,
se pede IgG para identificar se há vírus que
podem desenvolver fetopatias)

@REVISAMEDPY 5 EDUARDA DA SILVA