Universidade Estadual de 2.

Síntese de melatonina
Santa Cruz
ou sua modulação
(produção de melatonina
rítmica ou não por
outros órgãos);
Grupo de Pesquisa em
Cronobiologia

Rafaella Valete Nunes

Paiva 24 de março de 2023
 2015 Daily differential
expression of melatonin-
related genes and clock
genes in rat cumulus–
oocyte complex: changes
after pinealectomy

F.I: 12.081

22
 MAPA DE PERCURSO

Introdução

Objetivos

Materiais e métodos

Resultados

Discussão

Conclusão
33
INTRODUÇÃO

4
 Per1/Per2 (-)

Cry1/Cry2

Rev-erbα Triptofano
TPH1
I (+) (-)
Rorα
Bmal1
N 5-hidroxitriptofano
Núcleo AADC
T
Citoplasma
R Serotonina
Adaptado: (Cecon & Flôres, 2018)
O AANAT
D N-acetilserotonina (NAS)
U ASMT
Ç Melatonina
Ã
O Pinealócitos

Adaptado: (AXELROD; WEISSBACH, 1960) 55

 Melatonina

 Regulação da função ovariana [9,10];

I  Maturação do oócito [11-15];

N
T  Ação antioxidante [16-19];
R
O  Receptores [23, 24];
D
U
Ç
Ã
O

(Sellix & Menaker,

(Sellix & Menaker, 2010) 2010) 66
OBJETIVOS

7
 Investigar a expressão de genes:

O • Enzimas sintetizadoras de melatonina (Aanat e Asmt)

B
J
E
• Receptores de membrana (Mtnr1a e Mtnr1b)
Complexo cumulus-oócitos (COC)
T
I • Receptores nucleares (Rorα)
Estágio de Ausência
V
maturação Pineal
O • Genes de relógio (Clock, Bmal1, Cry1, Cry2, Per1 e Per2)
S

88
MATERIAIS E MÉTODOS

9
 Animais qRT-PCR Estatística
M Ratas Wistar desmamadas • Expressão
A gênica • p<0,05
T • Comida e água (ad libitum) mRNA.
E
R • Temperatura
I • CEUA/USP
A
I Coleta COC Pinealectomia Tratamento com melatonina
S
Imaturo Maturo • Anestesia: pentobarbital, • 1 mg/kg
E 20 UI eCG 20 UI eCG via intraperinoneal
• 12 h - fase escura
M 48h
• Protocolo de Hoffman e • 15 dias
É 48h 20 UI hCG Reiter com modificações.
T 14-16h
O
Eutanásia Eutanásia
D
O Meio de cultura
S
1
Separação 10
0
 Desenho Experimental
M
A Experimento 1 Experimento 2
T
E Efeito sobre o estágio de maturação Efeito sobre a pinealectomia e reposição de MEL
R
I
Imaturo Maturo
A
I
S Pinealectomia Pinealectomia
• Enzima sintetizadoras Controle
(Pinx) (Pinx + MEL)
E • Receptores
• Genes de relógio ZT18
M
É • Enzima sintetizadoras
T ZT12 ZT24
• Receptores
O
D • Genes de relógio
O ZT3
S ZT6

11
RESULTADOS

12
 Figura 1: Expressão de genes relacionados à melatonina

R
E
S
U
L
T
A
D
O
S

1
(***P < 0.001; **P < 0.01) 13
3
 Figura 1: Expressão de genes relacionados à melatonina

R
E
S
U
L
T
A
D
O
S

1
(***P < 0.001; **P < 0.01) 14
4
 Figura 2: Expressão de genes de relógio em oócito

R
E
S
U
L
T
A
D
O
S

1
(*P < 0.05; **P < 0.01;***P < 0.001) 15
5
 Figura 3: Expressão de genes de relógio em células do cumulus

R
E
S
U
L
T
A
D
O
S

1
(*P < 0.05;**P < 0.01; ***P < 0.001) 16
6
 Figura 4: Expressão de genes relacionados à melatonina em oócito

R
E
S
U
L
T
A
D
O
S

1
(*P < 0.05;***P < 0.001) 17
7
 Figura 5: Expressão de genes relacionados à melatonina em células do cumulus

R
E
S
U
L
T
A
D
O
S

1
(**P < 0.01; ***P < 0.001) 18
8
 Figura 6: Expressão de genes relacionados os genes de relógio em oócito

R
E
S
U
L
T
A
D
O
S

1
(*P < 0.05;**P < 0.01; ***P < 0.001) 19
9
 Figura 7: Expressão de genes relacionados os genes de relógio em células do cumulus

R
E
S
U
L
T
A
D
O
S

2
(*P < 0.05;**P < 0.01; ***P < 0.001) 20
0
DISCUSSÃO

21
 • A presença de transcritos de Aanat em • Melatonina é produzida no ovário,
células cumulus e Asmt em COC de ovários provavelmente nas células da granulosa
imaturos e maduros. [36].

D
I • A intensa atividade transcricional dos • Para proteger os oócitos do estresse
S genes Aanat e Asmt no estágio imaturo. oxidativo que acompanha a ovulação [20].
C
U
S
S • A maturação do oócito pode ser mediada • Meiose [13], a maturação citoplasmática
Ã
por receptores de membrana e/ou [14] e mediar o efeito da melatonina na
O
nucleares. maturação do oócito[30].

• Redução da expressão da maioria dos • Genes do relógio é mais abundante no

genes de relógio na maturação. estágio de metáfase II [29, 42].
2
22
2
 • A pinealectomia alterou o perfil de expressão diária dos genes relacionados à melatonina e
genes do relógio, exceto Rorα e Per2 no oócito e Per1 em células do cumulus.

• A pinealectomia aboliu expressão de genes dos receptores de melatonina de membrana

(Mt1, Mt2) e aumentou no gene Rorα [44].
D
I
S
C • Não afetou a expressão diurna de Per2 no • Afetou a expressão de Per2 no NSQ e pars
U NSQ, cérebro , olhos, coração [45]. tuberalis [46].
S
S
Ã
O • Afetou expressão de Per1 no SNC de ratos • Aboliu a expressão diária de Clock, Per2,
[47]. Cry1 [8].

• A pinealectomia modifica a amplitude da expressão de genes de relógio em COC.

2
23
3
 • A suplementação de melatonina, restaurou parcialmente ou completamente os perfis de
expressão diária de mRNA da maioria dos genes estudados.

D
I
S
C • Em nosso estudo, o tratamento com • 3 meses foi necessário para provocar
U melatonina durou apenas 15 dias. oscilações na expressão gênica [46].
S
S
Ã
O

• É necessário pesquisas adicionais como bloqueio do receptor de melatonina.

2
24
4
CONCLUSÃO

25
 • Padrão de expressão de genes relacionados à melatonina e genes de relógio muda
com o estágio de maturação do ovário, além da hora do dia.

C
O
N • Função
C ovariana
L
• Maturação do
U cúmulo/oócito
S
Ã
O
Regulação da
Melatonina

26
Obrigada!
Quando você ama a CRONO e sabe o quanto ainda precisa aprender!
 REFERÊNCIAS

 Cecon, E., & Flôres, D. E. de F. L. (2018). Regulação da expressão gênica nas engrenagens
do relógio circadiano de mamíferos. Revista Da Biologia, 4(1), 28-33.
https://doi.org/10.7594/revbio.04.06.

 Sellix MT, Menaker M. Circadian clocks in the ovary. Trends Endocrinol Metab. 2010
Oct;21(10):628-36. doi: 10.1016/j.tem.2010.06.002. Epub 2010 Jul 3. PMID: 20599392;
PMCID: PMC2949464.

28