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Principais materiais de
engenharia ISSN: 1662-9795, Vol. 840, Revisado: 12/11/2019
pp 245-250 doi:10.4028/ www.scientific.net/ Aceito: 17/11/2019
KEM.840.245 © 2020 Trans Tech Publications Ltd, Suíça On-line: 24/04/2020

Síntese de N-Fenil Pirazolina a partir de Dibenzalacetona e Ensaio

de Atividade Inibitória de Polimerização de Heme (HPIA)
Linda Ekawatia, Bambang Purwonob*
e Muhammad Idham Darussalam Mardjanc
Departamento de Química, Faculdade de Matemática e Ciências Naturais, Universitas Gadjah Mada,
Jl. Sekip Utara BLS 21, Bulaksumur, Yogyakarta 55281, Indonésia
e linda.ekawati@mail.ugm.ac.id, b purwono.bambang@ugm.ac.id, c idham.darussalam@ugm.ac.id

Palavras-chave: Dibenzalacetona, HPIA, N-fenil pirazolina

Abstrato. A síntese de 1,5-difenil-3-estiril-4,5-di-hidro-1H-pirazol (B1) e 5-(3,4-

dimetoxifenil)-3-(3,4-dimetoxiestiril)-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazol (B2) foram conduzidos a partir de 1,5-
difenilpenta-1,4-dien-3-ona (A1 ) e 1,5-bis(3,4-dimetoxifenil)penta-1,4-
dien-3-ona (A2). O ensaio da atividade inibidora da polimerização do heme (HPIA) dos compostos sintetizados
também foi realizado. A primeira etapa da reação foi a condensação de Claisen-Schmidt de derivados de
benzaldeído e acetona utilizando NaOH 20% e etanol como solvente. Os derivados de dibenzalacetona reagiram
com fenilhidrazina usando ácido acético para formar N-fenilpirazolina. O H- e 13C-NMR O resultado da estrutura
FT-IR, GC-MS, DI-MS, ensaio de atividade inibitória da polimerização heme 1dos produtos foi caracterizado por
mostrou que IC50 de B1 e B2 1,26 e 0,79 mM enquanto quinino 1,26 mM . O resultado indicou que o composto
B2 era mais potente como antimalárico do que o quinino.

Introdução

O relatório Mundial da Malária da Organização Mundial da Saúde (OMS) de 2017 afirmou que ocorreram 219
milhões de casos de malária, dos quais ocorreram 435 mil mortes. Cerca de 92% dos casos de malária ocorrem
na região africana e são seguidas pelas regiões do Sudeste Asiático com 5% dos casos e pelas regiões do
Mediterrâneo Oriental com 2% [1]. Na Indonésia, os casos de malária ocorrem na Indonésia Oriental, como
Papua, Papua Ocidental e Nusa Tenggara Oriental [2]. Tratamento da malária no mundo usa quinolina
derivados na forma de cloroquina, mas em 1950 houve casos de resistência à cloroquina.
A mefloquina foi usada como medicamento antimalárico a partir de 1983, mas um caso de resistência à mefloquina
surgiu em 1995 e 2000. Artesunato-mefloquina e Artesunato-amodiaquina ou outros medicamentos combinados
foram usados para tratar casos de recorrência que apareceram nos medicamentos antimaláricos existentes [3 ] .
A artemisinina, que é encontrada naturalmente na planta Artemisia annua [4], pode ser usada como terapia
combinada de artemisinina (ACT) para reduzir o alto uso de artemisinina como medicamento único [5]. O ACT é
usado como principal tratamento para a malária [6]. A ausência de uma vacina contra a malária também faz com
que a malária continue a ser uma das principais causas de morte [7]. Portanto, o uso de medicamentos
antimaláricos é a única forma de tratamento da malária [8,9]. Kalaria et al. relataram que compostos heterocíclicos
com átomos de O, S e N poderiam atuar como compostos antimaláricos; um deles é o composto pirazolina [10].
A pirazolina substituída nas posições 1, 3 e 5 tem 89% de inibição; significa ter uma melhor atividade antimalárica
em comparação com 87% de inibição da cloroquina [11]. Os compostos de pirazolina têm um mecanismo de ação
como antimalárico através da inibição da polimerização do heme [12].
Os compostos de dibenzalacetona podem ser obtidos através da condensação aldólica do benzaldeído ou
seus derivados com ex acetona, onde a acetona possui dois lados do hidrogênio ÿ para que possa reagir com dois
benzaldeído (proporção de benzaldeído:acetona = 1:2). Os derivados de dibenzalacetona são compostos de
chalcona com ligações duplas carbono-carbono adicionais, como mostrado na Fig. 1. A dibenzalacetona
foi posteriormente convertido em pirazolinas correspondentes para melhorar a atividade do anel pirazolina, como
encontrado em derivados de curcumina-pirazolina. Teoricamente, a via de síntese da pirazolina pode ser realizada
pela reação de cetonas insaturadas (chalcona) com hidrazina em ácido acético [13]. A pirazolina também pode
ser obtida a partir da reação da dibenzalacetona com fenilhidrazina para produzir compostos N-fenil de pirazolina
[14]. A reação de síntese da pirazolina a partir da dibenzalacetona é mostrada na Fig. 2.

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246 Simpósio de Ciência e Química de Materiais II

SOBRE

R
R

Figura 1. Estrutura geral da dibenzalacetona.

SOBRE
NN
H
N CH3COOH
R NH2 R
R R

Figura 2. Esquema de reação da pirazolina.

Secção experimental

Materiais. Os materiais utilizados foram 3,4-dimetoxibenzaldeído (veratraldeído), acetona, fenilhidrazina,

hidróxido de sódio (NaOH), etanol, ácido acético glacial, dimetilsulfóxido (DMSO), cloridrato de quinina di-
hidratado, n-hexano e acetato de etila . Todos os produtos químicos foram adquiridos da Merck com alta
qualidade e utilizados sem qualquer purificação adicional.

Instrumentação. O ponto de fusão foi determinado utilizando o aparelho de ponto de fusão Electrothermal
9100 e não foi corrigido. Os espectros de infravermelho foram obtidos utilizando um espectrômetro Shimadzu-
Prestige 21. O cromatograma e os espectros de massa foram medidos em um GC-MS Shimadzu QP-2100 e
ECZ500R/S1 (500 MHz 1DI-MS.
os espectros de RMN de H e 13C foram obtidos em um espectrômetro JEOL JNM
1
( H) e 125 MHz (13C)). Equipamento para ensaio antimalárico por atividade inibitória de polimerização
(HPIA) foram micropipeta (Rainin e Socorex), microplaca de 96 poços, centrífuga (Thermo Scientific Sorval LM
17R), vórtice (Thermo Scientific), incubadora shaker (OSK TW-1116) e ELISA.
Leitor (Benchmark Bio-Rad).

Síntese de 1,5-difenilpenta-1,4-dien-3-ona (A1) Benzaldeído (2) (40 mmol, 4,07 mL) foi dissolvido em
etanol (20 mL) e depois acetona (1) (20 mmol, 1 0,5 mL) foi adicionado. A solução foi agitada vigorosamente
durante 15 min e o Erlenmeyer foi resfriado em banho de gelo para manter a temperatura de 1-4°C. Em
seguida, adicionou-se gota a gota solução de hidróxido de sódio (20%, 20 mL).
A mistura reaccional foi agitada durante mais 1 hora. O produto foi neutralizado com HCl 10% e o produto
separado foi filtrado, lavado com água e seco. Foi recristalizado a partir de etanol para dar o composto A1
(97,60%) como um sólido amarelo p.f. 101-103°C. FTIR KBr (ÿmax, cm-1 ) 3024 (Csp
2
–H alongamento), 1651 (C = O ÿ, ÿ-cetona insaturada), 1497 e 1450 (alongamento aromático C = C), H-
1
1589 (alongamento alifático C=C), 988 (HC=CH trans). CG: 100% de pureza. NMR (500 MHz, CDCl3)
ÿ (ppm): 7,09 (1H, d , J = 16 Hz, CH=CH), 7,41-7,43 (3H, m, H-Ar), 7,62-7,64 (2H, m, H-Ar), 7,74 (1H, d, J = 16
Hz, CH= CH ) . MS (EI, m/z): 234 (M+), 131, 103, 77 (pico base) e 51.

Síntese de 1,5-bis(3,4-dimetoxifenil)penta-1,4-dien-3-ona (A2). Este foi preparado conforme descrito

para A1 a partir de veratraldeído (3) (10 mmol, 2,75 g) em etanol (10 mL) com acetona (1) (5 mmol, 0,5 mL) e
o produto foi recristalizado a partir de etanol para dar o composto A2 ( 90,90%) como um sólido amarelo
brilhante, p.f. 98-101°C. FTIR KBr (ÿmax, cm-1 ): 1643 (C = O cetona ÿ, ÿ-insaturada), 3009 (alongamento
Csp2 –H), 2924 (alongamento Csp3 –H ), 1512 e 1589 cm-1 (C aromático = C alongamento), 1265 e 1026
1
(éter C – O), 949 (HC = CH trans). GC: 94,67% de pureza. RMN-H (500 MHz, CDCl3) ÿ
(ppm): 3,83 (3H, s, –OCH3), 3,84 (3H, s, –OCH3), 6,79 (2H, d, J = 8 Hz, H-Ar), 6,85 (1H, d, J = 16 CH=CH),
7,04 (1H, d, J = 2 Hz, H-Ar), 7,10 (1H, dd, J = 8 e 2 Hz, H-Ar), 7,59 ( 1H, d, J = 16CH=CH). MS (EI, m/z): 354
(M+, pico base), 339, 151, 91, 77 e 51.

Síntese de 1,5-difenil-3-estiril-4,5-di-hidro-1H-pirazol(B1)Dibenzalacetona (A1)(4mmol, 1g) e 15 mL de

ácido acético glacial foram adicionados a 100 mL do ácido de três pescoços frasco até que fosse
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completamente dissolvido. Fenilhidrazina (4 mmol, 0,4 mL) foi adicionada à solução. A solução foi refluxada
durante 8 h e arrefecida até à temperatura ambiente. A pirazolina sólida foi obtida após despejar a solução
em água gelada. O produto separado foi filtrado, lavado com água e seco. O resíduo foi recristalizado com
etanol para dar o composto B1 (82,17%) como um sólido marrom p.f. 121-
123ºC. FTIR KBr (ÿmax, cm-1 ): 3024 ( alongamento Csp2 –H), 1597 (C=N), 1497 (C=C aromático
1
alongamento), 1327 (C – N) e 949 (HC = CH trans). GC-MS: pureza de 96,37%. RMN-H (500 MHz,
DMSO-d6) ÿ (ppm): 2,94 (1H, dd, J = 17 e 5, –CH2), 3,73 (1H, dd, J = 17 e 10, –CH2), 5,44 ( 1H, dd, J = 10
e 5, –CH), 6,73 (1H, d, J = 15, CH=CH), 7,53 (1H, d, J = 15, CH=CH). . 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6) ÿ
(ppm): 41,7 (–CH2), 62,5 (–CH), 118,5 (CH=CH), 136,3 (CH=CH), 148,7 (C=N). MS (EI, m/z): 324, 247, 220,
104, 91 (pico base), 77 e 51.
Síntese de 5-(3,4-dimetoxifenil)-3-(3,4-dimetoxiestiril)-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazol (B2).
Dibenzalacetona (A2) (2 mmol, 0,71 g) e 15 mL de ácido acético glacial foram adicionados a um balão de
três bocas de 100 mL até estar completamente dissolvido. Fenilhidrazina (2 mmol, 0,2 mL) foi adicionada à
solução. A solução foi refluxada durante 11 h e arrefecida até à temperatura ambiente. A pirazolina sólida foi
obtida após despejar a solução em água gelada. O produto separado foi filtrado, lavado com água e seco. O
resíduo foi recristalizado com etanol para dar o composto B (70,45%) como um sólido vermelho escuro p.f.
121-123°C. FTIR KBr (ÿmax, cm-1 ): 3001 ( alongamento Csp2 –H), 2932 (alongamento Csp3 –H), 1597
(C=N), 1504 (alongamento alifático C=C), 1466 e 1420 (aromático C=C alongamento), 1258 (C – O), 1134
(C – N) e 957 (HC = CH trans). GC: 81% de pureza.
1
RMN-H (500 MHz, DMSO-d6) ÿ (ppm): 2,95 (1H, dd, J = 15 e 5, –CH2), 3,68 (1H, d, J = 10, –
CH2), 3,70 (6H, s, –OCH3), 3,76 (1H, s, –OCH3), 3,81 (1H, s, –OCH3), 5,36 (1H, dd, J = 10 e 5, –
CH), 6,89 (1H, d, J = 11, CH=CH), 7,15 (1H, d, J = 11, CH=CH). 13C-NMR (125 MHz, DMSO-d6) ÿ (ppm):
41,7 (–CH2), 55,3 (2C, –OCH3), 55,3 (2C, –OCH3), 62,5 (–CH), 112,7 (CH=CH) , 133,2 (CH=CH), 149,1
(C=N). MS (EI, m/z): 444 (M+ ), 442 (pico base), 151, 91, 77 e 51.
Ensaio de atividade inibitória da polimerização do heme de derivados de pirazolina. Este teste foi
conduzido por Basilico et al. [15], que modificaram a dose da solução de hematina e a amostra utilizada.
Um total de 100 ÿL de solução de hematina 1 mM em NaOH 0,2 M foi colocado no microtubo e, em seguida,
foram adicionados 50 ÿL de material de teste com vários níveis de concentração, ou seja, 5, 2,5, 1,25, 0,63,
0,31, 0,16 e 0,08 mg/mL. A replicação foi realizada 3 vezes para cada concentração. Para iniciar a reação
de polimerização do heme, foram adicionados ao microtubo 50 mL de solução de ácido acético glacial (pH 2,6),
que já contém solução de hematina e amostra, foram incubados a 37 °C por 24 horas. O controle positivo
utilizado foi o cloridrato de quinina dihidratado, enquanto o controle negativo foi uma mistura de heme e
ácido acético glacial sem amostra.
Após a incubação, o microtubo foi centrifugado a 8.000 rpm por 10 min. O sobrenadante foi removido e o
precipitado foi lavado 3 vezes com 200 mL de DMSO. Cada microtubo foi lavado por centrifugação com
velocidade de 8.000 rpm por 10 min. Ao precipitado obtido foram adicionados 200 mL de NaOH 0,2 M. Cada
100 mL da solução obtida foi colocada em microplaca de 96 poços e valores de DO
foram lidos pelo leitor Elisa em um comprimento de onda de 405 nm.
Valores de atividade inibitória da polimerização do heme expressos em IC50, ou seja, níveis que poderiam
inibir a polimerização do heme em 50% em comparação ao controle negativo. A curva padrão foi construída
fazendo uma série de concentrações de hematina (que foi dissolvida em NaOH 0,2 M). Um total de 100 mL
de cada concentração foi adicionado aos poços e o valor de DO das microculturas de 96 poços foi observado
pelo leitor ELISA em um comprimento de onda de 405 nm. O valor IC50 inibitório da polimerização do heme
foi calculado usando análise probit.

Resultados e discussão

As dibenzalacetonas A1 e A2 foram preparadas a partir de acetona (1) com benzaldeído (2) ou

veratraldeído (3) em uma reação de condensação de Claisen-Schmidt catalisada por base (Fig. 3). Além
disso, algumas das dibenzalacetonas (A1 e A2) foram convertidas em pirazolinas (B1 e B2) usando um
método relatado [6]. Os métodos sintéticos utilizados foram escolhidos com base em seus procedimentos
simples, com melhores rendimentos de produtos e custo-benefício. A pureza e as estruturas de todos os sintetizados
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compostos foram confirmados por TLC e técnicas espectroscópicas, respectivamente. Os espectros de IV da

dibenzalacetona exibiram bandas de absorção características desejadas nas suas respectivas regiões, como
cetonas ÿ,ÿ-insaturadas (1651 cm-1 para A1 e 1643 cm-1 para A2 ). A pirazolina B apresentou suas bandas
de absorção características devido a C=N e C–N nas regiões 1597 e 1134 cm-1 (B1) enquanto B2 nas regiões
1597 e 1134 cm-1 . A ausência de bandas de absorção de cetonas ÿ,ÿ-insaturadas no composto
pirazolina confirma que ocorreu a ciclização do anel pirazolina.

SOBRE
NN
SOBRE
SOBRE

(e) (ii)
H H3CCH3 _
2 R
R R
R
R
2-3 1 A1-A2 B1-B2

Figura 3. Síntese de dibenzilidenoacetonas (A1-A2) e seus derivados pirazolínicos (B1-B2).

Reagentes e condições: (i) NaOH a 20%, EtOH; (ii) fenilhidrazina, ácido acético, refluxo.

Os compostos sintetizados foram testados quanto à atividade antimalárica in vitro utilizando o ensaio HPIA.
O cloridrato de quinina foi utilizado como controle positivo. O Plasmodium falciparum nos eritrócitos quebra a
hemoglobina em globina e libera heme no vacúolo digestivo. A globina será decomposta em aminoácidos
como matéria-prima para a síntese da proteína Plasmodium . Heme grátis, ou seja,
a ferroprotoporfirina IX será oxidada em ferriprotoporfirina IX no vacúolo digestivo ácido e era tóxica para as
células hospedeiras e para o Plasmodium. O heme livre é altamente tóxico porque pode formar espécies
radicais de oxigênio que podem causar a morte do Plasmodium [8]. Pelo Plasmodium, o heme livre é convertido
na forma de dímero inerte, nomeadamente hemozoína (pigmento da malária). Um polímero que é idêntico à
hemozoína, isto é, a ÿ-hematina, pode ser formado in vitro a partir da hematina em condições ácidas. A
quantidade de cristal de ÿ-hematina formado é inversamente proporcional à atividade dos agentes antimaláricos
que inibem a polimerização do heme [16]. Os valores de IC50 do composto, controles negativos e positivos
foram listados na Tabela 1. Os valores de IC50 de B2 menores que o controle positivo, portanto B2 apresentou
atividade inibitória da polimerização do heme.
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Tabela 1. Valores de IC50 de B1, B2, controles negativo e positivo com base no ensaio de atividade inibitória da
polimerização do heme.

Concentração Dose média de Inibição

hemozoína média
IC50
Amostra
(mg mL-1) (milímetros)
(milímetros) (%)
27,92 ± 7,84 84,60±4,32
5 2,5 54,44 ± 8,46 69,97±4,67
1,25 65,76 ± 5,71 63,73±3,15
B1 0,63 89,93 ± 7,35 50,40±4,06 1,26
0,31 92,29 ± 10,85 49,10±5,99
0,16 97,08 ± 5,80 46,46±3,20
0,08 136,11 ± 2,42 24,93±1,33
5,97 ± 1,98 96,71±1,09
5 2,5 10,76 ± 4,95 94,06±2,73
1,25 27,22 ± 3,55 3 84,99±1,96
B2 0,63 5,97±4,39 80,16±2,42 0,79
0,31 83,13±10,31 54,15±5,69
0,16 100,90±4,39 44,35±2,42
0,08 114,58±9,36 36,81±5,16
15,42±3,11 91,50±1,72
5 2,5 18,89±1,89 89,58±1,04
1,25 25,76 ± 1,68 85,79±0,93
Quinina 0,63 84,17 ± 10,54 53,58±5,81 1,26
cloridrato
0,31 87,99 ± 11,98 51,47±6,61
0,16 121,94 ± 12,21 32,75±6,73
0,08 135,07 ± 11,34 25,51±6,25
Controle
181,32±3,44 0,00±0,00
negativo

A atividade do derivado N-fenil pirazolina foi descrita na Fig. 4. A formação de ÿ-hematina será procedida pela
formação de um precipitado amorfo de heme, e seguida por uma lenta conversão em ÿ-hematina cristalina. O
composto N-fenil pirazolina possui dois nitrogênios. O par solitário no átomo N poderia interagir com Fe (III) por
meio de ligação de coordenação, enquanto o grupo metoxi reagirá com o sítio ácido na ferriprotoporfirina IX (grupo
ácido carboxílico). Portanto, o processo de polimerização pode ser evitado.

NN
SOBRE

NN SOBRE
SOBRE

SOBRE

SOBRE
SOBRE

SOBRE
HO OH

OH
N N
Fe III

N N NN
Fe III
SOBRE

NN
OH
E

Ligação de hidrogênio
b
Vínculo de coordenação

Figura 4. O mecanismo de inibição da N-fenil pirazolina: (a) B1 e (b) B2 contra a hematina.

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Resumo

Os compostos de 1,5-difenil-3-estiril-4,5-di-hidro-1H-pirazol (B1) e 5-(3,4-

dimetoxifenil)-3-(3,4-dimetoxiestiril)-1-fenil-4,5-di-hidro-1H-pirazol (B2) foram preparados a partir de dibenzalacetona
(A1 e A2). Os resultados da atividade inibitória da polimerização do heme mostraram que os valores de IC50 das
amostras B1, B2 e quinino foram 1,26, 0,79 e 1,26 mM, respectivamente.

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