2.

Prospeção do mundo microbiano

Para além das suas dimensões geralmente muito reduzidas, os

microrganismos destacam-se dos restantes seres vivos pelo seu número,
geralmente muito elevado, e pela sua diversidade extremamente marcada. No seu
conjunto, estas propriedades favorecem a presença de microrganismos por toda a
parte onde a vida é possível. Devido ao seu reduzido tamanho, os microrganismos
não são geralmente "detectáveis" a olho nu, pelo menos individualmente. A
detecção de microrganismos em vários "habitats" pode ser verificada através do
seu crescimento em condições favoráveis, formando populações numerosas
facilmente observáveis. O objectivo deste trabalho é a detecção e isolamento de
microrganismos do meio ambiente.

Material (por grupo)

- 4 placas de Petri contendo MRN
- lamparina ou bico de Bunsen
- álcool a 96%
- 1 espalhador de vidro
- fósforos/isqueiro
- 1 ansa de inoculação
- pinça
- copo de 100ml
- vortex
- 1 micropipeta de 100 ou 200 µl
- 2 marcadores (um de ponta grossa e ou de ponta fina)

Deve começar por escolher um local para efectuar a pesquisa de

microrganismos e levar para esse local placas de Petri com meio de cultura estéril
que permita o seu crescimento. Proceder do seguinte modo:
• No local escolhido abrir duas placas de Petri com meio de
repicagem normal (MRN) e fechá-las ao fim de 30 e 120 minutos,
respectivamente;
• deixe incubar as placas durante 3 a 4 dias à temperatura
ambiente. Após incubação guardar as placas, devidamente
acondicionadas, na câmara frigorífica, até ter oportunidade de
fazer a sua observação;
• as restantes placas que tem na bancada poderão ser inoculadas
com materiais à sua escolha. Use a imaginação! Proceda como foi
anteriormente referido.
 2.1. Observação e classificação das colónias isoladas
Utilizando a Tabela 1 anotar as diferentes observações que efectuar dos
diferentes tipos de colónias, observando o seu tamanho, a forma, a cor, o brilho e
a margem. Classificar essas colónias de acordo com o esquema da Figura 1.

Figura 1 - Classificação de colónias quanto à forma, margem e elevação

2.2. Isolamento e purificação de estirpes

A partir da placa contendo uma cultura mista, que apresente um número
representativo de colónias bem individualizadas, proceder ao isolamento de uma
estirpe microbiana pela técnica de sementeira por exaustão, consoante as
indicações do docente.
Incubar a cultura à temperatura ambiente 24 a 48 horas e repetir o
procedimento descrito acima até obter uma cultura pura. Antes de proceder à
sementeira em placas, deve marcá-las na parte marginal do fundo da placa com as
seguintes informações: número do grupo, microrganismo, diluição (quando se
aplicar) e data do ensaio.

2
Notas e Registo das observações

Operador:

Data: ____/____/____

Inóculo:______________________________________________ Total de colónias:

_________

Tabela 1. Registo das características das colónias observadas por placa

Caracterização das colónias observadas

Número de
Forma Margem Elevação Cor Aspeto Desenho
colónias

Notas: