Cocos Gram-positivos

Instituto de Ciências Biomédicas USP

ICB/USP - Departamento de Microbiologia
Staphylococcus
1. As principais bactérias cocos Gram-positivos
2. Identificação de Cocos Gram-positivos
3. Bactérias do gênero Staphylococcus
3.1. Staphylococcus aureus
- Fatores de virulência: Toxinas, Enzimas, TSST,
Superantígeno
- Doenças
- Tratamento: Problema da aquisição de Resistência aos
antibióticos, MRSA e as Superbactérias
Profa. Elisabete Vicente 3.2. Staphylococcus saprophyticus
bevicent@usp.br
3.3. Staphylococcus epidermidis
4. Micrococcus
5. Questões para Estudo e Revisão do Entendimento

Referência Bibliográfica principal: Microbiologia de Brock, 14ª edição, 2016.

 oal, OK......então juntos
Hei pess dos por ai? vamos começar ..
to
Já estão

Vocês estão todos bem?

Sim! Já
estamos

1. As principais bactérias cocos Gram-positivos são:
Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus, Sarcina
Sarcina: São anaeróbios
obrigatórios, tolerantes a
ácidos até pH2, fermentam
açúcares, originam arranjos
com 8 ou mais células. São
isolados em solo, fezes,
conteúdo estomacal de
seres humanos com
distúrbios gastrointestinais,
ulceras pilóricas.
Cocos Gram-positivos
Micrococcus: São aeróbios
Staphylococcus: Têm 0,8 - 1 m Streptococcus: Têm aprox. 0,6 -
não patogênicos. Estão
de diâmetro. São aeróbios 1 m de diâmetro. São anaeróbios
presentes em vários
facultativos, fermentadores de facultativos não sensíveis ao O2,
ambientes e também no
açúcares, crescem mais rápido em produzem acido láctico. São
corpo humano na pele,
aerobiose. classificados de acordo com a sua
mucosa orofaringe e podem
ser essenciais para manter o capacidade de provocar lise (morte
equilíbrio da microbiota celular) em eritrócitos.
normal do corpo humano.
São algumas das principais bactérias causadoras de frequentes doenças
desde leves a muito severas em humanos
r
Vamos aborda
 2. Identificação de cocos Gram-positivos
Identificação/
Etapa 1 – A identificação destas bactérias se inicia pela observação cocos Gram-positivos
Morfologia:
ao Microscópio Óptico (M.O.) de células coradas pela (CGP)
técnica de Coloração de Gram de que são

Identificação/ Provas bioquímicas empregadas para Identificação de CGP

Etapa 2 – Provas
Bioquímicas:
como se se
Vamos lá ver
deesstas
faz cada uma
provas..
Identificação/
Etapa 2 – Provas 1. Prova Bioquímica 1: Catalase
Bioquímicas: Para a separação de Staphylococcus e Micrococcus de Streptococcus

cocos Gram-positivos
(CGP)

- Catalase é uma enzima que promove o

desdobramento da H2O2 em H2O e O2

+ -

Prova da Catalase em tubos de cultura

Staphylococcus e Micrococcus Streptococcus

são são
catalase positiva catalase negativa
A Prova da Catalase também pode ser feita
em lâminas.
Identificação/
Etapa 2 – Provas 2. Prova Bioquímica 2: Oxidação/Fermentação de glicose (O/F)
Bioquímicas: Para a separação de Staphylococcus de Micrococcus

Staphylococcus e Micrococcus

- O/F

- +

(-) (+)
Micrococcus Staphylococcu
s
 r
amos conferi
Então vam
os...
o que já sabem

Identificação/
Etapa 1 –Morfologia: cocos Gram-positivos (CGP)
se +
- Catala
Identificação/ Provas bioquímicas empregadas para Identificação de CGP - O/F +
Etapa 2 – Provas
Bioquímicas:

o
Micrococcus: nã
s.
são patogênico
s
Estão presente
em vários
e
ambientes
o
também no corp
humano...
 onferir
Então vamos c
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o que já ssaabem

Identificação/
Etapa 1 –Morfologia: cocos Gram-positivos (CGP)
se +
- Catala
Identificação/ Provas bioquímicas empregadas para Identificação de CGP - O/F+
Etapa 2 – Provas
Bioquímicas:

o Vamos prosssseguir
Micrococcus: nã
são patogênico
s. analisando os
s ...
Staphylococcu
s
Estão presente
em vários
e
ambientes
o
também no corp
humano...
 3. Bactérias do gênero Staphylococcus

Se multiplicam em diferentes planos

da divisão celular

Cocos Gram-positivo, anaeróbios facultativos, sem flagelo, fermentadores de glicose,

crescem bem a 37 ºC. Muitos fazem parte da microbiota normal do corpo humano.
Podem causar muitas doenças leves ate doenças muito graves em humanos.
Já sabemos: CGP, Catalase Positiva, OF+ : Gênero Staphylococcus

Mas, o isolado que pretendemos identificar é de que espécie ?

Staphylococcus Provas Bioquímicas equivalentes que podem ser

empregadas para identificação de
- Coagulase - DNase - Fermentação de manitol Staphylococcus: (MAIS DETALHES ESTÃO A SEGUIR)

Coagulase: coagulação de
plasma
+ + : Sta. aureus
-
-: outros Sta.

- Sta. aureus
DNase: Degradação do DNA de
- Sta. epidermidis
esperma de salmão.
- Sta. saprophyticus + : Sta. aureus
-: outros Sta.
- Teste de S/R a Novobiocina
Crescimento em meio Ágar
S manitol salgado:
R Fermentação manitol +: Sta. aureus
- Sta. epidermidis
- Sta. saprophyticus Fermentação manitol -: outros Sta.
Prova da coagulase:

S. aureus (+)

Demais
Staphylococcus (-)
 Prova da coagulase:

+ -

Staphylococcus - teste da coagulase

Coagulase + = S. aureus
Coagulase - = outros Staphylococcus
 +

Staphylococcus - teste da coagulase

Coagulase + = S. aureus
Coagulase - = outros Staphylococcus
Prova da DNAse:
Procedimento:
1.A bactéria a ser analisada e cultivada em meio sólido
contendo DNA de esperma de salmão;

2. O cultivo é recoberto com HCl 1 M e a placa é

incubada a temperatura ambiente, por 3-5 minutos;

3. Para leitura, o excesso de HCl presente na superfície

do meio sólido é removido;

+ 4. O pH ácido resultante da adição do HCl promove a

precipitação DNA e isto pode ser observado pela
opacidade no meio sólido. Ao redor do crescimento das
bactérias DNase+, que promovem a degradação do
DNA, surge um halo claro, pois o DNA foi degradado.

Staphylococcus - teste da DNase

DNase + = S. aureus
DNase - = outros Staphylococcus
 O Ágar Manitol-salgado é um Meio de cultura Seletivo e Diferencial

É utilizado para:
-Isolamento seletivo de Staphylococcus e
-Detecção de Staphylococcus aureus provenientes de amostras clínicas.

Staphylococcus epidermidis
(estafilococos coagulase-negativa)
 
É um meio de cultura seletivo:
Contém peptonas e extrato de carne bovinos, que
fornecem nutrientes essenciais; e, 7,5% de cloreto de
sódio, que resulta na inibição parcial ou completa de
outras bactérias que não os estafilococos.

É um meio de cultura diferencial:

Contém o açúcar manitol. A fermentação de manitol resulta na
alteração no indicador de pH vermelho de fenol:
-Os estafilococos coagulase-positiva produzem colônias amarelas e um
meio amarelo circundante;
- Os estafilococos coagulase-negativa produzem colónias vermelhas e
Staphylococcus aureus nenhuma alteração na cor do indicador vermelho de fenol.
(estafilococos coagulase-positiva)

Colônias de S. aureus cultivadas em Ágar manitol salgado (AMS)

 3.1. Staphylococcus aureus
- CGP, Catalase Positiva, OF+ :
Gênero Staphylococcus

- De que espécie ?
+
- Catalase positiva,
- DNase positiva,
- Colônias amarelas em Ágar manitol salgado

Já conhecemos os Fatores de virulência: - Catalase +

- DNase +
Staphylococcus aureus
 - S. aureus - Fatores de virulência
- Catalase e DNase (presentes em todos os isolados de Staphylococcus

Outras Enzimas e Fatores de patogenicidade Estafilocócica

Típicas de S. aureus
- Cápsula (muitos isolados)
- Peptidoglicano (endotoxina vasodilatação)
- Proteína A (liga-se a fração constante da IgG, promove evasão da fagocitose)
- Coagulase (atua sobre o fibrinogênio levando a formação de coágulos de fibrina)
- Fibrinolisina ou Estafiloquinase (atua sobre a fibrina promovendo a dissolução de coágulos)

- Hialuronidase (despolimeriza o ácido hialurônico existente no cimento ao redor das células do

tecido conjuntivo)
- Lipases
- Endonucleases (DNases e RNases)
- Penicilinases
 S. aureus - Fatores de virulência (continuação)
- Catalase e DNase (presentes em todos os isolados de Staphylococcus

Toxinas Estafilocócicas típicas de S. aureus

Toxina alfa Forma poros na membrana das células
(músculos cardíacos, eritrócitos, outras células)
Toxina beta Degrada lipídios
(esfinglomielina e esofosfatidilcolina levando a destruição
de muitos tipos de células)
Toxina delta Produzida pela maioria dos estafilococos. Surfactante que
desestabiliza a membrana celular.
(eritrócitos e outros tipos de células)

Enterotoxinas Presente em 30-50% dos isolados, Termoestáveis.

Produzem gastroenterites devido a alimentos
contaminados.
S. aureus - Fatores de virulência (continuação)

S. aureus - toxina citolítica alfa

 S. aureus - Fatores de virulência (continuação)

S. aureus – toxina citolítica delta (surfactante)

 S. aureus - Fatores de virulência (continuação)
- Catalase e DNase (presentes em todos os isolados de Staphylococcus

Toxinas Estafilocócicas típicas de S. aureus (continuação)

Toxina Até 56 toxinas

leucocidina (promove a degradação de leucócitos)

Toxina esfoliativas Toxina eritrogênica. Produzida por 5-10% dos

isolados. Formas ETA e ETB
(são proteases que destroem os desmossomos
que unem as células da pele )
 S. aureus - Fatores de virulência (continuação)
Além - Catalase e DNase (presentes em todos os isolados de Staphylococcus
de: Outras Enzimas e Fatores de patogenicidade Estafilocócicas
Típicas de S. aureus

Toxinas Estafilocócicas típicas de S. aureus

SUPERANTÍGENO
- TSS: quadro clínico é chamado “Síndrome do Choque Tóxico” OSTA
RESP uito
m
Imune bada
TSST – é o nome da “Toxina da Síndrome do Choque Tóxico” Exace
r

Inicialmente: associada ao uso de absorventes higiênicos íntimos

(sangue e muco na vagina  colonização do Sta. aureus);
Atualmente: Homens e Mulheres – infeções pós cirúrgicas.
 S. aureus – Intoxicação alimentar
Além Outras Enzimas e Fatores de patogenicidade Estafilocócicas
Típicas de S. aureus
de: Toxinas Estafilocócicas típicas de S. aureus
SUPERANTÍGENO - TSS: quadro clínico é chamado “Síndrome do Choque Tóxico”
- TSST – é o nome da “Toxina da Síndrome do Choque Tóxico”

SUPERANTÍGENO
- ENTEROTOXINA Termoestável - Enterotoxina A
- Quadro clínico: diarreia severa, de curta duração, com vômitos
OSTA
Fonte de contaminação: Cremes, produtos cárneos, aves, pudins, molhos para RESP uito
m
Imune bada
saladas Exace
r

Enterotoxina A – cromossomal
Enterotoxina B e C – plasmídeos, transposons, bacteriófagos.

Tratamento: Antibióticos não são eficazes (não há bactérias, só toxinas)

Problema: Desidratação
Detecção: Imunológico - ELISA
 S. aureus - Fatores de virulência
(continuação)

S. aureus - Superantígenos
S. aureus - Fatores de virulência (continuação)

S. aureus - Fatores de virulência

 - Staphylococcus aureus - Doenças
As doenças causadas por
Staphylococcus aureus raramente são
provocadas por isolados da pele a
menos que o paciente tenha sofrido:
Infecções severas
- Doenças debilitantes,
- Alterações hormonais,
- Ferimentos que provoquem ruptura
de barreiras da pele/mucosa,
- Usado imunossupressores
 Staphylococcus aureus - Doenças
- Infecções cutâneas purulentas (pus)
- Acne
- Foliculite
- Terçol
- Furúnculos
- Carbúnculos
- Impetigo bolhoso
- Infecções de Feridas
- Síndrome da pele escaldada
- Bacteremia, Meningite,
- Endocardite aguda
- Pneumonia, Empiema (cavidade com pus)
- Osteomielite, Artrite Séptica
Doenças causadas por S. aureus
 Staphylococcus aureus - Doenças (continuação)

Microbiologia de Brock. 14ª. ed. Fig. 29.29:

Staphylococcus aureus e suas infecções. As células
dividem-se em vários planos, dando a aparência de um
aglomerado de uvas.
(c) A estrutura de um furúnculo. Os estafilococos iniciam uma infecção
(a)Coloração de Gram; um coco individual com cerca
localizada na pele, sendo cercados por sangue coagulado e fibrina, como
de 1 mm de diâmetro.
resultado da ação da coagulase, um importante fator de virulência da bactéria.
(b)Microscopia eletrônica de varredura de uma célula. A ruptura do furúnculo libera pus, que é constituído por células mortas e
bactéria.
 Staphylococcus aureus - Doenças (continuação)

Microbiologia de Brock. 14ª. ed. Fig. 29.30: Feridas

estafilocócicas com formação de pus.
(a) Ferida típica com formação de pus em uma mão. O
(b) Abscesso em uma mão, causado por uma linhagem
pus encontra-se logo abaixo da camada epidérmica.
meticilina-resistente (MRSA). Se o tratamento não for
procurado, ou se a penicilina não for administrada primeiro,
as infecções por MRSA podem causar destruição extensa do
tecido, como mostrado aqui.
 Staphylococcus aureus - Doenças (continuação)

S. aureus - Impetigo
 Staphylococcus aureus - Doenças (continuação)

S. aureus - Síndrome da pele escalda

 Staphylococcus aureus - Doenças (continuação)

S. aureus isolado de escarro

 Staphylococcus aureus - Doenças (continuação)

S. aureus em pus
 Staphylococcus aureus - Doenças (continuação)

S. aureus e S. pyogenes em escarro

Staphylococcus aureus - Doenças (continuação)

S. aureus - endocardite subaguda

 - Resistência Bacteriana a Drogas
Staphylococcus aureus
Vem adquirindo resistência a vários antibióticos

Exemplo de SUPERBACTÉRIA
do mal !
Antibióticoterapia para
tratamento de Em Staphylococcus aureus a
Staphylococcus aureus resistência a meticilina vem
inclui: acompanhada de resistência a
vários antibióticos.
-Penicilina e derivados 
lactâmicos: Meticilina, A Vancomicina surgiu e até
Cefalotina, Oxacilina; hoje se apresenta como um
dos poucos antibióticos para
-Ciprofloxacina tentativa terapêutica de
(quinôlonico) tratamento contra MRSA
(Staphylococcus aureus
-Vancomicina Resistente a meticilina)

FONTE: MICROBIOLOGIA DE BROCK, 14ª,edição, 2016.

Outros estafilococos
Staphylococcus saprophyticus

Patogenicidade:
Se adere às células do aparelho
urinário
Staphylococcus epidermidis

Patogenicidade:
Se adere a superfície de tubos
plásticos
 Micrococcus

cocos Gram-positivos (CGP)

 r
amos conferi
Então vam
os...
o que já sabem

Identificação/
Etapa 1 –Morfologia: cocos Gram-positivos (CGP)
se +
- Catala
Identificação/ Provas bioquímicas empregadas para Identificação de CGP - O/F -
Etapa 2 – Provas
Bioquímicas:

o
Micrococcus: nã
s.
são patogênico
s
Estão presente
em vários
e
ambientes
o
também no corp
humano...
Identificação/
Etapa 2 – Provas 2. Prova Bioquímica 2: Oxidação/Fermentação de glicose (O/F)
Bioquímicas: Para a separação de Staphylococcus de Micrococcus

Staphylococcus e Micrococcus

- O/F

- +

o
Micrococcus: nã
são patogênico
s.
(-) (+)
Estão presentes
em vários Micrococcus Staphylococcu
e
ambientes
o
s
também no corp
humano...
 5. Questões para Estudo Revisão do Entendimento

1. A visualização das bactérias coradas pela técnica de Gram é importante para a

identificação de bactérias patogênicas? Responda citando um exemplo desta Aula.

2. Como são identificados bactérias do gênero Staphylococcus? Basta fazer a coloração

de Gram para identifica-los?

3. No gênero Staphylococcus há alguma espécie que causa doença que pode variar de
mo s conferir ! leve a muito grave em humanos?
Va
4. O que são fatores de virulência bacterianos?

5. Que características estão presentes em bactérias causadoras de casos de doenças

graves? Cite 2 exemplos.
CGP: bém os
6. O que são doenças piogênicas? Como elas são causadas? r a t am
Confi
occus !
Streptoc
7. O gênero Staphylococcus contem uma única espécie que pode causar doenças no
homem?

8. A antibióticoterapia é sempre eficaz para o tratamento de infecções por

!
Staphylococcus? Por que?

bri ga da
 Cocos Gram-positivos

Staphylococcus Streptococcus
Planos da divisão celular