Produção de Enzimas

Considerações Antecedentes a Produção de Enzimas

 Seleção de organismos;
Localização da enzima;
Natureza do microrganismo;
Rendimento e pureza da enzima;
Mutação.
 Seleção de Organismos

 Microrganismos localizados onde as

enzimas são abundantes;

 Microrganismo deve ser capaz de crescer

no meio de cultura escolhido e produzir
quantidade considerável da enzima.
 Localização da Enzima

 Intracelulares – Fácil separação do meio de cultura mas

difícil separação dos outros compostos celulares.

 Extracelulares – São obtidas em soluções muito diluídas

cuja a etapa de concentração também é custosa.
 Natureza do Microrganismo

Seja capaz de se desenvolver em meio simples e barato;

Não introduza no meio metabólitos secundários (antibióticos);

Excrete a enzima de forma que seja fácil a

separação e a purificação;

Não produza compostos tóxicos ou seja patogênico.

 Rendimento e Pureza da Enzima

Rendimento

A seleção do microrganismo não deve ser independente das

condições envolvidas durante a etapa de triagem.

Exemplo.: Um microrganismo selecionado para a produção de

amilase por triagem em culturas de superfície pode
ser totalmente diferente de outro selecionado por
triagem em cultura submersa.

Pureza

Pureza – Atividade específica.

 Mutação

 Melhora do organismo selecionado

para que possa ser obtido aumento na produção enzimática.

 Métodos utilizados para mutação:

Luz UV e compostos nitrogenados
Fluxograma geral de obtenção de enzimas industriais
Considerações que devem ser feitas para facilitar a escolha
dos métodos de produção
Semi-Sólido
Requer muito espaço para as bandejas;
Requer muita mão de obra;
Utiliza ar a baixa pressão; Submersa
Pouco consumo de energia; Fermentadores compactos e fechados;
Pouco controle; Requer mínimo trabalho;
Poucos problemas de contaminação; Utiliza ar a alta pressão;
Consumo considerável de energia;
Obtenção envolve extração com solução Muito controle - problemas de
aquosa, filtração ou centrifugação, e contaminação;
talvez evaporação e/ou precipitação.

Obtenção envolve filtração ou

centrifugação, e talvez evaporação
e/ou precipitação.
Ativadores e Inibidores

 Ativadores – Promovem a ativação enzimática

 Inibidores – Impedem ou dificultam a ação catalítica da

enzima

São definidos de acordo com as características estruturais

da enzima:
Seriação e natureza dos seus resíduos de aminoácidos;
Estrutura nativa terciária (conformação);
Participação ou não de íons metálicos
(cofatores inorgânicos) na molécula.

Surfactantes (agentes antiespuma)

Estimula a produção de enzimas
Enzimas Imobilizadas
 Definição

A imobilização de uma enzima é definida como seu

“aprisionamento” em uma fase diferenciada que, mesmo
estando separada, mantém um intercâmbio com a fase geral
onde se encontram dispersas e controladas as moléculas de
substratos, efetores e inibidores.
 Objetivo

A fixação das enzima em um suporte sólido e insolúvel,

permite que a mesma seja impedida de se difundir para o
meio líquido da reação, de onde o produto poderá ser
retirado e a enzima reutilizada, após simples lavagem no
próprio suporte.
 Classificação

Os métodos de imobilização são classificados de

acordo com a relação física entre o catalisador e o
material que imobiliza efetivamente a enzima.

 natureza química, envolvendo ligações covalentes iônicas

ou interações mais fracas entre suporte-enzima ou enzima-
enzima;

 natureza física, não envolvendo ligações, havendo simples

inclusão ou oclusão da enzima no suporte.
 Seleção do Método de Imobilização

A escolha do método dependerá do processo

catalítico no qual a enzima vai ser utilizada, porque fatores
como: natureza dos reagentes, solubilidade, concentração
iônica, compatibilidade com o suporte, matriz ou cápsula e
o custo.
Métodos para a Obtenção de Enzimas Imobilizadas
 Técnicas de Imobilizações de enzimas

Métodos físico-químicos:

 Imobilização por adsorção simples e de troca iônica;

 Imobilização por ligações covalentes.

Métodos físicos:

 Imobilização por oclusão em matriz;

 Imobilização em cápsulas.
 Imobilização por Adsorção Simples e de Troca Iônica

A Enzima carregada é mantida ligada

ao suporte.
Deve-se considerar que a enzima se
fixa na superfície do adsorvente,
formando camadas sucessivas cada vez
menos fortemente ligadas.

Ligações ocorrem:

- Por interações físico-químicas não específicas; por forças de Van

der Waals, pontes de hidrogênio e interações hidrofóbicas;

-Por interações de cargas iônicas (pontes salinas).

Técnica simples e barata, pois não requer reagentes, apenas um

mínimo de ativação das enzimas.
 Imobilização por Ligação Covalente

 Ligações químicas irreversíveis com o suporte;

 Ligações formadas entre os grupos funcionais da molécula da

enzima e grupos existentes no suporte, formando uma rede ou
retículo cobrindo a superfície do suporte o que impede a desorção;

A ligação covalente não deve ser drástica;

Não deve-se desnaturar a enzima e não afetar o sítio ativo da
enzima e nem a atividade enzimática.
 Imobilização por Ligação Cruzada

Liga moléculas enzimáticas entre sí, mediante pontes

formadas por reativos bifuncionais (agentes de ligações
cruzadas – glutaraldeído)

As ligações cruzadas são feitas de três formas:

 Ligações cruzadas de enzimas com glutaraldeído para

formar agregados insolúveis;
 Adsorção em superfície seguida de formação de
ligação cruzada;
 Impregnação de material poroso com a enzima seguida
de formação de ligações cruzadas entre as enzimas
contidas nos poros.
 Imobilização por Oclusão em Matriz

A Enzima é mantida retida em um gel de polímero.

Dessa forma a molécula não está ligada quimicamente ao
suporte e mantendo-se intacta

A matriz mais comum é a poliacrilamida.

Imobilização por Oclusão Cápsulas
Imobilização por Oclusão Fibras