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03.01, 43-48 (2008)

www.sbg.org.br
ISSN 1980-3540
ELETROFORESE DE CIDOS NUCLICOS: UMA PRTICA PARA O
ENSINO DE GENTICA
Emanuel Ricardo Monteiro Martinez
1
, Luiz Ricardo de Souza Paiva
1
Autor para correspondncia: Emanuel Ricardo Monteiro Martinez, Departamento de Morfologia, Labora-
trio de Biologia e Gentica de Peixes, Instituto de Biocincias, UNESP, Botucatu, SP, CEP 18618-000,
Fone: 14-3811-6264,
1
Departamento de Morfologia, Laboratrio de Biologia e Gentica de Peixes, UNESP, IB, Botucatu, So Paulo,
E-mail: emanuel@ibb.unesp.br
Palavras-chave: Ensino, Eletroforese, Gentica
Resumo
No ensino de Gentica tornam-se necessrios pr-
ticas auxiliares ao aprendizado de diversos subtemas
como, por exemplo, DNA. Neste sentido, a eletroforese
em gel de agarose possibilita a observao do DNA ex-
trado de um organismo de maneira menos abstrata do
que em um laboratrio de pesquisa. Mas, realizar esta
prtica em sala de aula torna-se muito difcil devido ao
seu alto custo. Refetindo sobre este problema, desenvol-
vemos e adaptamos a eletroforese em gel de amido de
uso culinrio, tornando o assunto DNA mais visvel, para
o entendimento das teorias a respeito.
Introduo
O conceito de DNA (cido desoxirribonuclico)
em metodologias de ensino-aprendizagem um desafo
para professores e pesquisadores envolvidos com a edu-
cao, devido, talvez, s difculdades de se abstrair a te-
oria sobre DNA e demonstr-la de forma visual, atravs
de atividades prticas. Loreto e Sepel (2003) desenvol-
veram um trabalho que apresenta prticas que facilitam
o aprendizado de temas sobre Biologia Molecular. Com
base neste trabalho, tentamos reproduzir tcnicas que po-
deriam ser aplicadas num curso de Biologia Molecular
para professores e alunos de Ensino Mdio e Superior.
Estas prticas podem facilitar o entendimento acerca do
DNA devido s difculdades de se ensinar estes conceitos
apenas em exposies orais. Porm, uma destas prticas
no era vivel do ponto de vista econmico devido uti-
lizao do gel de agarose, um material de custo elevado.
Para tentar resolver o problema, modifcamos esta pr-
tica substituindo o gel de agarose por amido de milho,
tornando-o acessvel e mais observvel em sala de aula.
As prticas reproduzidas de Loreto e Sepel (2003), que
apresentam desde extrao do DNA eletroforese modi-
fcada apresentada neste trabalho, foram ministradas em
dois cursos com aulas terico-prticas no V Workshop da
Ps-Graduao UNESP, IB, Botucatu, SP e VII Encon-
tro Maringaense de Biologia XX Semana de Biologia
UEM, Maring, PR, ambas no ano de 2005. O pbli-
co-alvo foi composto por professores e alunos do ensino
fundamental, mdio e superior.
Inicialmente proposta por Arne Teselius (1937), a
eletroforese era tcnica empregada para visualizao de
protenas com suas diferenas de comprimento de frag-
mentos de aminocidos e cargas eltricas. Atualmente,
o uso desta tcnica comum tambm para estudos com
cidos nuclicos (Brown 1998; Farah 2000). Na visuali-
zao de material gentico (cido desoxirribonuclico e
ribonuclico, DNA e RNA), utiliza-se comumente gel de
agarose por apresentar porosidade irregular, funcionando
assim como uma malha que separa o DNA, por diferena
de tamanho, dos fragmentos menores que chegam mais
rpido ao fnal da corrida eletrofortica. O DNA apresen-
ta-se com carga negativa e, devido a esta caracterstica
pode-se conduzi-lo de um plo com carga negativa para
um plo com carga positiva. Porm, este material gen-
tico tem de estar em contato com uma soluo salina que
permita a conduo eltrica atravs de ons (Figura 1).
Loreto e Sepel (2003) sugerem uma metodologia modif-
cada para eletroforese em gel de agarose aplicada ao en-
sino, mas de difcil acesso pelo alto custo da agarose. No
presente trabalho modifcamos esta prtica com a substi-
tuio de agarose por amido de milho. O amido de milho
um produto barato, facilmente encontrado e vendido em
mercados pois muito utilizado em culinria (mingaus e
cremes). Para sua utilizao so necessrias algumas mo-
difcaes para a conduo de ons na eletroforese.
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Metodologia e Resultados
1. Cuba eletrofortica
Na montagem da cuba eletrofortica, utiliza-se um
recipiente de plstico (4 cm de altura, 20 cm de compri-
mento e 12 cm de largura, podendo variar dependendo
do tamanho da forma do gel tipo Tupperware). Nas
bordas, coloca-se o fo de cobre, preso por resina epxi
nas extremidades (cantos do recipiente), enrolam-se os
fos de ao inox e prende-se com resina epxi nas ex-
tremidades inferiores das bordas, que funcionaro como
eletrodos positivos e negativos (Figura 2 a e b). Na ponta
dos fos de cobre sero presas as presilhas do tipo jaca-
r, uma presilha positiva e uma negativa, ligadas fonte
de energia (dessas de brinquedos ou de impressoras); as
fontes podero ser de 20 a 30 volts, com um tempo de, no
mnimo, 3 horas de corrida (Figura 4 b). Uma voltagem
maior poder diminuir o tempo de corrida, porm, pode-
r tornar-se perigosa em sala de aula.
2. Preparao de gel e solues
Deve-se colocar num recipiente para serem aque-
cido, os seguintes materiais o tampo Brax 18 mM
(Borato de Sdio, comum em farmcias de manipulao
- 3,8 gramas de Borato de Sdio + 1000 ml de gua); o
amido com concentrao fnal de 8% (100 ml de tBorax
+ 8 gramas de amido). Deve-se aquecer em microondas,
fogo, bico de Bunsen ou lamparina. Pode ser utilizado,
tambm, um Erlenmeyer ou Becker at o incio de fer-
vura, fazendo-se movimentos circulares. Imediatamente
aps o incio de fervura (gel viscoso), colocar em uma
forma tipo mantegueira (2 cm de altura, 14 de compri-
mento e 8 cm de largura), tomando o cuidado de no dei-
xar formar bolhas, para dar forma ao gel e solidifcar.
importante esperar cerca de 30 minutos, em temperatura
ambiente, o resfriamento, devido evaporao (Figura
3). Antes de solidifcar, coloca-se em uma extremidade o
pente plstico que moldar os poos para aplicao dos
cidos nuclicos. O pente dever ser fxado em encaixes
feitos, com uma faca aquecida, nas laterais da forma do
gel (Figura 3 d). Aps este perodo, cobre-se o gel com
saco plstico do tipo celofane e coloca-se na geladeira
para ajudar a solidifcar temperatura de 4
0
C (durante
2 horas). Solidifcado, retira-se o pente com cuidado (o
pente no pode alcanar o fundo da forma), para aplica-
o do material gentico. (Figura 4 a).
3. Aplicao do Material Gentico
No caso de uma extrao de cidos nuclicos
(DNA + RNA) caseira, do tipo descrita por Loreto e
Sepel (2003) e, tambm de acordo com sites na inter-
net (como por exemplo: http://www.odnavaiaescola.
com/atividades.html), pode-se extrair material gentico
de frutas (banana, morango), insetos (abelha), fgado de
boi; uma vez extrado o material coloc-lo em tubo (re-
cipiente pequeno destes de remdio) com ajuda de uma
seringa do tipo de insulina de 1 ml (material gentico
hidratado em gua), cerca de 2 gotas (1 , aproximada-
mente, 1 unidade de 1 ml ou uma gota); em seguida, a di-
cionam-se 2 gotas de tampo de carregamento de amos-
tra (0,5 ml de tBorax, 10 gotas de azul de bromotimol,
encontrado em lojas de aqurio ou 2 gotas de corante de
bolo, sendo necessrio acrescentar acar em ambos at
saturar, cerca de 0,15 gramas). Para manter o material
gentico nos poos, o acar liga-se ao DNA e evita a
futuao, auxiliando ainda na visualizao do material
gentico durante a corrida (colorao azulada). (Figura
4). Foram aplicadas em gel de amido diferentes amostras
para avaliar a resoluo e qualidade. Foram aplicadas em
seqncia, as seguintes amostras:
A. DNA,
B. corante de bolo,
C. azul de bromofenol,
D. DNA + azul de bromofenol,
E. DNA + corante de bolo,
F. DNA + Blue Dextran (utilizado em laborat-
rios de molecular) (Figura 4 a e 5 b).
No decorrer da corrida eletrofortica, a amostra
a no foi visualizada devido falta de um tampo de
carregamento. As demais amostras foram visualizadas
durante a corrida.
4. Corrida eletrofortica
Aps a aplicao, o gel foi colocado com sua for-
ma na cuba eletrofortica, contendo tampo Brax.
importante no deixar o gel entrar em contato direto com
o tampo, diferente do gel de agarose de Loreto e Sepel
(2003), pois o tampo poder dissolver o gel de amido.
Nesta adaptao utilizou-se uma fanela de pano (tipo
Perfex), cortada num tamanho que entrasse em contato
com o tampo e com o gel nas extremidades positivas e
negativas, por difuso h migrao dos cidos nuclicos
(Figuras 4 b, 5 b). Com a cuba eletrofortica montada,
prendem-se as presilhas nas extremidades dos fos de co-
bre, colocando a cuba em um recipiente trmico esfriado
(caixa de isopor, com gelo, para manter a temperatura e
no deixar o gel dissolver), podendo, ento, comear a
corrida eletrofortica.
Discusso
A prtica com estes materiais demonstrou ser mais
vivel economicamente quando comparado com o traba-
lho de Loreto e Sepel (2003). Em ambos os trabalhos, as
amostras contendo apenas tampo de carregamento ou
cido nuclico mais tampo de carregamento, foi poss-
vel visualizar a sua corrida, pois estes apresentam car-
gas negativas. Dessa forma importante que o professor
apresente, da forma mais clara possvel aos alunos, os
conceitos fsico-qumicos que possam auxiliar a compre-
enso da prtica.
Para o gel de amido no foi possvel corar com azul
de metileno 0,5% proposto para gel de agarose (Loreto e
Sepel, 2003) pois este se dissolve. Na prtica com o ami-
do deve-se focar a corrida eletrofortica, que mostra,
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didaticamente, como amostras com carga negativa mi-
gram e, desta forma, simbolizam o material gentico.
Aconselha-se que o professor deva realizar esta
prtica em duas partes, devido demanda de tempo que
ela exige. Na primeira parte, a montagem da cuba ele-
trofortica, do gel, aplicao das amostras e incio de sua
corrida um dia antes, para que esses resultados possam
ser visualizados e apresentados aos alunos. No dia da
aula, o professor dever mostrar estes resultados aps
uma exposio terica dos conceitos e, juntamente com
os alunos, elaborar e montar a prtica eletrofortica.
Concluso
A eletroforese em gel de amido torna-se uma pr-
tica barata e de fcil demonstrao, comprovada em cur-
sos ministrados por ns. Uma prtica que contribui para
o entendimento do DNA e para a assimilao de conhe-
cimentos multidisciplinares.
Agradecimentos
Ao Laboratrio de Biologia e Gentica de Peixes
por ceder o espao fsico para o desenvolvimento deste
trabalho.
Referncias
Brown, T. A. (1999) Gentica um enfoque molecular. 3
a
Ed.,
Guanabara Koogan. Rio de Janeiro, R.J.
Farah, S. B. (2000) DNA: Segredos e Mistrios. Savier. So Paulo.
SP.
Loreto, E. L. S. e Sepel, L. M. N. (2003) Atividades Experimentais
e Didticas de Biologia Molecular e Celular. 2
a
Ed., Sociedade
Brasileira de Gentica. Ribeiro Preto. SP.
Tiselius, A. (1937) A new apparatus for electrophoretic analysis of
colloidal mixtures. Biochem. J. 31, 1464.
http://educar.sc.usp.br/licenciatura/2003/siteprojeto/2003/6_enzima_
e_gel.pdf
http://www.google.com.br
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Figura 1. Eletroforese em gel de agarose. O material gentico com carga negativa migrando na malha do gel do
plo negativo para o plo positivo. Fonte: www.google.com.br http://educar.sc.usp.br/licenciatura/2003/siteproje-
to/2003/6_enzima_e_gel.p
Figura 2. Materiais utilizados para Eletroforese: a. Cuba eletrofortica e acessrios; b. Viso interna da cuba ele-
trofortica, seta vermelha indica o fo de cobre e a seta branca o fo de ao inox; c. Forma para o gel de amido e
pente para formar os poos no gel de amido.
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Figura 3. Montagem do gel de amido: a. Materiais necessrios para o preparo do gel; b. Aquecimento do amido de
milho; c. Colocao do amido de milho fervido na forma; d. Forma com gel esfriando.
Figura 4: a. Aplicao das amostras no gel; b. Corrida eletrofortica.
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Figura 5: a. Corrida eletrofortica com viso da cuba e fonte; b. Migrao do material gentico e tampes de
carregamento do plo negativo para o plo positivo (Poos: A. DNA; B. corante de bolo; C. azul de bromofenol;
D. DNA + azul de bromofenol; E. DNA + corante de bolo; F. DNA + Blue Dextran (utilizado em laboratrios de
molecular).