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7 - Preparo de Meios
7 - Preparo de Meios
AULA PRTICA n
Fuso do gar
Banho-maria ou processo que seja
efetivo;
Aquecimento o tempo mnimo necessrio;
Armazenamento de 45-49C por no
mximo 4 horas;
No fundir novamente se solidificado.
Adio de suplementos
Meio resfriado a 45-49C;
Se retirados do refrigerador aguardar
atingir temperatura ambiente;
No reaquecer.
Distribuio em placas
Camadas de aproximadamente
2mm;
Superfcie fria e plana para solidificao.
MATERIAIS
Agar (tubos inclinados) e caldo nutriente;
Caldo EC;
Agar batata dextrose (PDA);
cido tartrico 10%;
gua destilada.
PROCEDIMENTO
Prtica
Preparo de meio lquido: caldo EC e caldo AN
Pesar o meio de cultura em papel
alumnio e, a seguir, transferi-lo para um
balo de fundo chato;
Verter sobre o papel de filtro uma
pequena quantidade de gua para
arrastar todo o meio;
Adicionar gua deionizada ou destilada ao
meio de cultura;
Colocar a boneca nos bales e a coifa de
papel com o nome do meio e a data;
Autoclavar a 121C por 15 minutos;
Distribuir em tubos esterilizados a
quantidade necessria para anlise.
OBS.: ACOMPANHAR O PROCESSO DE
ESTERILIZAO!!!!
Prtica
Preparo de meio slido (Agar nutriente e PDA)
Pesar o meio de cultura em papel
alumnio e, a seguir, transferi-lo para
um balo de fundo chato;
Verter sobre o papel de filtro uma
pequena quantidade de gua para
arrastar todo o meio;
Adicionar gua deionizada ou gua
destilada ao meio de cultura;
Levar o balo com o meio para um
banho-maria
a
60C
durante
20minutos. A cada 3 minutos,
homogeneizar para a dissoluo do
meio de cultura;
1. Para o PDA
Colocar a boneca nos bales e a coifa
de papel com o nome do meio e a
data;
Autoclavar a 121C por 15 minutos;
Aps a autoclavagem, levar o meio
para um banho-maria a 50C at o
momento do uso.
2. Para o Agar nutriente:
Distribuir em tubos e autoclavar a
121C por 15 minutos;
Aps a autoclavagem, inclinar tubos.
OBS.:Plaqueamento: Agar PDA
Destampar o balo na zona estril de
um bico de Bunsen, flambando a
boca para impedir a entrada de
eventuais microrganismos;
Resfriar at a 46-48C. Adicionar
cerca de 1,5 mL de soluco aquosa
de cido tartrico 10% para cada 100
mL, de forma a baixar o pH at 3,5.
Verter entre 18mL e 20mL do meio de
cultura em placas de Petri estreis
EXERCCIOS DE FIXAO
1. Por que os microbiologistas utilizam meios
quimicamente definidos?
2. Por que o Agar o agente solidificante
ideal para uso em microbiologia?
3. Qual a constituio do Agar? Qual a
finalidade da sua incorporao nos meios
de cultura?
4. Quando um microbiologista utiliza um
meio de enriquecimento para o cultivo de
microrganismos?
5. Qual a composio dos meios EC, PDA e
Agar
nutriente?
Quais
as
suas
finalidades?
6. Por que tem que abaixar o pH do meio
PDA aps a esterilizao para sua
posterior utilizao?
REFERNCIAS
OKURA, M. H. & RENDE, J. C. Microbiologiaroteiros de aulas prticas. So Paulo: Tecmedd,
2008.