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Apostila Biomol PDF
Apostila Biomol PDF
Autoras:
Cristina Maia Equipe de Biologia/Extenso Consrcio CEDERJ
Denise Lannes Professora Adjunta/Instituto de Bioqumica Mdica/UFRJ
Consultora:
Silvia Regina Turcinelli Centro de Biologia Molecular e Engenharia Gentica (CBMEG)/UNICAMP
Ao cursista
Se para ns, que aparentemente, temos uma certa intimidade com estes termos e seus significados, tudo parece
um tanto complexo, imagine para os nossos estudantes que alm de serem obrigados a compreend-los ainda
passam pelo fogo cruzado que estabelecer relaes entre os mesmos.
Ao mesmo tempo em que conceitos bsicos ainda causam uma certa confuso, muitas informaes novas
chegam at ns por meio da mdia e acabamos tendo que dar explicaes, algumas vezes muito mais profundas
do que espervamos, quando os alunos, instigados pela forma como as notcias so veiculadas, vm nos
questionar...
Portanto, pensamos ser esta uma boa hora para trazer os conceitos bsicos para serem discutidos e utilizados
em sala de aula como fundamentos, tentando entender a enorme quantidade de informao nova produzida em
to curto espao de tempo.
A Biologia Molecular no nada alm do que o estudo em nvel molecular das questes relacionadas
hereditariedade e evoluo dos organismos vivos. A podemos incluir toda a Gentica, inclusive o
conhecimento relacionado ao DNA e seus mecanismos de ao. Questes envolvendo engenharia gentica,
clones, transgnicos, vacinas de DNA, vrus de RNA, bibliotecas genmicas, clonagem, clulas tronco, terapia
gnica, Projetos Genoma (caf, cana-de-acar, eucalipto, Xilella fastidiosa) e Projeto Genoma Humano/Projeto
Genoma do Cncer utilizam como base tanto os conhecimentos de Biologia Molecular quanto os da Gentica
clssica.
Certamente, nestas poucas pginas, no esgotaremos o assunto, mesmo porque esse no o nosso objetivo.
Nossa inteno fornecer a voc, caro professor, espao para ler e, principalmente, discutir sobre este assunto
to novo e j com tanta histria para contar!
Seja bem-vindo e divirta-se com a gente!
HISTRIA DA CINCIA DA GENTICA BIOLOGIA MOLECULAR
No ltimo sculo temos assistido uma corrida cientfica, particularmente na rea de Biologia Molecular. Hoje,
vemos a todo o momento, principalmente na mdia, notas envolvendo temas tais como terapia gnica e
transgnicos entre outros. Muitos vem a Engenharia Gentica como um novo campo, mas de fato as tcnicas
utilizadas hoje so resultado da unio de vrios conhecimentos produzidos pelas mais diferentes reas do saber
e muita pesquisa a qual vem sendo realizada ao longo de mais de 125 anos. A linha do tempo aqui apresentada
mostra descobertas chaves que culminaram no Projeto Genoma Humano, um esforo internacional, o qual visava
a decifrar a seqncia de trs bilhes de pares de bases de subunidades de DNA que se encontram nos
cromossomos humanos.
Gregor Mendel publicou os resultados dos seus trabalhos realizados com ervilhas do
tipo Pisum sativum. Aps vrias geraes de cruzamentos Mendel foi capaz de
postular suas regras gerais de herana gentica. Ele props que havia discretas
unidades de hereditariedade (que hoje chamamos de genes) que eram transmitidas
de gerao para gerao, mesmo que algumas caractersticas no fossem expressas
em todas as geraes, elas voltavam a aparecer.
O trabalho de Mendel passou a ter grande reconhecimento no meio cientfico apenas
a partir do incio do sculo XX. Atualmente, sabe-se que as teorias de Mendel so
apenas parcialmente vlidas. No entanto, unicamente dele o mrito de ter provocado
o primeiro grande salto na histria da cincia quanto formulao das teorias sobre os
mecanismos que regem a transmisso de caractersticas hereditrias.
Miescher isolou o DNA pela primeira vez. A descoberta do DNA ocorreu em 1869 e foi
feita pelo bioqumico alemo Johann Friedrich Miescher. Ele queria determinar os
componentes qumicos do ncleo celular e utilizava glbulos brancos provenientes do
pus em sua pesquisa. A escolha desta clula deveu-se disponibilidade e tamanho do
ncleo. Analisando os ncleos, Miescher descobriu a presena de um composto de
natureza cida que era desconhecido at o momento. Era rico em fsforo e em
nitrognio, desprovido de enxofre e resistente ao da pepsina (enzima proteoltica).
Esse composto, que aparentemente era constitudo de molculas grandes, foi
denominado, por Miescher, nuclena.
A Biologia Molecular nasceu em novembro de 1943 com a publicao de um artigo num nmero da revista
Genetics (publicado em 1944), assinado por Salvadore Luria e Max Delbrck com o ttulo: Mutations of bacteria
from virus sensitivity to virus resistance (Genetics.1943. vol:28, page:491).
Este artigo demonstra que a resistncia (hereditria) de uma bactria particular (Escherichia coli tipo B) a um
vrus especfico (alpha, hoje em dia chamado T1) uma propriedade adquirida pela bactria antes de entrar em
contato com o vrus. Dito de outra forma: o fentipo hereditrio no resulta da adaptao da bactria ps-
contato com o vrus, mas sim de uma mutao gentica prvia.
Essa demonstrao revelou-se fundamental na histria da Biologia. a prova formal que a teoria da evoluo
das espcies proposta por Darwin correta na essncia, enquanto que Lamarck, e a hereditariedade dos
caracteres adquiridos, ficaram definitivamente enterradas.
Amabis e Martho
1953 O modelo da dupla hlice para o DNA... Um marco histrico!
Crick and Wilkins, junto com Watson, propuseram o modelo da dupla hlice do DNA. Watson e Crick
identificaram a estrutura em dupla hlice do DNA aps analisar uma imagem da molcula por difrao de raios X
realizada por Rosalind Franklin. Crick, Wilkins, e Watson receberam o prmio Nobel de Medicina e Fisiologia em
1962.
Atividade Extra
Hipcrates j dizia...
Por mais surpreendente que possa parecer, um dos grandes obstculos para se compreender a natureza a
incapacidade de se formular a pergunta apropriada. Os filsofos e pesquisadores gregos na antiguidade j
sabiam que o questionamento a ser feito era a chave para desvendar os muitos mistrios que percorriam suas
mentes j naquela poca. Muitas questes precisavam de respostas. Uma delas era a questo da
hereditariedade.
Qual a natureza da hereditariedade? Era a grande questo a ser respondida.
Desde Hipcrates (~410 a.C.), na Grcia antiga, esta questo vem povoando a imaginao de muitos estudiosos.
Hipcrates, considerado o Pai da Medicina, poderia tambm ser aceito como um dos Pais da Gentica. Por volta
do ano 410 a.C., ele props a pangnese como uma hiptese para explicar a hereditariedade. A pangnese
admitia que a hereditariedade baseava-se na produo de partculas por todas as partes do corpo e na
transmisso dessas partculas para a descendncia no momento da concepo. Darwin iria adotar essa mesma
hiptese muitos sculos depois, tendo a pangnese permanecido como a nica teoria geral de hereditariedade
at o final do sculo XIX. Hipcrates props tambm o conceito de hereditariedade de caracteres adquiridos.
Por sua vez, um pouco mais tarde, Aristteles (~350 a.C.), embora admitisse que a hiptese de Hipcrates
estivesse correta em alguns pontos, criticou outros e props novas reflexes que at hoje so consideradas no
estudo da hereditariedade.
Aristteles admitia a existncia de uma base fsica da hereditariedade no smen produzido pelos pais. Esse
ponto, to bvio nos dias de hoje, foi fundamental para todo trabalho posterior na rea. Essa idia permitiu que
se deixasse de atribuir hereditariedade uma base sobrenatural ou emocional e se passasse a pens-la como
resultado da transmisso de algum tipo de substncia pelos pais. Naquela poca (350 a.C.), cerca de quatro
sculos antes de nossa era, sabia-se muito pouco a respeito da natureza do smen. Aristteles usou o termo
smen como ns usamos gametas atualmente e no para designar a secreo dos machos que contm os
espermatozides. O papel dos gametas na reproduo s foi estabelecido em meados do sculo XIX. Estes e
muitos outros argumentos levaram Aristteles a rejeitar a pangnese e a perguntar: Por que no admitir
diretamente que o smen... origina o sangue e a carne, ao invs de afirmar que o smen ele prprio tanto
sangue quanto carne?
Durante os sculos XVIII e XIX, o procedimento padro de se procurar informaes a respeito de hereditariedade
era por meio de cruzamentos e retrocruzamentos (experimentos de retrocruzamento so realizados at os dias
de hoje apenas entre espcies pertencentes ao reino vegetal e espcies do reino animal consideradas cobaias
(drosfilas e camundongos), por questes ticas e de co-sanginidade). Eram feitos cruzamentos entre
indivduos com estados contrastantes das caractersticas e a descendncia era analisada. At hoje esse um
dos procedimentos mais poderosos para se obter informaes a respeito de hereditariedade.
Mas a questo promordial - Qual a natureza da hereditariedade? - continuou sem resposta durante muitos
sculos. Pouco progresso foi feito no campo da hereditariedade at o final do sculo XIX. Assim, poucas coisas
relevantes no campo do estudo da hereditariedade aconteceram no perodo entre Aristteles (384-322 a.C.) e
Gregor Mendel (1822-1884), mas nesse perodo foram estabelecidas as bases da investigao cientfica.
Os experimentos mais famosos de Mendel foram realizados com ervilhas de jardim, no monastrio onde vivia.
Foi a partir dessas experincias que ele estabeleceu as leis que hoje levam seu nome: Mendel realizou centenas
de cruzamentos entre plantas de caractersticas diferentes, porm da mesma espcie, anotando os resultados e
observando que certas caractersticas das plantas resultantes de sucessivos cruzamentos predominavam em
proporo c onstante.
Ele concluiu que, ao contrrio de outros organismos que se reproduzem sexualmente, as plantas das ervilhas
produzem sua prole por meio da unio de gametas clulas reprodutivas, ou seja, espermatozides no homem e
vulos na mulher.
Embora a questo da hereditariedade seja bem mais complicada do que o cruzamento de ervilhas, Mendel
descobriu um princpio gentico fundamental: a existncia de caractersticas como a cor das flores que, segundo
ele, devida a um par de unidades elementares de hereditariedade, hoje conhecidas como genes.
As famosas Leis de Mendel:
1. A primeira lei tambm conhecida por princpio da segregao dos caracteres, em que as clulas
sexuais, femininas ou masculinas, devem conter apenas um fator para cada caracterstica trans mitida.
2. A segunda lei trata do princpio da transferncia dos caracteres, isto , cada caracterstica hereditria
transmitida independentemente das demais.
3. Na terceira lei, Mendel formulou os conceitos da dominncia, em que os seres hbridos apresentam um
carter dominante que encobre segundo determinadas propores o chamado carter recessivo.
Mendel apresentou seu trabalho para uma sociedade de cincia natural local em 1865 em um artigo intitulado
"Experiments with Plant Hybrids."
Para ver o trabalho original de Mendel (em ingls) acesse:
http://www.geocities.com/joab_br/mendel/gm-65.pdf
Em 1900, pesquisas independentes realizadas por outros pesquisadores confirmaram os resultados de Mendel.
Observando os trabalhos ao longo do tempo, notamos uma pequena mudana a cada passo do estudo da
hereditariedade, incluindo e questionando as hipteses e os postulados propostos ao longo da histria do
conhecimento.
Proposio no evidente nem demonstrvel que se admite como princpio de um sistema dedutvel, de uma
operao lgica ou de um sistema de normas prticas. (Novo Dicionrio Aurlio)
Qualquer seleo de proposies pode constituir um conjunto de postulados. O termo postulado s tem
significado se relacionado com um processo de investigao.
http://blogexperimental.blogs.sapo.pt/arquivo/2004_05.html
Os postulados no precisam ser comprovados experimentalmente. Pelo contrrio, so proposies que podem
levar a construo de teorias.
QUESTES
1. Identifique e descreva os paradigmas quebrados durante este perodo por Aristteles e depois por Mendel.
2. Considerando estas informaes discuta a importncia da quebra de paradigmas na Cincia.
Paradigmas
Como diz Popper (Karl Raimund Popper 1902/1994, filsofo da cincia, nascido na ustria e naturalizado
ingls): cada problema surge da descoberta de que algo no est de acordo com nosso suposto conhecimento;
ou, examinado em termos lgicos, da descoberta de uma contradio interna entre nosso suposto conhecimento
e os fatos.
As hipteses provisrias so, ento, submetidas a testes que ofeream as mais severas condies para a crtica.
Mas os nicos testes possveis so aqueles que, eventualmente podem mostrar que a hiptese falsa. No
existe maneira em cincia de se mostrar que uma hiptese correta ou verdadeira. Assim, as hipteses
cientficas se credenciam por meio de testes de falseabilidade. Isso quer dizer que em cincia, podemos ter
certeza quando estamos errados, mas nunca poderemos ter a certeza de estarmos certos.
Segundo Bombassaro (Luis Carlos Bombassaro, professor de filosofia da Universidade Federal do Rio Grande
do Sul): Especialmente em cincia, aquele que julga ter encontrado uma resposta conclusiva d mostras no
somente de seu fracasso, mas tambm do fracasso da prpria cincia. Aquele que for incapaz de transpor os
limites do pensamento dogmtico, impostos pela educao cientfica formal, e no aceitar o jogo do pensamento
crtico est longe de fazer cincia, pois no poder resistir constante transformao das teorias, mudana
conceitual e ao cada vez mais clere avano do conhecimento.
A contribuio de Thomas Kuhn (1922/1996 - fsico e filsofo americano)
No livro The Structure of Scientific Revolutions, publicado em 1962, Thomas Kuhn defendeu a idia de que o
progresso em cincia se d em duas etapas que poderamos caracterizar como ajustes e mudanas drsticas,
ou, para ser mais atual, por um equilbrio pontuado. Kuhn salienta que, de tempos em tempos, ocorre uma
revoluo na maneira como os cientistas vem seus problemas de pesquisa e os tipos das observaes e
experimentos que devem realizar. Alguma grande idia, audaz e inslita, os leva a ver os dados existentes sob
uma nova perspectiva, sugerindo um novo programa de pesquisa. Estas grandes idias so, na terminologia de
Kuhn, paradigmas as realizaes cientficas reconhecidas universalmente que durante um certo tempo
fornecem modelos de problemas e solues para uma comunidade de cientistas .
Quer saber mais sobre isso? Acesse:
http://dreyfus.ib.usp.br/bio201/texto1.pdf
Atividade Extra
Eram os genes astronautas?
O nome gene, no caiu do cu. uma criao humana, para dar conta de um novo tipo de pensamento.
Ele foi criado pelo bilogo dinamarqus Wilhelm Johannsen, em 1909, para denominar os pares de fatores de
Mendel e as gmulas, unidades da hereditariedade criadas pelo naturalista ingls Charles Darwin (1809-1882),
adotadas no lugar dos determinantes criado pelo bilogo alemo August Weismann (1834-1914), que, por sua
vez, substituram pangenes propostos pelo geneticista holands Hugo de Vries (1848-1935) que se inspirou em
Hipcrates para cunhar o termo.
Etimologicamente, o nome gene origina-se de gnos, radical do verbo grego ggnesthai, que significa nascer.
Assim, gnos pode ser entendido como origem, o que gera, o que produz. Desde Mendel at os dias atuais,
as definies de gene tm se modificado. Os Genes, que no incio eram Pares de Fatores mendelianos,
constituam-se, desta forma, em objetos construdos, sendo sua existncia material s entendida dentro de uma
teoria.
Com essa nova palavra, evitava-se o preconceito e assim abria-se a possibilidade do avano do conhecimento
cientfico nessa rea. Gene a palavra que abre a possibilidade para uma revoluo revoluo no sentido
utilizado pelo filsofo norte-americano Thomas Kuhn (1922-1996), em que novas premissas (paradigmas ou
teorias) requerem a modificao das antigas teorias e a reavaliao dos fatos conhecidos. Essa no uma
mudana fcil ou simples. A ela se ope a comunidade cientfica estabelecida, pois so os integrantes dessa
comunidade os criadores das teorias vigentes a serem testadas, at que apresentem fraquezas reconhecidas
pelos cientistas.
O conceito original continua vlido. Genes so entidades responsveis pela transmisso das caractersticas de
uma gerao a outra.
Estes pares de fatores comearam a ganhar materialidade com a teoria cromossomial de herana, como contas
em um colar, at que a elucidao da estrutura do DNA lhes deu um corpo molecular. assim, que estes pares
de fatores ganham materialidade. A perspectiva molecular parecia destinada a uma menor instabilidade.
Contudo, ao contrrio de correntes filosficas que, de um modo geral, permanecem fechadas em suas verdades
primeiras, as cincias esto abertas, sujeitas a novos fatos. Estes vm e denunciam que os genes
apresentam um comportamento mais complexo do que se podia sonhar.
A decifrao do cdigo gentico, na dcada de 1960, trouxe novas e instigantes questes: "Toda seqncia de
DNA um gene? Qual o papel do DNA que no codifica protenas? Na molcula de DNA, onde comea e onde
termina um gene?
A existncia de inmeros processos moleculares passa a inviabilizar a aceitao passiva de definies de gene
baseadas em seqncias definidas de DNA ou a partir de uma viso esttica, ou mesmo nica, para o gene.
Estas vises no mais se sustentam, sendo reformuladas diante de uma nova realidade.
Gene tambm j foi definido, mais recentemente, como uma seqncia de DNA que codifica (transcreve)
molculas funcionais de RNA. O "incio" de um gene definido por uma regio do DNA chamada regio
promotora ou simplesmente promotor, na qual h uma seqncia de bases (iniciadora) que marca o incio da
transcrio.
O trmino do processo definido por outra seqncia de bases - regio terminadora. H grandes seqncias
de DNA localizadas entre os genes e que nunca so transcritas. Algumas delas participam da ativao e da
desativao dos genes e do controle da transcrio.
Mas ser que estas definies e explicaes satisfazem todas as dvidas referentes presena de estruturas
com funes ainda no definidas? Qual o papel do DNA que no codifica protenas? Toda seqncia de DNA
um gene? Onde comea e onde termina um gene?
Acredita-se, ento, que esta situao pode ser melhor compreendida de duas formas:
1. Com a adoo de uma lgica que permita uma viso mais ampla e aberta, que reconhea o gene como um
processo, que assuma a contradio e a totalidade, a mediao recproca e o movimento; que enxergue a
realidade dos fenmenos e no das coisas. Em sntese, uma lgica dialtica;
2. Percebendo que o gene volta s suas origens, ou seja, s pode ser entendido como objeto construdo
racionalmente. Sua real existncia dependente dos modelos tericos que lhe do sentido. Fora destes modelos
este objeto no se sustenta. Sua utilidade terica se dissipa.
Todos essas termos, considerados poca, conceituais, estavam ligados de alguma forma a teorias da
hereditariedade preformacionistas. A teoria do preformacionismo j no era mais coerente com o conhecimento
da poca de Johannsen.
O preformacionismo sugeria que as geraes de novos seres se formavam a partir de pequenos seres
(microscpicos ou no) pr-formados que apenas cresceriam dando origem a seres maduros. Este conceito se
manteve at o incio do sculo XIX, quando ainda era defendido por Charles Darwin.
QUESTO
Discuta sobre a importncia da criao do termo GENE para o avano do conhecimento cientfico na rea.
Atividade Extra
Atividade: O show no pode parar...
O DNA a molcula que carrega a informao gentica. Para que isto possa ocorrer sem grandes riscos de
erros, estas informaes devem ser passadas ao longo das geraes de seres e para cada clula do organismo
e suas mais diferentes funes.
Reflita e responda mentalmente: que processo ou quais processos permite(m) que estas informaes contidas no
DNA passem de uma clula para outra, de gerao para gerao, perpetuando as espcies e ainda mantendo a
maioria das caractersticas e funes intactas?
Ainda que possa parecer, esta no uma pergunta muito difcil, mas envolve todo um processo que parece ter
sua razo de ser, ou seja, at que algum demonstre algo diferente, pois estamos trabalhando com conceitos
baseados em modelos...
A formao de novas molculas de DNA deve garantir a integridade das informaes que elas carregam. Por
isso cada etapa desta replicao deve ser revista. E para garantir que as informaes originais no se percam
este processo semi-conservativo. A replicao onde ocorre separao das duas fitas de uma molcula parental
de DNA, exposio das bases nitrogenadas e subseqente formao de duas novas molculas em dupla-hlice
conhecida como semi-conservativa, pois cada nova molcula ir conter um filamento parental e outro recm
sintetizado.
A replicao de uma molcula de DNA tem incio nas origens de replicao (ori=seqncias especficas de
nucleotdeos reconhecidas por enzimas).
Bactrias possuem apenas uma ori. Os Eucariontes apresentam centenas ou milhares de oris em cada
cromossomo.
A replicao, mesmo que de uma seqncia de DNA (genoma) linear relativamente pequena, como o de alguns
tipos de vrus, por exemplo, costuma se iniciar a partir de um ponto interno no genoma.
O DNA circular das bactrias tambm se replica a partir de um nico ponto (e, necessariamente, interno).
Seqncias de DNA (genomas) maiores apresentam mltiplas origens de replicao. Para cada lado da origem a
replicao avana, de tal forma que duas "forquilhas" acabam se encontrando.
Antes de mais nada, para que todo o processo se inicie, a dupla hlice de DNA precisa girar e desenrolar-se.
Nesta etapa entram em ao as DNA-topoisomerases, enzimas capazes de fazer o DNA girar. Aps essa
etapa, necessrio que ele se desenrole... Entram em ao as helicases.
OBS. Para prevenir a degradao das fitas que ficam abertas e expostas, mesmo que por um pequeno intervalo
de tempo, atuam as SSBs (protenas que se ligam a fitas simples de DNA).
Fitas abertas, bases expostas, entram em ao as DNA polimerases.
Inicia-se, ento a sntese de uma nova fita complementar para cada fita original. Uma contnua e outra
descontnua, formada a partir de fragmentos de bases chamados de Fragmentos de Okazaki. A ligao de
todos os fragmentos de okazaki ocorre atravs da ao da DNA ligase .
OBS. Erros que por ventura vierem a ocorrer durante o processo de ligao fragmentos de okazaki so corrigidos
pela DNA polimerase .
Cada vez que um trecho suficientemente longo de DNA fita simples est disponvel, inicia-se a sntese de um
novo Fragmento de Okazaki, de dentro para fora da forquilha. Aps sua sntese uma enzima liga o fragmento
recm sintetizado ao fragmento sintetizado anteriormente.
Desta forma engenhosa a sntese das novas fitas de DNA sempre feita no sentido 5 3.
Lembre-se: Cada uma das duas fitas de uma molcula de DNA utilizada individualmente como molde, e cada
uma das duas fitas novas sintetizadas estar ligada ao seu molde.
O incio da sntese das fitas novas se faz a partir do ponto de origem de replicao (ori), onde o DNA se abre
para que a cpia das novas fitas possa comear a agir.
O processo requer um fragmento curto de DNA ou RNA, com a extremidade 3OH livre, em fita simples ligado
fita molde, onde a enzima comear a encaixar os nucleotdeos. Esse fragmento, chamado de primer ou
iniciador, sintetizado por uma outra enzima, a primase.
A conseqncia final deste mecanismo de adio de primers ou iniciadores antes da extenso das fitas novas
que haver trechos de RNA entre longos segmentos de DNA na fita descontnua. E mesmo na fita contnua
haver pelo menos um primer de RNA seguido de toda a fita feita com DNA. Ser esta a situao final do DNA
fita dupla replicado?
evidente que no. Heterohbridos RNA-DNA no so estveis. Eles tm que ser retirados do DNA maduro.
Para isto entra em ao a atividade corretora da enzima DNA polimerase I (at agora vnhamos falando de
uma DNA polimerase sem citar sua denominao completa, que DNA polimerase III).
A DNA polimerase I reconhece defeitos ou erros diversos no DNA, inclusive a presena de RNA, mesmo que
pareado ao DNA (neste caso a base nitrogenada Timina substituda pela Uracila). Atravs de uma atividade
exonucleotdica 5-3, a DNA polimerase I retira o primer, ao mesmo tempo em que, empregando a hidroxila
livre da extremidade 3 do Fragmento de Okazaki j sintetizado e situado na extremidade 5 do stio reparado,
ressintetiza o espao deixado, desta vez com DNA. Por fim a enzima ligase completa a ligao entre os
fragmentos de Okazaki.
A figura a seguir mostra um modelo de replicao mais completo do que os habitualmente representados nos
livros. preciso entender aqui que a forquilha no existe de fato, mas sim no contexto de uma replicao
bidirecional, em que duas forquilhas, apontando em sentidos opostos, se abrem e permitem a replicao do
DNA.
http://150.161.28.140/professores/ppa/biolmol/aula2_DNAestrutrep.htm
Figura: Representao da forquilha de replicao, onde esto mostradas as principais enzimas e cofatores que formam o
complexo de replicao (replicossomo): DNA polimerase III (duas molculas), RNA primase e helicase. A helicase uma
topoisomerase, responsvel pela abertura da forquilha. As duas DNA polimerase III mostradas trabalham de fato em
conjunto, na mesma direo; para isto a fita de DNA que replicada descontinuamente forma uma ala e a DNA
polimerase III nesta fita periodicamente "larga" a fita e retoma o servio num ponto mais interno. (figura extrada do livro The
Cell: A molecular Approach, de J. Cooper, Sinauer Assoc. Co., disponvel on-line no Bookshelf do NCBI)
Ora, a primase no adiciona primers no incio dos cromossomos lineares. Sendo assim, de que forma se
replicam as pontas dos cromossomos?
Sabemos que cromossomos tm muitas origens de replicao, mas o problema da ponta persiste. Se no
possvel adicionar um primer, ento as pontas dos cromossomos vo sendo encurtadas, porque no seria
possvel replic-las. Isto de fato acontece: na fita descontnua, sintetizada a partir do molde de DNA fita
simples parental, um primer adicionado um pouco antes do final do molde pela DNA primase, aps a sntese
do fragmento de Okazaki correspondente, o primer retirado, sobrando um pequeno trecho a ser recomposto.
Se isto no ocorrer, e de fato no ocorre, a fita simples de DNA ser eliminada e o DNA ficar mais curto
um pouco. Ao longo de mltiplas replicaes a tendncia seria desaparecer o cromossomo!
Os eucariotos, que tm cromossomos lineares, possuem uma enzima, chamada telomerase, que adiciona uma
seqncia de bases definida, repetindo muitas vezes esta operao, cada vez que detecta um encurtamento
significativo da extremidade de um cromossomo. Neste processo a integridade do cromossomo garantida.
Por isso tambm as extremidades de todos os cromossomos de uma mesma espcie eucariota so
iguais e formadas pelos telmeros.
Figura: Replicao telomrica: a figura identifica as reaes envolvidas na formao de seqncias ricas em G (base
Guanina), que formam as extremidades dos cromossomos (telmeros). A fita incompleta sempre descontnua, recm
sintetizada e iniciada num primer de RNA, j retirado na figura. Como indicado, a telomerase um complexo RNA-
protena que tm um molde de RNA para a sntese de uma seqncia de DNA rica em G. Estas repeties tm a
seqncia GGGTGG em Tetrahymena (um protozorio ciliado), GGGTTA em humanos e G1-3A em Saccharomyces . A
telomerase apenas alonga a fita contnua, pela adio de um nmero variado de telmeros. A fita descontnua
ento parcialmente completada pela DNA polimerase, que tem a primase como uma de suas subunidades (figura
baseada no livro Molecular Biology of the Cell , Alberts e cols., Garland Publ, tambm disponvel no Bookshelf do NCBI).
Conseqncias:
Antiparalelismo: As pontes de hidrognio s podem ser formadas adequadamente se as fitas forem antiparalelas,
ou seja, complementares, mas no idnticas.
Os esqueletos acar/fosfato das duas fitas so antiparalelos, o que significa polaridade qumica oposta.
A estrutura em hlice, ento, ser estabilizada graas a vrios fatores, entre eles:
ligaes covalentes que formam cada fita;
interaes hidrofbicas entre as bases;
ligaes de hidrognio entre as bases;
Foras de Van der Walls devido ao empilhamento das bases;
Interao de ctions com esqueleto acar fosfato.
Foras de Van der Walls = Fora de atrao no especfica entre dois tomos com capacidade de fecharem-se
sobre si mesmos (atrao fatal). No levando-se em conta a carga (positiva/negativa) dos mesmos, mas sim a
proximidade entre as molculas.
Atividade Extra
Cromossomos... Quem somos?
Os cromossomos de procariotos e eucariotos so bem diferenciados. Inclusive na sua organizao dentro da
clula. A organizao da clula eucaritica favorece a diviso celular. Neste perodo deve ocorrer a mitose em
clulas somticas (com algumas excees).
Os procariotos so monoplides, enquanto muitos dos animais e vegetais superiores so diplides, tendo dois
conjuntos de genes, um de cada progenitor. H tambm vrias plantas poliplides, carregando vrias cpias do
genoma. A informao gentica da maioria dos procariotos armazenada em um nico cromossomo.
Eucariotos possuem cromossomos so organizados de maneira particular. Na composio qumica da cromatina
constam protenas, DNA e RNA (este ltimo em menor quantidade). As protenas so de duas classes: (1)
protenas bsicas, chamadas histonas; e (2) protenas cidas, chamadas de protenas cromossmicas no-
histnicas. As histonas desempenham um importante papel na estruturao do cromossomo. Tanto que sua
proporo no ncleo de 1:1 (peso/peso) em relao ao prprio DNA. Cada cromossomo uma molcula de
DNA. Ou seja, cada perna (cromtide) do cromossomo formada por uma fita dupla de DNA e protenas.
A estrutura da cromatina dos eucariotos composta de subunidades repetidas chamadas nucleossomos. Estes
consistem de um segmento de DNA de 146 pares de nucleotdeos de comprimento, enrolado em torno da
superfcie um tanto cilndrica do octmero de histonas, produzindo uma estrutura aproximadamente elipside.
Pelo menos cinco nveis de condensao so necessrios para empacotar o DNA no cromossomo de eucariotos
em uma estrutura metafsica de poucos micros de comprimento, como indicado na figura abaixo:
http://www.biociencia.org/genetica/citogenetica.htm
1. empacotamento do DNA como uma espiral em nucleossomos de aproximadamente de 10nm de dimetro.
Este passo envolve um octmero de histonas (b).
2. estrutura de solenide, um segundo nvel de espiralamento, produzindo uma fibra de 30nm (c).
3. "loops" de solenides, ligados a um esqueleto central protico. Esta estrutura tem aproximadamente 300nm
de dimetro (d).
4. "loops" do esqueleto protico, formando uma estrutura gigante, super enrolada, com 700nm (e).
5. Por fim, na sua mxima condensao, a cromtide cromossmica conta com cerca de 1400nm de dimetro
(f).
O estudo dos cromossomos, sua estrutura e sua herana denomina-se citogentica. A cincia da citogentica
humana moderna data de 1956, quando Tjio e Levan criaram tcnicas eficazes para anlise dos cromossomos e
estabeleceram que o nmero normal de cromossomos, na espcie humana, de 46.
Cada cromossomo mittico apresenta uma regio estrangulada denominada centrmero ou constrio primria
que um ponto de referncia citolgico bsico dividindo os cromossomos em dois braos: p (de petti) para o
brao curto e q para o longo. Os braos so indicados pelo nmero do cromossomo seguido de p ou q; por
exemplo, 11p o brao curto do cromossomo 11.
Alm da constrio primria descrita como centrmero, certos cromossomos apresentam estreitamentos que
aparecem sempre no mesmo lugar: So as constries secundrias.
De acordo com a posio do centrmero, distinguem-se alguns tipos gerais de cromossomos:
http://www.virtual.epm.br/cursos/genetica/htm/base.htm
Diferenas na diviso celular entre procariotos e eucariotos
Procariotos Eucariotos
O tempo de replicao mais longo devido a
O tempo de replicao relativamente curto complexidade dos cromossom os eucariticos que esto
envoltos nas histonas.
Uma "bolha" de replicao (bidirecional) Vrias "bolhas" de replicao (bidirecional)
Existem trs tipos de DNA polimerases: I, II e III
(Enzimas responsveis por organizar a duplicao Existem quatro tipos de DNA polimerases: a, b, g e d.
de DNA.).
Nas clulas procariticas, o cromossomo formado por uma nica molcula de um cido nuclico, denominado
cido desoxirribonuclico, o DNA.
Nestas clulas, os cromossomos encontram-se imersos no prprio citoplasma formando uma estrutura
denominada nuclide. As clulas procariticas no apresentam organelas membranosas, como ocorre com as
eucariticas.
As bactrias apresentam um cromossomo circular, que constitudo por uma nica molcula de DNA bicatenrio
(dupla hlice, altamente resistente degradao), tendo sido tambm chamado de corpo cromatnico. possvel,
s vezes, evidenciar mais de um cromossomo numa bactria em fase de crescimento, uma vez que a sua diviso
precede a diviso celular. O cromossomo bacteriano contm todas as informaes necessrias sobrevivncia
da clula e capaz de auto-replicao.
PLASMDEOS
Existem ainda no citoplasma de muitas bactrias, molculas menores de DNA, tambm circulares, cujos genes
no codificam caractersticas essenciais, porm muitas vezes conferem vantagens seletivas bactria que as
possui. Estes elementos extracromossmicos, denominados plasmdeos so autnomos, isto , so capazes de
autoduplicao independente da replicao do cromossomo e podem existir em nmero varivel no citoplasma
bacteriano.
Em clulas eucariticas, observamos a presena de membranas internas que organizam o material nuclear em
seu interior.
Para iniciar a diviso celular a clula eucaritica passa por uma fase de preparao chamada de Intrfase.
O tempo de durao desta fase varia de clula para clula.
composta pela sucesso de trs fases: G1, S e G 2.
O tempo de durao da fase G1 o principal fator para determinar o tempo da intrfase.
G1 = Intervalo de tempo entre o final da mitose e o incio da fase S
"G de gap = intervalo"
um intervalo de tempo entre o final da mitose e o incio da fase S.
A durao deste intervalo varia de acordo com o tipo celular:
Clulas embrionrias = G1 praticamente inexistente
Clulas diferenciadas = G 1 varivel
As clulas quiescentes, isto , clulas que no esto se dividindo, esto num estado especial de G1 que
chamamos de G0.
Fase G 0
"G de gap = intervalo"
Nesta fase as clulas so menores porque suas molculas de protenas e RNA so degradadas, mas no so
rapidamente ressintetizadas, as atividades enzimticas e o transporte transmembrana tambm esto mais lentos.
Clulas em cultura necessitam de fatores de crescimento para que possam proliferar, estes fatores se encontram
no soro.
Estas clulas em cultura tambm podem estar na fase G0 de duas maneiras;
Quando as clulas so cultivadas em baixa concentrao de soro no meio de cultura
Quando atingem a densidade de saturao
Existem trs pontos crticos que servem como marcadores desta fase G1, que so denominados de pontos
crticos de Competncia (C), Entrada (V) e Progresso (R).
So pontos que a clula precisa ultrapassar para entrar na fase S (sntese de DNA)
1. No ponto C ocorre:
Mudana na estrutura da cromatina
Aumento no transporte de nutrientes atravs da membrana
Produo de novos mRna
Na presena do fator de crescimento PDGF (platelet derived growth factor) a clula passa o ponto crtico C e
segue at o ponto V.
2. No ponto V ocorre:
Sntese de macromolculas
Alta atividade enzimtica
Alto nmero de polissomas
Na presena do fator de crescimento EGF (epidermal growth factor) a clula passa o ponto crtico V e segue at
o ponto R.
3. No ponto R ocorre:
Sntese de protenas e enzimas necessrias para sntese do DNA
Sntese de protenas regulatrias
Na presena do fator de crescimento IGF-1 (insulin-like growth factor) a clula passa o ponto crtico R, que o
ltimo ponto de restrio de G1, e segue para a fase S (Sntese de DNA).
S = Fase de Sntese de DNA
Nesta fase ocorre a replicao do DNA.
O tempo de durao de, em mdia, 8 horas.
O ncleo induzido a entrar na fase S por sinais citoplasmticos, ou seja, o citoplasma induz o ncleo a replicar
o seu DNA.
Aps a fase S, a clula passa por um segundo intervalo de tempo que considerado a terceira fase da intrfase,
que chamamos de fase G2.
G2 = Intervalo de tempo entre o final da fase S e o incio da mitose
"G de gap = intervalo"
o segundo intervalo de tempo da intrfase.
Um ncleo que completa a fase S e entra na fase G2 condensa seus cromossomos e segue para a mitose. um
perodo de preparao para produo de fatores cruciais que disparam a mitose.
Mitose
Mitose o processo pelo qual as clulas eucariticas dividem seus cromossomos entre duas clulas filhas. Este
processo dura, em geral, 90 a 120 minutos e dividido em quatro etapas:
Resumo das fases da mitose
Molecular Biology of the Cell
Alberts, B.; Bray,D.; Lewis, J.; Raff, M.; Roberts, K.; Watson, J.
Na prfase: Os cromossomos, que foram duplicados durante a fase S da intrfase, se condensam. O nmero de
cromossomos varia de espcie para espcie, mas em humanos o nmero de cromossomos diplides 46. Os
microtbulos citoplasmticos so desarranjados e a clula se prepara para a reorganizao destes microtbulos
formando o fuso mittico.
O cromossomo mittico consiste em duas cromtides que esto conectadas por uma regio denominada de
centrmero. Na superfcie deste centrmero existem dois cinetocoros, um deles est associado cromtide. O
outro cinetocoro est associado ao fuso mittico e por meio dele que resulta a movimentao cromossomal.
Desorganizao do envelope nuclear.
A clula segue para a metfase
Durante a metfase:
Alguns dos microtbulos que formam os aparatos do fuso se prendem aos cinetocoros formando o fuso mittico.
Os cromossomos iniciam uma srie de movimentos que resultam num alinhamento de todos os cromossomos na
regio equatorial do fuso.
uma fase onde a clula se prepara para a anfase.
Na anfase:
o momento onde as cromtides iniciam a migrao para cada plo da clula, em direo aos centrolos,
provocando a separao das cromtides irms.
Acredita-se que a fora que movimenta as cromtides tem origem por intermdio da polimerizao de protenas
dos microtbulos (actina, miosina e tubulina).
Trmino da anfase e incio da telfase.
Durante a telfase:
Separao completa das cromtides irms para cada plo da clula.
Reconstituio do envelope nuclear ao redor dos cromossomos.
Descondensao dos cromossomos.
Dissoluo do aparato mittico.
Formao de uma constrio ao nvel da zona equatorial da clula-me, que vai progredindo e termina por dividir
o citoplasma e suas organelas em duas partes iguais.
Neste ponto a clula termina a fase de diviso celular (Mitose) e entra na fase de replicao do DNA (Intrfase)
iniciando um novo ciclo.
Na interfase, por microscopia, no visualizamos modificaes tanto no citoplasma quanto no ncleo. As clulas,
porm esto em franca atividade, sintetizando os componentes que iro constituir as clulas filhas.
QUESTO
Qual a vantagem de ter o DNA organizado em cromossomos?
Atividade Verde
Atividade: Mutatis mutante
Um ponto que geralmente no mencionado nos modelos de replicao, e que tem uma importncia relativa na
compreenso de certas limitaes das tcnicas de gentica molecular, a atividade revisora da DNA polimerase
III bacteriana (e das DNA pol em geral, sejam elas eucariotas ou procariotas).
Na natureza existem formas alternativas das quatro bases nitrogenadas que formam o DNA, chamadas formas
tautomricas (formas isomricas de compostos orgnicos). A freqncia com que estas bases ocorrem baixa,
porm muitas ordens de grandeza acima da freqncia de erros admissveis no DNA (lembre-se que a adio de
uma base errada na seqncia de um gene uma mutao, que pode ter conseqncias importantes para o
portador do gene mutante). Cada vez que uma dessas bases tautomricas empregada, provoca um erro
de pareamento. Se ela no for retirada antes da prxima replicao, uma mutao ser introduzida no
DNA. Por isso, as DNA polimerases (I, II e III, em Escherichia coli e muitos outros procariotos, a e b em
eucariotos) tm a capacidade de rever, imediatamente aps a adio, se o pareamento da base
adicionada com a base da fita molde foi correto.
Qualquer erro de pareamento refletido pela alterao na estrutura da dupla hlice. Esta alterao deve fluir por
um canal inico da prpria DNA polimerase. Se a hlice estiver alterada a DNA polimerase pra, volta na
direo 3-5 despolimerizando a cadeia recm sintetizada e, aps algumas dezenas ou at centenas de
bases, recomea o trabalho.
Pode parecer um processo pouco econmico, mas lembre-se que a integridade da informao gentica est
em jogo e, portanto, a preservao das caractersticas e funes de todas as clulas de uma mesma
espcie.
Outra enzima comum e essencial no processo a DNA ligase (polinucleotdeo ligase) que liga os
nucleotdeos aps a correo feita pela DNA polimerase I.
As mutaes so enganos mais do que possveis, so provveis, uma vez que, durante a replicao ocorre a
reposio de mais de 1000 bases por minuto na fita nova que est sendo formada.
As mutaes podem ocorrer naturalmente e incluem todas mudanas imaginveis na seqncia de DNA.
As mutaes que apresentam apenas um efeito muito sutil no produto gnico final, como as mutaes para
sensibilidade temperatura, so, freqentemente, uma simples trocas de uma base por outra.
Entretanto, algumas mutaes naturais destroem completamente a funo de um gene. Essas mudanas
mais drsticas incluem no somente mudanas de bases, inseres ou delees de uma base, mas tambm,
extensas inseres e delees e mesmo rearranjos grosseiros na estrutura cromossmica.
Tais mudanas podem ser causadas, por exemplo, pela insero de um transposon, o qual tipicamente
transfere, ou seja, muda de lugar algumas centenas de pares de bases de um mesmo DNA ou ainda, insere
algumas centenas de pares de bases de um DNA estranho numa seqncia codificadora de um gene, ou por
aes aberrantes do processo de recombinao celular.
Mutaes cromossmicas
Alteraes estruturais:
P Delees: neste processo, ocorre perda de fragmentos do cromossomo , que podem constituir
um ou muitos genes. Podem se originar por simples quebra ou eliminao cromossmicas. Vrias delees
nos seres humanos so conhecidas, e talvez a mais estudada seja a que determina a Sndrome do Cri du chat
ou Sndrome do miado de gato. Esta sndrome ocasionada por uma deleo no brao curto de um dos
cromossomos n o 5.
P Duplicaes: ocorrem quando um segmento cromossmico aparece mais de duas vezes em
uma clula diplide normal. O segmento pode estar ligado a um cromossomo ou como um fragmento
separado. Por intermdio da segregao destes cromossomos nos gametas, as duplicaes podem ser
transmitidas s geraes subseqentes.
P Inverses: acontecem quando partes dos cromossomos tornam-se destacadas (quebra
cromossmica), giram 180o e so reinseridas de modo que os genes ficam em ordem inversa. Algumas
inverses resultam do embaraamento dos filamentos durante a prfase meitica. As inverses podem incluir
o centrmero (inverses pericntricas) ou no incluir o centrmero (inverses paracntricas).
P Translocaes: ocorrem quando parte de um cromossomo torna-se separada e se liga a uma
parte de um cromossomo no homlogo. As translocaes podem ser de dois tipos: SIMPLES quando o
fragmento quebrado de um cromossomo se insere em outro no homlogo ou RECPROCA os
segmentos cromossmicos so trocados entre dois cromossomos no homlogos. Em humanos, as
TRANSLOCAES SIMPLES (mais comuns) ocorrem entre os cromossomos 14 e 21 (variao da
Sndrome de Down). Outras translocaes foram observadas. Na maioria dos casos existem numerosas
anomalias fenotpicas, e geralmente ocorre um aborto espontneo, ou morte poucos meses aps o nascimento.
Um exemplo pode ser a leucemia mielgena crnica, na qual ocorre uma translocao entre os
cromossomos 22 e 9.
P Transposies: refere-se troca de segmentos cromossmicos de um local do cromossomo
para outro. Geralmente no h grandes alteraes, pois o contedo genmico no alterado, porm o
pareamento pode ser difcil durante a diviso celular.
P Fuso e fisso cntricas: nestes casos, o nmero cromossmico pode aumentar ou diminuir
sem que ocorra variao na quantidade de DNA. Isso ocorre devido quebra do cromossomo na altura do
centrmero, dando origem a dois cromossomos acrocntricos (fisso), ou ao processo inverso (fuso).
Estes processos so mais comumente observados em espcies prximas ao homem, como os primatas, que tm
seu nmero cromossmico variado pela ocorrncia de mais cromossomos acrocntricos, ou mais
metacntricos. Na espcie humana geralmente no se observa a existncia de sndromes ou patologias
ocasionadas por este tipo de alterao estrutural/numrica, porm casos de portadores de anomalias, que no
desenvolvem o fentipo por no ter alterao no contedo genmico, so observados. Ex: portador de fuso
entre dois de seus cromossomos acrocntricos.
Alteraes numricas:
P Euploidia: refere-se ao contedo genmico total do indivduo, ou seja, todos os seus
cromossomos so duplicados (DIPLOIDIA condio normal) ou todos so triplicados (triploidia) e assim
por diante. Em humanos, um indivduo haplide (com conjunto cromossmico sem homlogos) no vivel e
em alguns poucos casos observam -se as demais poliploidias. Seres humanos completamente triplides so
muitos raros e os poucos casos conhecidos so os abortos espontneos ou natimortos. Alguns vivem por poucas
horas. Em todos os casos h malformaes mltiplas e grosseiras. Avalia-se que aproximadamente 15% de
todos os fetos espontaneamente abortados so triplides e tetraplides. A poliploidia em humanos, seja completa
ou em mosaicismo, leva a profundas anomalias e morte.
P Aneuploidia: a situao em que o nmero de cromossomos no um mltiplo exato do
nmero haplide caracterstico da espcie.
Mutaes Gnicas
Durante a replicao (dita semiconservativa) do material gentico, a enzima a DNA polimerase liga os
nucleotdeos s novas fitas de DNA. Durante esse processo, podem ocorrer erros adicionando nucleotdeos
diferentes aos do DNA molde, o que provocar mutaes.
Todos os seres vivos sofrem um certo nmero de mutaes, como resultado de funes celulares
normais ou interaes aleatrias com o ambiente. Tais mutaes so denominadas espontneas.
A incidncia do nmero de mutaes poder elevar-se atravs da ao de determinados compostos, agentes
mutagnicos e por conseqncia, as modificaes por eles causadas, denominadas mutaes induzidas.
Tipos de Mutao Gnica:
Mutao pontual ou extensa.
P As mutaes pontuais podem ser: substituies de bases, inseres de bases ou delees de bases.
P As mutaes (ou modificaes) extensas incluem delees, duplicaes, inseres e rearranjos.
Possveis causas para mutaes:
P Tautomerismo de base: so pareamentos errneos, por falha no reparo da DNA polimerase, no
arranjo do DNA. Ao invs de haver o pareamento adenina-timina e guanina-citosina, pode ocorrer adenina-
citosina e timina-guanina.
P Radiao ionizante: na maioria dos estudos, a freqncia de mutaes de ponto diretamente
proporcional dose de irradiao (raios X, raios gama e raios csmicos).
P Radiao ultravioleta: so absorvidos pelas purinas e pirimidinas, formando hidratos de pirimidinas e
dmeros de pirimidinas (dimerizao da timina onde duas timinas prximas, de uma mesma fita de DNA,
ligam-se, prejudicando o ajuste da dupla fita).
P Acridinas: estes compostos se intercalam entre a dupla fita, causando a insero ou deleo de um
ou mais pares de bases. H alterao no mdulo de leitura do DNA.
P Alquilas: h transferncia de grupos metil ou etil para os stios reativos das bases e dos fosfatos da
cadeia de DNA.
Mas lembre-se que a Teoria Sinttica da Evoluo ou Neodarwinismo est fundamentada em dois
mecanismos: a mutao e a recombinao gnica.
O mecanismo de recombinao gnica ocorre em organismos que se reproduzem sexuadamente .
O mecanismo de recombinao gnica mais importante em bactrias a conjugao bacteriana. Na
conjugao bacteriana duas bactrias unem-se temporariamente atravs de uma ponte citoplasmtica. Em
uma das clulas, denominada "doadora" ou "macho", ocorre a duplicao de parte do cromossomo . Essa
parte duplicada separa-se e, atravs da ponte citoplasmtica, passa para outra clula, denominada "receptora"
ou fmea, unindo-se ao cromossomo dessa clula receptora.
Esta clula ficar, ento, com constituio gentica diferente daquela das duas clulas iniciais. Essa
bactria "recombinante" pode apresentar diviso binria, dando origem a outras clulas iguais a ela.
Processo semelhante pode ser tambm observado em fungos e outros organismos sexuados como resultado da
segregao ao acaso de cromossomos, durante a formao de gametas, ou da segregao mittica. o
resultado da troca recproca de DNA entre cromtides homlogas, durante a prfase da meiose I.
Para saber mais sobre meiose acesse o endereo:
http://www.virtual.epm.br/cursos/genetica/htm/meiose.htm
Agora procure imaginar se em meio a tantos acontecimentos concomitantes no houvesse ningum responsvel
pela reviso dos passos e etapas ??
Que mar de mutaes poderiam ser todos os seres do universo ??
QUESTES
1. Esta atividade revisora um mecanismo extremamente sofisticado que no ocorre no RNA. Discuta este
diferencial na atuao da polimerase de DNA e na polimerase de RNA.
2. Relacione as mutaes e a evoluo da espcie.
Cadeias polipeptdicas
Uma ligao peptdica a unio do grupo amino (-NH2) de um amino cido com o grupo carboxila (-COOH) de
outro amino cido, por intermdio da formao de uma amida.
quark.qmc.ufsc.br/qmcweb/ artigos/proteinas.html
Exons
Os transcritos primrios de RNA contm a cpia de toda seqncia presente no DNA e que algumas partes
dessa seqncia so recortadas dessa molcula de forma a produzir o RNA funcional.
As seqncias que so retiradas do transcrito primrio foram chamadas de ntrons e aquelas que permaneceram
como parte do RNA funcional, exons.
ntrons
Os transcritos primrios de RNA contm a cpia de toda seqncia presente no DNA e que algumas partes
dessa seqncia so recortadas dessa molcula de forma a produzir o RNA funcional.
As seqncias que so retiradas do transcrito primrio foram chamadas de ntrons e aquelas que permaneceram
como parte do RNA funcional, exons.
Splicing - At a pouco tempo atrs, pensava-se que os genes celulares eram compostos por arranjos contnuos
de nucleotdeos. Somente em 1977 descobriu-se a existncia de genes interrompidos. Assim, quando se olhava
o DNA, percebia-se que o gene possua mais nucleotdeos do que aqueles encontrados no mRNA (necessrios
para a produo de protenas).
Hoje, sabe-se que os transcritos primrios de RNA contm a cpia de toda seqncia presente no DNA e que
algumas partes dessa seqncia so recortadas dessa molcula de forma a produzir o RNA funcional.
Num segmento do DNA, correspondente a um gene que codifica uma determinada protena, so encontradas
regies codificadoras (exons) alternando-se com regies no-codificadoras (ntrons). O transcrito resultante no
funcional e s poder ser traduzido se for devidamente montado, descartando-se os ntrons e unindo-se os
exons em seqncia ordenada. Este tipo de modificao do transcrito primrio denominado "splicing" (cortar e
colar; montagem) e ocorre dentro do ncleo. O transcrito processado e pronto para migrar para o citoplasma,
recebe o nome de RNA mensageiro.
O splicing, um dos fenmenos biolgicos mais conservados ao longo da evoluo, est presente em
praticamente todos os seres vivos com ncleo organizado (eucariontes). um mecanismo altamente complexo e
estruturado, que envolve a ligao, ao RNA, de uma srie de componentes celulares. Em uma explicao
simplificada, pode-se dividir o splicing em duas etapas: a retirada dos ntrons e a ligao dos exons.
Ainda se sabe pouco sobre a verdadeira funo dos ntrons, mas j se conhece bastante sobre como essas
seqncias so retiradas da molcula de RNA. Uma das etapas-chave no processo o reconhecimento preciso
das junes entre os ntrons e os exons (os stios de splicing 5 e 3). Isso possvel porque, perto dessas
junes, existem seqncias altamente conservadas (seqncias consenso) que servem como stios de unio
para componentes celulares responsveis pelo processo de splicing.
Figura: No processo de splicing, fatores especficos (representados por tesouras) reconhecem os stios de corte do DNA,
eliminando os ntrons (partes sem informao gnica em laranja) e colando os exons (partes com informao gnica em
roxo) adjacentes, formando a fita de RNA mensageiro.
Sntese
Toda a informao para o funcionamento do ser se encontra no nosso cdigo gentico que est contido numa
molcula longa formada por duas cadeias complementares e antiparalelas, o cido dexorribonuclico (DNA). Ele
composto por quatro tipos diferentes de bases aminadas, adenina (A), timina (T), citosina (C) e guanina (G) e
cada gene formado por uma determinada seqncia destas bases.
Para que a informao contida no DNA seja transferida para as diversas funes celulares, essa molcula
precisa primeiro ser copiada, em um processo denominado transcrio, que gera uma molcula-irm, o cido
ribonuclico (RNA) (figura 1). O RNA contm a mesma informao gentica presente no DNA, mas difere deste
por ter uma s cadeia e por apresentar, no lugar da base timina (T), a uridina ou uracila (U). No entanto, o RNA
s se torna funcional depois que os ntrons so retirados, em um processo conhecido como splicing - O splicing,
um dos fenmenos biolgicos mais conservados ao longo da evoluo, est presente em praticamente todos os
seres vivos com ncleo organizado (eucariontes). um mecanismo altamente complexo e estruturado, que
envolve a ligao, ao RNA, de uma srie de componentes celulares. Em uma explicao simplificada, pode-se
dividir o splicing em duas etapas: a retirada dos ntrons e a ligao dos exons.
Retirados os segmentos extras, os exons so ligados uns aos outros e o RNA, agora chamado de RNA
mensageiro (mRNA), torna-se funcional, ou seja, pode ser traduzido por organelas celulares denominadas
ribossomos. No processo de traduo, a ordem dos exons no mRNA serve como modelo para a montagem, nos
ribossomos, das molculas essenciais para nossa existncia: as protenas.
Por muitos anos o processamento do RNA foi visto apenas como um mecanismo inventado pela clula para se
livrar dos ntrons, unir os exons e produzir assim um RNA mensageiro funcional, capaz de ser traduzido em uma
protena. medida que mais e mais genes foram seqenciados e analisados, percebeu-se que um nmero
substancial deles originava mais de um tipo de mRNA. Mesmo produzidos a partir do mesmo gene, esses
mRNAs podem conter diferenas na seqncia de bases que ser traduzida pelos ribossomos, possibilitando a
montagem de protenas distintas, com funes tambm distintas e algumas vezes at antagnicas.
Como um mesmo gene pode originar diferentes mRNAs? A resposta est em um processo denominado splicing
alternativo. Como em um jogo de palavras, onde cada exon seria uma letra, o processo permite realizar variadas
combinaes de exons para formar diferentes palavras (figura abaixo). Isso possvel porque cada exon contm
a informao necessria para produzir uma parte da protena. Alm das combinaes de exons, o corte dos
exons em diferentes stios tambm pode gerar diferenas nos mRNAs.
O splicing alternativo gera distintos RNA mensageiros a partir de um mesmo gene. A informao contida na
palavra NAMORAR (que representa um gene) permite gerar outras palavras com diferentes sentidos,
dependendo da escolha das letras (ou dos exons, no caso dos genes): NORA (escolha em azul), AMOR (em
preto), MAR (em vermelho) e ORAR (em verde).
A participao do cido ribonuclico (RNA) na sntese das protenas foi primeiramente sugerida pelo francs
Jean Louis Brachet (1909) e pelo sueco Torbjrn Oskar Caspersson (1910), na dcada de 1930. Eles
observaram que clulas muito ativas na sntese de protenas tm muito RNA no citoplasma. Em 1958, Crick
lanou a idia de que as protenas seriam produzidas a partir de um molde de RNA, que era copiado do DNA.
Crick sugeriu tambm a existncia de molculas adaptadoras, que ordenariam os aminocidos sobre o molde de
RNA.
Pelo fato dos promotores (seqncias regulatrias dos genes) possurem seqncias de nucleotdeos comuns
(conservadas), esta enzima as reconhece e liga-se a elas, dando incio sntese da molcula de mRNA
(transcrio), o que explica como a enzima RNA polimerase consegue reconhec er o lugar onde se ligar. A
molcula de RNA produzida pode ser um mRNA (RNA mensageiro), um rRNA (RNA ribosomal) ou um tRNA
(RNA transportador). Uma molcula de RNA mensageiro contm a informao para produzir cadeias
polipeptdicas que podero originar protenas.
Leia tambm: http://www.inf.unisinos.br/~mombach/ConceitosBasicosBM.pdf
Experimento de Griffith:
Griffith (1928) utilizou duas linhagens de bactrias, sendo que uma delas tinha suas clulas envolvidas por uma
cpsula de polissacardeo, gerando colnias de aspecto liso. A outra linhagem no possua tal envoltrio celular
e gerava colnias de aspecto rugoso. A primeira linhagem, quando inoculada em camundongos, manifestava a
doena, enquanto a segunda, no.
Posteriormente, Griffith inoculou os seus camundongos com a linhagem virulenta (de aspecto rugoso), morta por
meio de fervura, e observou que estas no causavam mais a doena.
Em uma terceira inoculao, os camundongos receberam uma mistura de clulas lisas mortas pelo calor e
clulas rugosas vivas.
Griffith observou, ento, o desenvolvimento da pneumonia. Ao se extrair clulas ainda vivas destes
camundongos, foi constatado que estas clulas apresentavam o fentipo liso virulento.
Portanto, deveria haver algum agente, presente nas clulas mortas, capaz de transmitir sua informao de
virulncia para as clulas vivas, o que Griffith chamou de princpio transformador.
A substncia indutora de transformao viria a ser purificada e sua natureza qumica seria reconhecida como
sendo a do cido desoxirribonuclico (DNA) . Este experimento no foi totalmente aceito poca, pois se
questionou a possvel contaminao protica dos isolados de DNA. Tais questionamentos tinham origem,
principalmente, no favoritismo da hiptese que apresentava as protenas como portadoras do material
hereditrio.
QUESTO
As vrias definies propostas para o termo GENE vm perdendo o significado ao longo do tempo. Compare a
proposta de conceituao e funo de gene de Beadle e Tatum, em 1940, com as propostas mais recentes sobre
o assunto.
QUESTO
Agora voc pode responder tranqilamente aos seus alunos porque comer carne de porco, portanto ingerir
protenas de porco, no faz voc virar um porco! Explique aqui por que isto no acontece.
http://www.corpohumano.hpg.ig.com.br/generalidades/quimica/quimica_11.html
No DNA as bases nitrogenadas esto no centro da molcula e os esqueletos acar-fosfato esto externos.
http://www.educacaopublica.rj.gov.br/cursos/index.php#biologia
O DNA a molcula que transmite a informao gentica e tem a capacidade de se autoduplicar. Uma cpia do
DNA passada para a clula-filha durante a diviso celular.
Cada molcula de DNA contm vrios genes dispostos linearmente ao longo da molcula. Cada gene (ou seja
l o que for), quando em atividade, transcrito em molculas de outros cidos nuclicos denominados
ribonuclicos, que comandaro a sntese de protenas.
Depois de identificadas a estrutura em dupla hlice e a constituio do DNA, uma srie de questes surgiram. As
primeiras delas relacionadas com a surpreendente estrutura da molcula.
QUESTES
1. Identifique ao menos trs vantagens nesta estrutura em dupla hlice.
2. importante que as ligaes que unem as duas fitas do DNA sejam do tipo ponte de hidrognio? Por qu?
Relembrando Nos endereos a seguir voc encontrar informaes e conceitos bsicos
sobre Gentica e Biologia Molecular.
Temas de Biologia
Desenvolvidos pelos professores Amabis e Martho Professores da rea de Gentica da USP e autores
de livros didticos de Biologia de Ensino Mdio e Fundamental.
1. Prtica de sntese de protenas
2. Teoria de sntese de protenas
3. Identificao de pessoas pelo DNA
http://www.biociencia.org/genetica/citogenetica.htm
Bibliografia comentada
1. O sculo do gene
Autor: Evelyn Fox Keller
Belo Horizonte, Crislida/Sociedade Brasileira de Gentica (2a. ed.), 208 pp.
Evelyn Keller tem a habilidade perturbadora de fazer pensar de novo, do princpio, sobre coisas que voc
pensava j ter entendido. Com essa afirmao, o geneticista norte-americano Richard Lewontin, da
Universidade de Harvard e um dos melhores especialistas em gentica de populaes, resume a
importncia do livro escrito por Keller, uma professora de histria e filosofia do Instituto de Tecnologia de
Massachusetts (MIT) e tambm uma cientista. No Brasil, o livro foi muito bem traduzido e prefaciado por
Nelson Vaz. O livro comea com a origem da palavra gene, uma histria pouco conhecida, mas muito
importante pelas lies de filosofia da cincia nela contidas. A obra de Keller um magnfico livro de
histria da biologia do sculo XX em apenas quatro captulos. A contribuio mais importante a viso
crtica, lastreada em fatos concretos, do determinismo gentico. A idia de que as caractersticas dos
seres vivos so determinadas por unidades hereditrias chamadas genes (determinismo gentico),
demolida elegantemente, assim como o conceito de programa gentico.
http://cienciahoje.uol.com.br/controlPanel/materia/view/359
2. O citoplasma e o ncleo no desenvolvimento da hereditariedade
Autor: Rogrio Parentoni, do Departamento de Ecologia, da Universidade Federal de Minas Gerais.
O contedo deste livro vem resumido em trs tpicos: (1) O gene-partcula no existe; (2) O cromossomo
funciona como um todo; (3) O citoplasma desempenha papel mais importante do que o ncleo nos
fenmenos hereditrios. Essas afirmaes, defendidas hoje por Lewontine Keller, entre outros, foram
propostas em 1941 por Salvador de Toledo Piza Jnior, professor de zoologia e anatomia comparada da
Universidade de So Paulo. Na poca, suas idias foram consideradas extravagantes. Hoje, elas abrem
novos caminhos.
http://cienciahoje.uol.com.br/controlPanel/materia/view/359
3. O monge no jardim
O gnio esquecido e redescoberto de Gregor Mendel, o pai da gentica.
Autor: Robin Marantz Henig (traduo: Ronaldo Srgio de Biasi)
Rio de Janeiro, Ed. Rocco. 2001.
"Um cientista do sculo XX aprisionado no sculo XIX". assim que a jornalista cientfica americana
Robin Marantz Henig define em seu livro O monge no jardim o cientista Gregor Mendel, hoje aclamado
como pai da gentica. As experincias com ervilhas de Mendel mostraram como caractersticas de uma
gerao so transmitidas s seguintes e fundamentaram a formulao de leis gerais da hereditariedade.
Seu trabalho, porm, no teve reconhecimento imediato e s teve impacto 35 anos mais tarde, quando o
cientista j havia morrido.
Livro conta como monge formulou leis da hereditariedade a partir do estudo de ervilhas.
4. O DNA
Autor: Marcelo Leite
Coleo Folha Explica
So Paulo, Publifolha, 2003, 104 p.
O autor apresenta descobertas recentes que mudaram a viso dos geneticistas sobre o papel do DNA e
mostra como a engenharia gentica seria incapaz de ditar comportamentos aos seres humanos.
5. Thompson & Thompson / Gentica Mdica
AUTOR: NUSSBAUM, ROBERT L. - MCINNES, RODERICK R. - WILLARD, HUNTINGTON F.
Guanabara Koogan editora, 6 edio. 2002.
Princpios clssicos da gentica humana com a moderna gentica molecular, demonstrando as
aplicaes clnicas desse conhecimento no diagnstico e tratamento de uma ampla gama de distrbios
genticos. Novas informaes sobre:
- defeitos do desenvolvimento;
- gentica das doenas complexas;
- gentica do cncer;
- as bases moleculares e bioqumicas da gentica;
- o Projeto do Genoma Humano;
6. Fundamentos de Biologia Molecular
Autor: Malacinski, George M.
Guanabara Koogan editora, 4a EDIO. 2005.
Alm dos assuntos bsicos da rea de Gentica e Biologia Molecular, o livro traz ainda questes como: A
Genmica e a Protemica, Transposons, Plasmdeos e Bacterifagos, DNA Recombinante e Engenharia
Gentica: Moldagem Molecular dos Genes, A expanso da Biologia Molecular, um adendo para sua
reviso de Biologia Molecular e rev fundamentos qumicos importantes para compreender a Biologia
Molecular.
7. Bases da Biologia Celular e Molecular
Autores: De Robertis, Eduardo M.F. - Hib, Jos
Guanabara Koogan editora, 3a EDIO. 2001.
Conceitos bsicos. Os temas so apresentados de maneira concisa e didtica, numerados, o que permite
agilizar sua busca e facilita a sua integrao. Foram simplificados com a introduo de diagramas simples
e de fcil interpretao.
8. Gentica
Autores: Eldson J. Gardner & D. Peter Snustad
Editora Guanabara
Livro de gentica geral, tradicional e clssica que possui apenas alguns captulos de gentica e biologia
molecular: D uma boa olhada nos captulos de molecular, so introdutrios do assunto e completamente
bsicos, bsicos mesmo!!!
9. Biotecnologia Simplificada
Autores: Aluzio Borm, Fabrcio R. Santos.
Suprema Grfica e Editora, 1a edio. 2001. 250p.
Aborda as mais importantes aplicaes da biotecnologia, necessitando, por parte do leitor, apenas
conhecimento elementar de gentica. Este livro foi escrito de forma a permitir que tanto leigos quanto
conhecedores da gentica entendam a biotecnologia, de forma desmistificada.
10. O DNA Recombinante
Autores: James D. Watson, Michael Gilman, Jan Witkowski e Mark Zoller
Tradutores: equipe de professores de vrias instituies, sob a coordenao do professor Elio Hideo Bab
(UFOP). Traduo da segunda edio.
Editora da UFO P, 2a edio. 1998. 624 p.
1. Parte: Desenvolvimento da Tecnologia do DNA Recombinante
2. Parte: Anlise dos Genes Clonados
3. Parte: Novas Estratgias para se Estudar as Funes dos Genes
4. Parte: Anlise de Importantes Processos Biolgicos Utilizando a Metodologia do DNA Recombinante
5. Parte: Aplicao do DNA Recombinante na Biotecnologia
6. Parte: O Impacto do DNA Recombinante na Gentica Humana
http://www.ufop.br/ulthora/dna/livrodna.htm