Metabolismo de Bases Nitrogenadas:

Purinas e Pirimidinas
Interrelação do Metabolismo

Selma M.B. Jeronimo

Departamento de Bioquímica, CB, UFRN
smbj@cb.ufrn.br
 Objetivos
1. Compreender a biossíntese de novo das bases nitrogenadas.
2. Compreender o papel de aminoáciodos e de micronutrientes na biossíntese
das bases nitrogenadas.
3. Compreender o mecanismo de Regulação da síntese de bases e sua
interrelação com a biossíntese de aminoácidos.
4. Compreender a Formação de desoribunocleosídeos.
5. Compreender o catabolismo de bases nitrogenadas
6. Compreender o racional de análagos de aminoácidos e nucleosídeos em
terapêutica antimicrobiana e anti-neoplásica.
7. Compreender as doenças relacionadas ao metabolismo de bases (deficiência
de adenosina deaminase, gota, Lesch Nyhan, por exemplo).
8. Compreender como ácido úrico induz inflamação via ativação do
inflamassoma.
Nucleosídeos de purinas e pirimidinas: Funções

• 1. Precursor monomérico de ácidos nucléicos:

Nucleosídeo trifosfato
• 2. Armazenamento de energia e ativador
substâncias: ATP, GTP, CTP e UTP
• 3. Efetor alostérico: vias metabólicas
• 4. Transferência de grupos químicos: UDP-glicose,
PAPS, CDP-colina, S-adenosil metionina.
 Bases nitrogenadas

NH2 NH2

N Adenina N
Citosina
N

NH
NH O
N

O
Guanina
O Timina
N H3C
NH
NH
NH N NH2
NH O
 II Bases nitrogenadas
NH2

• Bases nitrogenadas (purinas e

N
pirimidinas) são encontradas na N
células na forma de nucleotídeo
(ligação b-glicosídica entre a base NH N
e a pentose/fosfato).
• Biossíntese endógena O
• Recuperação de bases H3C
NH

NH O
 III. Metabolismo
• I. Biossíntese:
– Via de novo
– Via de salvação
 II. Catabolismo
 Bases Púricas: excreção como ác. Úrico
 Bases Pirimídicas: reutilação de parte da cadeia
carbonada.
 IV. Distribuição diferencial celular
• Hemácias: derivados de adenina
• Fígado: derivados de uracila e outros
• Ribonucleosídeos: concentração celular
milimolar
• Desoxiribonucleosídeos: concentração
micromolar
 V. Química
• 1. Nomenclatura
– A) Base nitrogenada (Púrica e Pirimídica) NH2

T O O
N
N

H3C
NH U NH A NH N

NH O NH O

NH2 O
C O
G
H
N
N N
NH
NH

NH N NH N NH2
NH O
Hipoxantina (inosina monofosfato)
 V. Química
– B) Nucleosídeo (Base + pentose)
– C) Nucleotídeo (Base + pentose + fosfato)
NH2 NH2

N N
N N

NH N NH
N
O
HO HO P O
O O
OH

OH OH
OH OH
 Nucleosídeo trifosfato

NH2

N
N

N NH
OH OH O
HO P P P O
O
O O OH

OH
 Propriedades
• Absorção no UV
• Solubilidade
Lehninger
 Metabolismo de Bases Púricas: Biossíntese

• Síntese de novo
• A. Formação de Inosina Monofosfato (IMP)
– 1. Formação de fosforibosil-pirofosfato:
• Ribose-P + ATP PRPP + AMP
– 2. Formação da ligação glicosídica:
• PRPP + Gln Glu + PP + 5-fosfo-b-ribosilamina
– 3. 5-fosfo-b-ribosilamina + Gli + ATP
• Ribonucleotídeo-glicinamida + ADP + P
 +
NH3
H2C O P H
H2C O P CH2 N5, N10 - N
NH2
P O CH2 + H2C
O C Metanil - H4 - H4 - Folato H2C CH
P O O NH3 O Folato
O O H Glutamina Glutamato
H ATP AMP O C O-
PP O
H H C
OH O NH
Mg² Pi O P O P PP-Ribose-P-Glutamil- ATP Formil- transferase
ADP+ Pi
PP-Ribose -P Amidotransferase OH OH OH OH Ribose -5-P
OH OH - Sintetase OH OH
-D-Ribose-5-P P-Ribose-5-P
-Sintetase Formiglicina - midarribosil - 5-P

Glutamina

Glutamato

O H
N N
O H2O
- C N CO2 HC
O O CH2 N H2C CH
C HO C CH
CH NH C Aspartato CH ATP, Mg2
Biotina O
CH C Fechamento do Anel C
H2C C N
- C H2N HN NH
O O C H2O H2N N
H2N N
Ribose -5-P Ribose -5-P
Ribose -5-P
Ribose -5-P
Aminoimidazoliribosil-5-P Formiglicina - midarribosil - 5-P
Aminoimidazol - Succinil Aminoimidazol -
Carboxilatorribosol - 5 -P Carboxilatorribosol - 5 -P

Fumarato
Adenilsuccinase

O O O
N C N H2O N
C N10 -Formil - C
C H4 - Foleto H4 - Folato H2N
C NH C
H2N
CH CH

IMP
CH
C O CH C Fechamento do Anel HC C
N Transformilase NH N N N
H2N

Ribose -5-P Ribose -5-P Ribose -5-P

 Biossíntese bases Púricas
• 4. Ribonucleotídeo-glicinamida + N10 formilH4 Folato
Ribonucleotídeo-formil-glicinamida + H4 Folato

 5. Ribonucleotídeo-formil-glicinamida + Gln + ATP

Ribonucleotídeo-formil-glicinamidina + Glu + ADP + P

 6. Ribonucleotídeo-formil-glicinamidina + ATP
 Ribonucleotídeo 5-aminoimidazol + ADP + P + H2O

 7. Ribonucleotídeo 5-aminoimidazol + CO2 + Biotina

 Ribonucleotídeo 5-aminoimidazol-4-carboxaminoimidazol +
 +
NH3
H2C O P H
H2C O P CH2 N5, N10 - N
NH2
P O CH2 + H2C O C Metanil - H4 - H4 - Folato H2C CH
P O O NH3 O Folato
O O H Glutamina Glutamato
H ATP AMP O C O-
PP O
H H C
OH O NH
Mg² Pi O P O P PP-Ribose-P-Glutamil- ATP Formil- transferase
ADP+ Pi
PP-Ribose -P Amidotransferase OH OH OH OH Ribose -5-P
OH OH - Sintetase OH OH
-D-Ribose-5-P P-Ribose-5-P
-Sintetase Formiglicina - midarribosil - 5-P

Glutamina

Glutamato

O H
N N
O H2O
- C N CO2 HC
O O CH2 N H2C CH
C HO C CH
CH NH C Aspartato CH ATP, Mg2
Biotina O
CH C Fechamento do Anel C
H2C C N
- C H2N HN NH
O O C H2O H2N N
H2N N
Ribose -5-P Ribose -5-P
Ribose -5-P
Ribose -5-P
Aminoimidazoliribosil-5-P Formiglicina - midarribosil - 5-P
Aminoimidazol - Succinil Aminoimidazol -
Carboxilatorribosol - 5 -P Carboxilatorribosol - 5 -P

Fumarato
Adenilsuccinase

O O O
N C N H2O N
C N10 -Formil - C
C H4 - Foleto H4 - Folato H2N
C NH C
H2N
CH CH CH

C O CH C Fechamento do Anel HC C
N Transformilase NH N N N
H2N

Ribose -5-P Ribose -5-P Ribose -5-P

 Biossíntese Bases Púricas
8. Ribonucleotídeo 5-aminoimidazol-4-carboxaminoimidazol + ASP + ATP
Ribonucleotídeo N-succinil-5-aminoimidazol-4-carboxamida

9. Ribonucleotídeo N-succinil-5-aminoimidazol-4-carboxamida
Ribonucleotídeo 5-aminoimidazol-4-carboxamida + Fumarato

10. Ribonucleotídeo 5-aminoimidazol-4-carboxamida + N10 formilH4 Folato

Ribonucleotídeo N-formilaminoimidazol-4-carboxamida
11. Ribonucleotídeo N-formilaminoimidazol-4-carboxamida + H2O
Inosinato (IMP)
Síntese de Adenina e Guanina

IMP

XMP Adenilosuccinato

GMP AMP

GDP ADP

GTP ATP
 Via de salvação
• Enzima: Hipoxantina-guanina fosforibosil
transferase
Guanina + PRPP GMP + PPi

Hipoxantina + PRPP IMP + PPi

• Enzima Adenina-fosforibosil transferase

Adenina + PRPP AMP + PPi
 Síntese de Pirimidinas
• Síntese de orotato
• Adição de PRPP
• Formação de uracila
• Formação de timina e citosina
 Síntese de desoxiribonucleosídeos
trifosfatos
• Redução dos ribonucleosídeos
– Avaliar o papel da ribonucleotídeo redutase
– Folato
– Inibidores
 Controle formação de
desoxiribonucleotídeos
• A síntese de desoxirribonucleotídeos é controlada pela enzima
Ribonucleotídeo Redutase.
• A enzima é regulada alostericamente.
• Sua atividade é diminuída pela ligação de dATP
• A ligação de dATP acentua a redução de UDP e CDP.
• A ligação de Timina Trifosfafato (TPP) estimula a redução de
GDP e inibe a redução ribonucleotídeos pirimidínicos, o que
ocasiona o aumento de dGTP, estimulando a transformação de
ATP em dATP. Este padrão fornece o balanço apropriado dos
quatro desoxirribonucleotídeos necessários á síntese de DNA.
 Origem da timina
ADP
+ H2O
dUDP + ATP dUTP dUMP + PPi
Nucleosídeo difosfato quinase dUTP difosfohidrolase
H
H2N H
N N H H H
C C C C C O H COO
H
N C C CH2 N C C C N C H
C N C C CH2
C H H
OH H CH2
H
N5, N10-metileno COO
H4 folato Timidilato sintase
O
FdUMP C CH3
HN C
O
dTTP + diidrofolato
C C
C O N
dUMP C
F
HN
dRibose
C C fosfato
O N Exceções: medula óssea(tecido
Inibição da síntese formador do sangue e da maior Células em crescimento rápido
de timidilato na dRibose parte do sistema imune, mucosa necessitam de suprimento contínuo
terapia contra o fosfato intestinal, folículos pilosos. de dTMP, células normais não.
câncer
 Conversão de ribonucleotídeos em
Base
desoxirribonucleotídeos O Base
O

O P O O P O CH2
CH2 O
O
ATP dATP O
O C C C C
H H H H
H C C H
H C C H
Ribonucleotídeo
OH OH redutase OH H

Nucleotídeo Deoxinucleotídeo
5’-difosfato 5’-difosfato

Subunidade Subunidade
B1 B1 ATIVA

dATP
ATP Inibe
dATP
ATP
SH SH
SH SH
Nucleotídeo Deoxinucleotídeo
CTP
CTP
UTP
ATP
GTP
UTP
ATP CTP
CTP
UTP
ATP
GTP
UTP
ATP
5’-difosfato Subunidade Subunidade 5’-difosfato
dATP
dUTP
dGTPB2
dCTP B2 dATP
dUTP
dCTP
dGTP
Ribonucleotídeo redutase
 Conversão de ribonucleotídeos em
dGTP estimula a
desoxirribonucleotídeos
ATP estimula a 2 sítios de
redução de ADP redução de CDP e especificidade
UDP dGTP inibe a redução
de UDP e CDP

dTTP estimula a
dTTP inibe a redução
redução de GDP
de UDP e CDP
R1 b1 R2 b2

Sitios alostéricos ATP ativa ATP ativa

2 sítios de
atividade

dATP inibe dATP inibe

O ATP ativa a redução de
pirimidinas. H-S S-H
H-S S-H dATP inibe a atividade
Sítios de ligação do substrato
Tyr Glu Tyr
catalítica geral da
Fe 1 Fe 2 Glu
enzima.Isto explica a
Asp
toxicidade dos níveis
Glu
His His
aumentados de dATP
R 2 1 R 2 2 observada na deficiência
de adenosina deaminase
 adenosina
NH2
Catabolismo Purinas
O
NH2
N
N
1. 5-nucleotidase
N N
N NH

N NH
O NH N
O NH N NH2
O HO P O
O HO P O
OH O
OH
OH OH
OH OH
2. ADA OH OH

O inosina
HN
N
Xantina Ác.úrico
hipoxantina
O O
N NH O
H
O N N
HN N HN
HN
O

NH NH O NH NH
NH
OH OH O NH

3. nucleosidase 4.Xantina oxidase 5. Xantina oxidase

 O
Catabolismo de O
C CH3
pirimidinas nos HN C NADP+ C CH3
NADPH + H+
animais HN C H
C C H
O N H Dihidrouracil C C
O H
desidrogenase N
TIMINA
DIHIDROTIMINA

O H4N+ HCO3
H2O H H O H2O H H O
C C C C C
N O b-ureídopropionase H3N +
C O
Dihidropiriminidase H2N C
H CH3 H CH3
H
UREIDOISOBUTIRATO Β-AMINOISOBUTIRATO

-CETOGLUTARATO GLUTAMATO O O
C C
O O Coenzima B12
C
H CH3
METILMALONIL-CoA
MUTASE
Succinil-
METILMALONIL CoA
SEMIALDEÍDO É possível sintetizar glicose com
produtos da degradação de
pirimidinas?
 Distúrbio gênico bases nitrogenadas
Doença Defeito Efeito Manifestação Herança
enzimático
Gota PRPP Vm Ác. úrico X

Lesch Nyhan HGPRTasse Parcial Superprodução e X

excreção de
purina; paralisia
cerebral e
automutilação
Imunodeficiência Adenosina Deficiência Imunodeficiência Autossômico
combinada deaminase grave TeB recessiva

Xantinúria Xantina Deficiência Litíase renal e Autossômico

oxidase completa hipouricemia recessiva
 Síndrome de Lesch Nyhan
Abstract Lesch–Nyhan disease (LND) is caused by deficiency of the purine
salvage enzyme hypoxanthineguanine phosphoribosyltransferase (HPRT).
Affected individuals exhibit over-production of uric acid, along with a
characteristic neurobehavioural syndrome that includes mental retardation,
recurrent self-injurious behaviour and motor disability. Prior studies involving
relatively small numbers of patients have provided different conclusions on the
nature of the motor disorder. The current study includes the results of a multi-
centre international prospective study of the motor disorder in the largest cohort
of patients studied to date. A total of 44 patients ranging from 2 to 38 years
presented a characteristic motor syndrome that involved severe action dystonia
superimposed on baseline hypotonia. Although some patients also displayed
other extrapyramidal or pyramidal signs, these were always less prominent than
dystonia. These results are compared with a comprehensive review of 122 prior
reports that included a total of 254 patients. Explanations for the differing
observations available in the literature are provided, along with a summary of
how the motor disorder of LND relates to current understanding of its
pathophysiology involving the basal ganglia

Jinnah et al, 2006

Sindrome de Lesch Nyhan
 Causas de hiperuricemia e Classificação de gota

• Hiperuricemia • Gota
– Primária
– Dieta • A maioria dos pacientes
– Superprodução de excretam baixa quantidade
Ác. Úrico, poucos produzem
urato excesso

– Baixa secreção de – Secundária

uratos • Baixa secreção:
insuficiência renal ou
uso de diurético
• Superprodução
Doenças
mieloproliferativas
Formação do cálculo
Podagra -
Lesão óssea por processo
inflamatório repetido
Tofo gotoso
Depósito de ác. Úrico e inflamação
Depósito de ác. Úrico e inflamação
Depósito de ác. Úrico e inflamação
Depósito de ác. Úrico e inflamação
Depósito de ác. Úrico e inflamação
Depósito de ác. Úrico
inflamação e erisipela
Imunopatogênese da gota

Schett et al, 2015

Imunopatogenese da gota

Schett et al, 2015

Imunopatogenese da gota

Schett et al, 2015

 Acido úrico e imunopatogenese
lesão renal
Urate crystals activate innate immunity through Toll like receptor 4 (TLR4) activation,
leading to the formation of the NACHT, LRR and PYD domains-containing protein 3
[NALP3; also known as NOD-like receptor family, pyrin domain containing 3 (NALP3)
and cryopyrin] inflammasome, caspase-1 activation and interleukin (IL)-1β expression
in gout. However, whether elevated serum uric acid (UA) levels are associated with
the development and progression of renal diseases without renal urate crystal
deposition remains unknown. In the present study, human primary renal proximal
tubule epithelial cells were incubated with soluble UA (100 µg/ml) with or without the
TLR4 inhibitor, TAK242 (1 µM). The gene expression and protein synthesis of TLR4,
NALP3, caspase-1, IL-1β and intercellular adhesion molecule-1 (ICAM-1) were
detected by real-time PCR, ELISA, western blot analysis and fluorescence-activated
cell sorting (FACS), respectively. Soluble UA significantly enhanced TLR4, NALP3,
caspase-1, IL-1β and ICAM-1 expression in the human primary renal proximal tubule
epithelial cells. The TLR4 inhibitor, TAK242 effectively blocked the soluble UA-induced
upregulation of TLR4, NALP3, caspase-1, IL-1β and ICAM-1 expression in the human
primary renal proximal tubule epithelial cells. Our findings indicate that soluble UA
enhances NALP3 expression, caspase-1 activation, IL-1β and ICAM-1 production in
renal proximal tubule epithelial cells in a TLR4-dependent manner, suggesting the
activation of innate immunity in human primary renal proximal tubule epithelial cells by
soluble UA.
• Jing Xiao et al, 2015