16/11/2020

Classificação dos Métodos Analíticos

A química analítica lida com os métodos de determinação da composição

química de amostras de materiais. Um método qualitativo fornece
informações sobre a identidade das espécies atômicas ou moleculares ou dos
grupos funcionais presentes em uma amostra. Um método quantitativo, por
outro lado, provê informações numéricas, como a quantidade relativa de um
ou mais desses componentes.

Métodos clássicos
• Métodos gravimétricos e titulométricos.
Métodos Instrumentais

Tipos de Métodos Instrumentais

Propriedades físicas e químicas empregadas pelos métodos instrumentais

Instrumentos para Análises

• Um instrumento para análise química converte informação sobre as

características físicas ou químicas de um analito em informação que pode
ser manipulada e interpretada por um ser humano;

• O estímulo evidencia uma resposta do sistema em estudo, cujas natureza e

magnitude são governadas pelas leis fundamentais da física e da química.

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Instrumentos para Análises

Alguns exemplos de componentes de instrumentos

Instrumentos para Análises

Domínios de dados: codificação da informação sobre o analito a partir de
características físicas e químicas

Domínios
não-elétricos

Domínios
elétricos

Domínios elétricos

Métodos Instrumentais Domínio Domínio Domínio

modernos: não-elétrico elétrico não-elétrico

Instrumentos para Análises

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Calibração dos Métodos Instrumentais

✓ Uma etapa muito importante de todos os procedimentos analíticos

consiste no processo de calibração e de padronização;

✓ A calibração determina a relação entre a resposta analítica e a

concentração do analito, sendo obtida utilizando padrões químicos;

✓ Quase todos os métodos analíticos requerem algum tipo de calibração

com padrões químicos;

✓ Alguns métodos gravimétricos e alguns métodos coulométricos estão

entre os poucos métodos absolutos;

Calibração dos Métodos Instrumentais

✓ Calibração: determina a relação entre a resposta analítica e a

concentração do analito.

✓ Métodos existentes:

❑ Comparação com padrões;

❑ Comparação com padrões externos;

❑ Métodos de Adição de Padrão;

❑ Método do Padrão Interno;

Calibração dos Métodos Instrumentais

Comparação com padrões: Titulações

▪ O analito reage quimicamente com um

reagente padronizado (o titulante) em uma
reação de estequiometria conhecida até que
a equivalência química seja encontrada;

▪ A quantidade de reagente padronizado

necessário para se obter a equivalência química
pode então ser relacionada à quantidade de
analito presente na amostra.

▪ Exemplos: titulações volumétricas,

gravimétricas, coulométricas.

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Calibração dos Métodos Instrumentais

Calibração com padrões externos
▪ Padrões externos são preparados separadamente da amostra;
▪ São empregados para se calibrar instrumentos e procedimentos
quando não há interferências advindos dos componentes da matriz
presentes na solução do analito;
▪ Uma série de padrões externos
contendo o analito em
concentrações conhecidas é
preparada;
▪ Uma curva de calibração (ou
curva analítica) é preparada
construindo-se um gráfico a
partir dos dados.

Calibração dos Métodos Instrumentais

Calibração com padrões externos: método dos mínimos quadrados
• Existe uma relação verdadeiramente
linear entre a resposta medida y e a
concentração analítica do padrão x.
A relação matemática que descreve
essa consideração é denominada
modelo de regressão, que pode ser
representada como:

• Consideramos que qualquer

desvio de pontos individuais da
linha reta é decorrente de erros na
medida, isto é, consideramos que
não há erro nos valores de x dos
pontos (concentrações).

Calibração dos Métodos Instrumentais

Calibração com padrões externos: método dos mínimos quadrados

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Calibração dos Métodos Instrumentais

Calibração com padrões externos: método dos mínimos quadrados
• A linha gerada pelo método dos mínimos quadrados é aquela que minimiza a
soma dos quadrados dos resíduos para todos os pontos.

• O cálculo da inclinação e do intercepto é simplificado quando três quantidades

são definidas, SSxx, SSyy e SSxy, da maneira como segue:

Calibração dos Métodos Instrumentais

Calibração com padrões externos: método dos mínimos quadrados

• Informações que podem ser calculadas utilizando Sxx, Syy e Sxy:

1. Inclinação da reta, m: 4. O desvio padrão da
inclinação, sm:

2. O intercepto, b:

3. O desvio padrão da regressão, sr:

Calibração dos Métodos Instrumentais

Calibração com padrões externos: método dos mínimos quadrados

• Informações que podem ser calculadas utilizando Sxx, Syy e Sxy:

5. O desvio padrão do intercepto, sb:

6. O desvio padrão dos resultados obtidos a partir da curva de

calibração, sc:

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Calibração dos Métodos Instrumentais

Calibração com padrões externos: método dos mínimos quadrados
• Interpretação dos resultados dos mínimos quadrados:
✓ Quanto mais próximos os pontos estão da linha prevista pela análise dos
mínimos quadrados, menores são os resíduos;
✓ A soma dos quadrados dos resíduos, SSresid, é a medida da variação nos
valores observados das variáveis dependentes (valores de y), que não são
explicados pela relação linear prevista entre x e y.

✓ Também podemos definir a soma total dos quadrados, SStot, como:

Calibração dos Métodos Instrumentais

Calibração com padrões externos: método dos mínimos quadrados
• Interpretação dos resultados dos mínimos quadrados:
✓ Uma quantidade importante chamada quadrado do coeficiente de correlação
(R2) mede a fração da variação observada em y que é explicada pela relação
linear e é fornecida por:

✓ Quanto mais próximo R2 está da unidade, melhor o modelo linear explica as

variações de y;
✓ A diferença entre SStot e SSresid é a soma dos quadrados devido à regressão,
SSregr. Em contraste com SSresid, SSregr é uma medida da variação explicada.

Calibração dos Métodos Instrumentais

Calibração com padrões externos: método dos mínimos quadrados
• Interpretação dos resultados dos mínimos quadrados:
✓ :O valor de F fornece uma indicação da significância da regressão. É usado para
testar a hipótese nula de que a variância total em y é igual a variância
decorrente do erro.

✓ Uma regressão significativa é aquela na qual a variação nos valores de y

decorrente da relação linear prevista é grande comparada com aquela
devido ao erro (resíduos). Quando a regressão é significativa, ocorre um
valor grande de F.

✓ O valor de F é obtido dividindo-se a soma dos quadrados pelo número de

graus de liberdade apropriado, podemos obter os valores médios da
regressão e para os resíduos (erros) ao quadrado.

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Calibração dos Métodos Instrumentais

Calibração com padrões externos: método dos mínimos quadrados

Calibração dos Métodos Instrumentais

Calibração com padrões externos: método dos mínimos quadrados
Tabela 8.1: Dados da Calibração para a Determinação de Isoctano em Mistura
Porcentagem Molar Área do
N (xi)2 (yi)2 xi.yi
de Isoctano, xi Pico yi
1 0,352 1,09 0,12390 1,1881 0,3837
2 0,803 1,78 0,64481 3,1684 1,4293
3 1,08 2,6 1,16640 6,7600 2,8080
4 1,38 3,03 1,90440 9,1809 4,1814
5 1,75 4,01 3,06250 16,0801 7,0175
Somatório 5,365 12,51 6,90201 36,3775 15,8199

Sxx Syy Sxy

Calibração dos Métodos Instrumentais

Calibração com padrões externos: método dos mínimos quadrados
Tabela 8.1: Dados da Calibração para a Determinação de Isoctano em Mistura
Porcentagem Molar Área do
N (xi)2 (yi)2 xi.yi
de Isoctano, xi Pico yi
1 0,352 1,09 0,12390 1,1881 0,3837
2 0,803 1,78 0,64481 3,1684 1,4293
3 1,08 2,6 1,16640 6,7600 2,8080
4 1,38 3,03 1,90440 9,1809 4,1814
5 1,75 4,01 3,06250 16,0801 7,0175
Somatório 5,365 12,51 6,90201 36,3775 15,8199

Sxx = 1,14537

Sxy = 2,39669

Equação da reta: y = 2,09.x + 0,26

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Calibração dos Métodos Instrumentais

Calibração com padrões externos: método dos mínimos quadrados

Sxx = 1,14537 Syy = 5,07748

Desvio padrão da regressão

Desvio padrão da inclinação

Desvio padrão do intercepto

Calibração dos Métodos Instrumentais

Calibração com padrões externos: método dos mínimos quadrados
Uma área de pico de 2,65 foi obtida. Calcule:
a) a porcentagem molar de isoctano na mistura Sxx = 1,14537
b) o desvio padrão se a área foi:
b.1) o resultado de uma única medida b.2) a média de quatro medidas.
Resolução:
a) a porcentagem molar de isoctano na mistura
y = 2,65
y = 2,09.x + 0,26
x=?
b.1 )o desvio padrão se a área foi o resultado de uma única medida
Única medida Média de yi
M=1

Calibração dos Métodos Instrumentais

Calibração com padrões externos: método dos mínimos quadrados
b.1 )o desvio padrão se a área foi o resultado de uma única medida
Única medida Média de yi
M=1

b.2 )o desvio padrão se a área foi a média de quatro medidas

4 medidas Média de yi
M=4

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Calibração dos Métodos Instrumentais

Calibração com padrões externos: método dos mínimos quadrados
• Interpretação dos resultados dos Mínimos Quadrados: valor de R2

Calibração dos Métodos Instrumentais

Calibração com padrões externos: método dos mínimos quadrados
• Interpretação dos resultados dos Mínimos Quadrados: valor de F

✓ Cinco pares xy foram usados para a análise;

✓ A soma total dos quadrados tem quatro graus de liberdade associados a ela,
uma vez que um deles é perdido no cálculo da média dos valores de y;
✓ A soma dos quadrados devido aos resíduos possui três graus de liberdade,
porque dois parâmetros m e b são estimados.
✓ Além disso, SSregr tem apenas um grau de liberdade, pois corresponde à
diferença entre SStot e SSresid :

Calibração dos Métodos Instrumentais

Calibração com padrões externos: Erros na calibração por padrões externos

• Quando empregamos padrões externos, assumimos que as mesmas respostas
serão obtidas quando a mesma concentração do analito estiver presente na
amostra e no padrão;

• Relação funcional (equação da reta) de calibração entre a resposta e a

concentração do analito deve também ser aplicada a amostra;

• Correção na medida da amostra: leitura do branco;

• Efeitos de matriz: espécies químicas presentes na amostra os quais não estão

presentes nas soluções do branco e padrões.

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Calibração dos Métodos Instrumentais

Método de adição de padrão
• Adição de quantidades conhecidas
de analito à amostra;
• É aplicado quando a composição da
amostra é desconhecida ou
complexa e afeta o sinal analítico;

• Efeito de matrix: mudança no sinal

analítico causado por alguma
espécie química presente na
amostra diferente do analito;

Calibração dos Métodos Instrumentais

Método de adição de padrão

Calibração dos Métodos Instrumentais

Método de adição de padrão

• Consideremos que várias alíquotas Vx da solução da amostra de concentração
cx são transferidas para balões volumétricos de volume Vt ;

• Em cada um desses balões é adicionado um volume variável Vp de uma

solução padrão do analito de concentração conhecida cp ;

• As medidas instrumentais são realizadas para cada uma dessas soluções e

corrigidas para a resposta do branco a fim de se obter a resposta líquida do
instrumento S ;

• Se a resposta do instrumento corrigida pelo branco é proporcional a

concentração, podemos escrever:

• K é uma constante de proporcionalidade;

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Calibração dos Métodos Instrumentais

Método de adição de padrão

• Um gráfico de S em função de Vs é uma linha reta da forma:

• Aplicando a razão de b e m para encontramos cx:

Calibração dos Métodos Instrumentais

Método de adição de padrão

• A diferença entre o volume do
padrão adicionado na origem
(zero) e o valor do volume na
interseção da linha com o eixo x
(ou intercepto em x (Vs)0 ) é o
volume de reagente padrão
equivalente a quantidade de
analito na amostra;

Calibração dos Métodos Instrumentais

Método de adição de padrão
• Alíquotas de 10 mL de uma amostra de água natural foram pipetadas em
frascos volumétricos de 50,00 mL. Exatamente 0,00; 5,00; 10,00; 15,00 e
20,00 mL de uma solução padrão contendo 11,1 ppm de Fe3+ foram
transferidos para cada frasco, seguido por um excesso de íon tiocianato
para formar o complexo vermelho Fe(SCN)2+. Após avolumar , a resposta
do instrumento S para cada uma das cinco soluções foram medidas com
colorímetro. Os dados obtidos foram: 0,240; 0,437; 0,621; 0,809 e 1.009
respectivamente. (a) Qual a concentração de Fe3+ na amostra de água? (b)
Calcular o desvio padrão na concentração de Fe3+

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Calibração dos Métodos Instrumentais

Método de adição de padrão

(a) Qual a concentração de Fe3+ na amostra de água?

Calibração dos Métodos Instrumentais

Método de adição de padrão

(b) Calcular o desvio padrão na concentração de Fe3+

0,004858 1 (0 – 0,6232)2
=
0,0382 5
+
0,03822 x 250
= 0,14

= 0,14 (11,1 / 10,0) = 0,16

Concentração de Fe3+ = 7,01  0,16

Calibração dos Métodos Instrumentais

Método do padrão interno: definições
• Um padrão interno é uma substancia que é adicionada em uma quantidade
constante em todas as amostras, brancos e padrões de calibração;
• A calibração é feita plotando um gráfico envolvendo a razão do sinal do analito
com o sinal do padrão interno como uma função da concentração do analito
dos padrões;
• Esta razão para a amostra é utilizada para obter a concentração do analito a
partir da curva de calibração;
• É utilizado principalmente para compensar vários tipos de erros aleatórios e
sistemáticos;
• Assim, se os sinais analito e padrão interno responderem proporcionalmente a
flutuações aleatórias de instrumentos e métodos, a proporção desses sinais é
independente de tais flutuações. E se os dois sinais são influenciados da
mesma maneira pelos efeitos da matriz, compensação desses efeitos também
ocorre.

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Calibração dos Métodos Instrumentais

Método do padrão interno: critérios

• O padrão interno deve fornecer um sinal semelhante ao sinal do analito,

mas suficientemente diferentes para que os dois sinais sejam distinguíveis
pelo instrumento;

• O padrão interno deve estar ausente da matriz da amostra, de modo que

a único fonte do padrão interno é a quantidade adicionada;

• Por exemplo, o lítio é um bom padrão interno para a determinação de sódio

ou potássio no soro sanguíneo porque o comportamento químico do lítio é
semelhante aos dois analitos, mas não ocorre naturalmente no sangue.

Calibração dos Métodos Instrumentais

Método do padrão interno: analise de sódio por AAS utilizando lítio
como padrão interno

Calibração dos Métodos Instrumentais

Método do padrão interno: analise de sódio por AAS utilizando lítio
como padrão interno
• Adição de 1000 ppm de Li;

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Seleção de um Método Analítico

Definição do problema
1. Qual é a exatidão necessária?
2. Qual é a quantidade de amostra disponível?

3. Qual é a faixa de concentração do analito?

4. Quais os componentes da amostra podem causar interferências?

5. Quais as propriedades físicas e químicas da matriz da amostra?

6. Quantas amostras devem ser analisadas?

Seleção de um Método Analítico

Características de desempenho dos instrumentos

Seleção de um Método Analítico

Precisão
• Afeta a proximidade dos dados obtidos (replicatas);

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Seleção de um Método Analítico

Viés
• Está relacionado a exatidão do método;

• Afeta a proximidade dos dados obtidos com o valor conhecido ou dito

verdadeiro;

• Correção: utilização de materiais de referências certificado;

Seleção de um Método Analítico

Sensibilidade
• A definição quantitativa de sensibilidade que é aceita pela União
Internacional de Química Pura e Aplicada (IUPAC) é a sensibilidade de
calibração, que é a inclinação do curva de calibração na concentração de
interesse;

• A sensibilidade de um método ou instrumento é uma medida da sua

habilidade em discriminar pequenas diferenças na concentração do analito;

Seleção de um Método Analítico

Limite de detecção
• É a concentração mínima do analito que pode ser detectada em um dado nível
de confiança;

• Este limite depende da razão entre a magnitude do sinal analítico e o tamanho

das flutuações estatísticas no sinal do branco;

• Onde K = 3, a um nível de confiança de 95%

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Seleção de um Método Analítico

Faixa dinâmica
• A faixa dinâmica linear de um método analítico refere-se à faixa de
concentração que pode ser determinada com uma curva de calibração linear;
• O limite inferior da faixa dinâmica é geralmente considerado como o limite de
detecção;

Seleção de um Método Analítico

Seletividade
• A seletividade de um método analítico refere-se a quanto a resposta que ele
fornece para o analito se mostra livre de interferência por outras espécies
contidas na matriz da amostra;

• A especificidade e a seletividade estão relacionadas ao evento da

detecção;

• Um método que produz resposta para apenas um analito é chamado

específico e respostas para vários analitos, mas que pode distinguir a
resposta de um analito da de outros, é chamado seletivo (livre de
interferência);

• Avaliação da seletividade de um método: “carta de seletividade”.

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