Aula 11

Reações Gerais, precipitação e solubilidade de proteínas

PRÉ-LAB

Autor: Leonardo Bayer Pereira RA 813189

MATERIAIS E REAGENTES UTILIZADOS:

 Solução de ninidrina 10% (p/v) em etanol

 Glicina 0,1 mol/l; Prolina 0,1 mol/l; Tirosina 0,1 mol/l; Triptofano 0,1 mol/l.
 Solução aquosa de clara de ovo (solução aquosa de albumina = 1 clara para 500 mL de água).
 Solução de gelatina 2%
 NaOH 2 mol/L; NaOH 12 mol/L
 CuSO4 0,5%
 Reagente de Folin-Ciocalteau
 HNO3 concentrado (16 mol/L) e 2 mol/L
 Ácido tricloroacético (TCA) 20 %
 AgNO3 (1 mol/L)
 Acetona 100%
 Etanol Absoluto
 NaCl 1 mol/L
 (NH4)2SO4 saturado (4 mol/L)
 Pipetas volumétricas

PROCEDIMENTOS EXPERIMENTAIS

A – Reações gerais para identificação de proteínas e aminoácidos

A.1 – Reação com Ninidrina – Identificação de Aminoácidos

Tarefas:

 Preparar bateria de 4 tubos de ensaio (1 a 4). Tubo 1: água destilada; Tubo 2:

Glicina 0,1mol/L; Tubo 3: Prolina 0,1mol/L; Tubo 4: Solução aquosa de clara de
ovo.
 Adicionar 5 gotas de Ninidrina em cada tubo
 Aquecer os tubos em banho maria por 5 min.
 Observar, discutir e explicar a coloração observada.
A.2 Reação do Biureto – Identificação da Ligação Peptídica

Procedimentos:

 Preparar 4 tubos (5 a 8). Tubo 5: Branco 2mL; Tubo 6: 2mL Glicina 0,1 mol/L;
Tubo 7: Gelatina 2% 2mL; Tubo 8 Solução aquosa de clara de ovo 2mL
 Adicionar à cada tubo 2mL de NaOH 2M e 8 gotas de CuSO4 0,5% e misturar
bem. Coloração violeta indica ligação peptídica.
 Observar e explicar o aparecimento de coloração na solução.

A.3 Reação de Folin-Ciocalteau

Procedimentos:

 Preparar bateria de 4 tubos (9 a 12). Tubo 9: 0,2mL Branco; Tubo 10: 0,2mL
Tirosina 0,1mol/L; Tubo 11: 0,2mL Glicina 0,1M; Tubo 12: clara de ovo 0,2mL.
 Adicionar 0,6mL de NaOH 2mol/L a cada tubo
 Adicionar 8mL de água destilada à cada tubo
 Adicionar o reagente de Folin-Ciocalteau a todos os tubos lentamente.
 Discutir as cores observadas

A.4 – Reação Xantoproteica

Procedimentos:

 Preparar 4 tubos (13 a 16). Tubo 13: 2mL Branco; Tubo 14: 2mL Tirosina
0,1mol/L; Tubo 15: 2mL Triptofano 0,1M; Tubo 16: clara de ovo 2mL.
 Adicionar 250 microlitros de HNO3 concentrado.
 Formará precipitado
 Aquecer tubos em água fervente por 2min
 Anotar as cores formadas
 Após resfriamento, adicionar gota a gota 0,25mL de NaOH 12M
 Observar e anotar resultados

B – REAÇÕES DE PRECIPITAÇÃO/DESNATURAÇÃO DE PROTEÍNAS

Preparar 6 tubos: B1 a B6

B.1 – Calor
Procedimentos:

 Adicionar 2ML de clara de ovo e aquecer em banho de água fervente por 3 min.
 Observar e explicar resultados

B2 – Ácidos Fortes

Procedimentos

 Preparar tubos B2 e B3 com 1mL de solução aquosa de clara de ovo

 Adicionar 1mL de HNO3 2M no tubo B2
 Adicionar 1mL de TCA 20% no tubo B3
 Observar e analisar os resultados

B3 – Metal Pesado

Procedimentos:

 No tubo B4, adicionar 1mL da solução aquosa de clara de ovo

 Adicionar 1mL da solução de AgNO3 1M
 Observar e explicar o resultado

B4 – Solventes Orgânicos

Procedimentos:

 Preparar tubo B5 com 1mL de solução aquosa de clara de ovo + 1mL de

Acetona 100%
 Preparar tubo B6 com 1mL de solução aquosa de clara de ovo + 1mL de etanol
absoluto
 Observar a explicar resultados

C – EFEITOS DA ADIÇÃO DE SAIS NA SOLUBILIDADE PROTEICA

C.1 Solubilização por salting-in

Procedimentos:

 Pipetar 3mL de clara de ovo em tubo Falco

 Adicionar 10mL de água destilada
 Agitar com bastão de vidro até precipitação
 Adicionar NaCl 1M até ressobilização
  Explicar a causa da precipitação

C2 – Precipitação por salting-out

Procedimento:

 Preparar tubo identificado como C

 Adicionar 3mL da solução obtida em C1
 Adicionar 3mL de (NH4)2SO4 4M e observar formação de precipitado
 Discutir a respeito do estado do precipitado proteico
 Adicionar 5mL de água destilada
 Fazer inversão do tubo lentamente, observando ressolubilização.
 Discutir os resultados e fundamentos teóricos dos métodos.