UNIVERSIDADE DE UBERABA – UNIUBE

PRÓ-REITORIA DE ENSINO SUPERIOR – PROES

COMPONENTE INSTITUCIONAL
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ROTEIRO DE AULA PRÁTICA

IDENTIFICAÇÃO:

• CURSO: COMPONENTE INSTITUCIONAL

• DISCIPLINA: CIÊNCIAS FISIOLÓGICAS
• DOCENTE: GLAUCIA HELENA FORTES; ISABEL CRISTINA RESENDE LOPES; MARCELO
RODRIGUES PINTO; MARIA THERESA CERAVOLO LAGUNA ABREU; SOFIA NOBRE
NOVAIS
• LABORATÓRIO: S310; S312; S314
• AULA 3
• HORÁRIO: MULTIPERIÓDICO/NOTURNO

TÍTULO: “RESPONSIVIDADE DAS CÉLULAS CARDÍACAS DE RÃ E RATOS À ESTÍMULOS

TÉRMICO, QUÍMICO E ELÉTRICO” (VÍDEO DE AULA PRÁTICA).

OBJETIVOS:

- Consolidar a estrutura morfológica da membrana celular;

- Estabelecer o conhecimento sobre os diferentes tipos de canais iônicos;
- Visualizar, em vídeo de aula prática, a responsividade das células cardíacas a
diferentes modalidades de estímulo, tais como térmico, químico e elétrico.

TEXTO DE APOIO:

Na aula de hoje você deverá fazer observação, análise e discussão de um vídeo de

aula prática previamente preparado sobre a responsividade das células cardíacas (do
coração de rã ou ratos) à diferentes modalidades de estímulos, tais como, estímulo
térmico (solução fisiológica esfriada e aquecida), químico (adrenalina e acetilcolina) e
elétrico (estimulador elétrico), uma vez que você deverá anteriormente a esta aula
fazer a leitura do texto abaixo o qual refere-se ao estudo da membrana celular e os
tipos de canais iônicos presentes na mesma, tais como os canais sensíveis à voltagem,
sensíveis a ligantes (substâncias químicas), sensíveis a estímulos físicos (mecânico,
térmico) e canais de vazamento.

MEMBRANA CELULAR
A membrana celular reveste as células e define os seus limites, sendo também
conhecida por membrana citoplasmática ou plasmalema. É uma estrutura trilaminar
cuja espessura é da ordem de 75Å e, por isso, só pode ser observada com o auxílio da
microscopia eletrônica. Ela é tipicamente lipoprotéica, ou seja, é formada
principalmente por lipídeos e proteínas, mas também apresenta hidratos de carbono.
Os lipídios mais comuns na membrana são os fosfolipídios, esfingolipídios e esteroides.
Por outro lado, ela apresenta uma variedade muito grande de diferentes tipos de
proteínas. Moléculas de açúcares associam-se a proteínas e lipídios, formando,
respectivamente, glicoproteínas e glicolipídios, constituintes do glicocálix, relacionado

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com o reconhecimento intercelular. Uma vez identificados os fosfolipídios e as
proteínas como os principais componentes moleculares da membrana, os cientistas
passaram a investigar como estas substâncias estavam organizadas.

ORGANIZAÇÃO MOLECULAR DA MEMBRANA PLASMÁTICA

O modelo do mosaico fluído

A disposição das moléculas na membrana plasmática foi elucidada
recentemente, sendo que os lipídios formam uma camada dupla e contínua, no meio da
qual se encaixam moléculas de proteína. A dupla camada de fosfolipídios é fluida, de
consistência oleosa, e as proteínas mudam de posição continuamente, como se fossem
peças de um mosaico. Esse modelo foi sugerido por dois pesquisadores, Singer e
Nicholson, e recebeu o nome de Modelo do Mosaico Fluido.

FUNÇÕES DAS PROTEÍNAS NA MEMBRANA PLASMÁTICA

As proteínas da membrana plasmática exercem grandes variedades de funções:
atuam preferencialmente nos mecanismos de transporte, organizando verdadeiros
túneis que permitem a passagem de substâncias para dentro e para fora da célula,
funcionam como receptores de membrana, encarregadas de receber sinais de
substâncias que levam alguma mensagem para a célula, favorecem a adesão de células
adjacentes em um tecido, servem como ponto de ancoragem para o citoesqueleto.

• Proteínas de adesão: ocasionam adesão entre a membrana de células adjacentes

(junções celulares) ou adesão entre a membrana de uma célula e a matriz
extracelular.
• Proteínas de reconhecimento: determinadas glicoproteínas atuam na membrana
como um verdadeiro “selo marcador”, sendo identificadas especificamente por
outras células.
• Proteínas receptoras: apresentam um sítio receptor para que um mediador
químico endógeno específico possa ligar e agir sobre a célula.

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• Proteínas de transporte: constituem as proteínas que formam os canais iônicos
(utilizadas para a difusão dos íons), as proteínas carreadoras utilizadas tanto
para a difusão facilitada (exemplos: proteína carreadora de glicose) como para o
transporte ativo.
• Proteínas de ação enzimática: uma ou mais proteínas podem atuar isoladamente
como enzima na membrana ou em conjunto, como se fossem parte de uma
“linha de montagem” de uma determinada via metabólica intracelular.
• Proteínas de ancoragem: função de ancoragem para o citoesqueleto.

FUNÇÕES DA MEMBRANA PLASMÁTICA:

• A membrana plasmática regula as trocas de substâncias entre a célula e o meio

extracelular, permitindo que a célula mantenha uma composição química
definida, diferente do meio extracelular (propriedade chamada permeabilidade
seletiva).
• A membrana plasmática intervém nos mecanismos de reconhecimento celular
por meio de receptores específicos, compostos por moléculas que reconhecem
agentes do meio, como, por exemplo, os hormônios e neurotransmissores.

PERMEABILIDADE SELETIVA DA MEMBRANA

Para a manutenção de suas funções vitais, uma célula necessita de substâncias

existentes no meio externo, como é o caso dos nutrientes. Por outro lado, a célula deve
eliminar outras substâncias, como as toxinas para o meio extracelular. Para permitir a
entrada e saída de substâncias, a membrana plasmática apresenta um comportamento
seletivo, realizado através de uma propriedade exclusiva, chamada de permeabilidade
seletiva. Assim, através dessa propriedade, o meio intracelular é capaz de manter uma
composição química específica, constante e diferente daquela existente no meio

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extracelular. Por exemplo, os lipídeos da membrana servem de barreira para as
substâncias hidrossolúveis, enquanto substâncias lipossolúveis, tais como os gases
respiratórios (O2, CO2), o álcool, cetonas e os anestésicos, difundem-se muito
facilmente através da membrana através da bicamada de fosfolipídios da membrana.
Por outro lado, as proteínas, por sua vez, que se encontram suspensas, individual ou
coletivamente, dentro da estrutura lipídica, formam canais que permitem o transporte
de determinadas substâncias, de forma seletiva, através da membrana, tais como as
substâncias hidrossolúveis, (glicose, aminoácidos, eletrólitos), as quais difundem-se
através da membrana utilizando proteínas transportadoras. No caso específico dos
eletrólitos, eles utilizam proteínas integrais denominadas de “canais iônicos”. Portanto,
o canal iônico é um “caminho” hidrofílico para os íons possam atravessar a membrana
celular.

CLASSIFICAÇÃO DOS CANAIS IÔNICOS QUANTO À REGULAÇÃO:

1- CANAL VOLTAGEM-DEPENDENTE OU REGULADOS A VOLTAGEM ELÉTRICA DA

MEMBRANA
São canais regulados pela voltagem elétrica específica da membrana celular.
Exemplos:
• canais de sódio e potássio presentes na membrana de células excitáveis como
neurônios e células da musculatura esquelética e cardíaca
• canais de cálcio (fundamentais secreção de neurotransmissores e hormônios;
contração muscular, sinalização intracelular), presentes na membrana de neurônios,
musculatura cardíaca e lisa, membrana do retículo sarcoplasmático

2- CANAIS LIGANTE-DEPENDENTES (QUIMIOSSENSÍVEIS)

São canais regulados por uma substância química, tais como, um
neurotransmissor (glutamato, GABA, acetilcolina, noradrenalina...), hormônio,
mediadores químicos envolvidos na resposta inflamatória (bradicinina, histamina e
prostaglandinas), regulados por segundos mensageiros intracelulares (GMPc, AMPc).

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3- SENSÍVEIS A ESTÍMULOS FÍSICOS (MECÂNICO - TÉRMICO).
São canais regulados por estímulos físicos, sejam mecânicos ou térmicos. Os
canais iônicos regulados por estímulo mecânico podem ser ativados por deformação
mecânica da membrana celular, tais como, estiramento, distensão, vibração, retração e
pressão. Os canais iônicos regulados por estímulos térmicos são denominados de canais
TRPV (transient receptor potential vaniloid), podendo esses serem ativados por
aquecimento ou resfriamento do tecido.

4- CANAIS DE VAZAMENTO
São canais que estão sempre abertos, ocasionando difusão contínua do íon
através dele.

5- CANAL REGULADO POR FOSFORILAÇÃO

São canais ativados pela fosforilação da membrana

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ORIENTAÇÃO PARA O DESENVOLVIMENTO DA PRÁTICA PELOS ESTUDANTES:

METODOLOGIA

ANIMAIS UTILIZADOS: RÃ E RATOS

A rá constitui um dos animais de escolha para esta aula prática por ser
inofensiva, de fácil aquisição, porte pequeno e fácil manipulação, mas sobretudo por
ser um animal pecilotermo, conhecidos como animais de "sangue frio", ou seja,
adaptam sua temperatura de acordo com a temperatura do meio ambiente, além de
que conservam a excitabilidade de seus tecidos por mais tempo que os animais de
sangue quente. Embora sejam homeotérmicos, ou seja, mantêm a temperatura
corporal constante frente as mudanças na temperatura ambiental, os ratos da linhagem
Wistar também foram utilizados para os procedimentos desta aula, uma vez que são
animais de pequeno porte, de fácil aquisição, reprodução e manipulação.

Obs: os animais utilizados foram obtidos de criadores/biotérios registrados. As práticas

foram aprovadas pelo Comitê de Ética em Experimentação Animal da UNIUBE, sendo as
práticas de manejo e eutanásia validadas pelo Conselho Nacional de Controle de
Experimentação Animal (Concea).

Procedimento experimental para o estudo da contratilidade cardíaca frente ao

resfriamento e aquecimento do coração isolado da rã.

1- Após constatação do quadro de choque medular, situação em que o animal não sente
os estímulos aplicados abaixo do nível de secção da medula espinhal, e também, não
movimenta, foi realizada uma laparotomia e toracotomia para visualização de seus
órgãos internos, inclusive observação e análise da atividade cardíaca;
2- Após isto, o coração da rã foi removido e colocado sobre a mesa cirúrgica. Observe e
analise o que aconteceu com o batimento cardíaco da rá após alguns minutos após ser
colocado sobre a mesa cirúrgica;
3- Imediatamente após esta observação, seu coração foi colocado em uma placa de Petri
preenchida com água resfriada por gelo para que o seu coração entrasse em
hipotermia. Novamente observe e analise o batimento cardíaco nesta situação;
4- Então o coração foi removido da água resfriada e novamente colocado sobre a mesa
cirúrgica. Observe e analise o que acontece com a atividade cardíaca a medida que o
coração vai sendo novamente aquecido;
5- Por fim, o coração foi colocado em uma placa de Petri preenchida com água aquecida a
37°C. Observe e analise o efeito do aquecimento do coração sobre a contratilidade
cardíaca.

Procedimento experimental para análise do efeito da adrenalina e acetilcolina no coração

do rato anestesiado

1- Após o animal ser pesado, o animal foi anestesiado através de uma injeção
intraperitoneal de pentobarbital sódico (40 mg/kg);

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2- Em seguida, o animal foi posicionado em decúbito dorsal numa prancha de madeira
(mesa cirúrgica), e então fixado à mesma através do uso de fita adesiva;
3- Para testar a efetividade da anestesia, a cauda do animal foi apertada com as pontas
digitais;
4- Após constatar a efetividade da anestesia, utilizando-se uma tesoura cirúrgica, foi feita
uma laparotomia e exposição e observação das vísceras intra-abdominais e o diafragma
(músculo respiratório que separa a cavidade torácica da abdominal);
5- Em seguida, através da utilização de uma tesoura cirúrgica, fez-se a toracotomia através
da secção do diafragma e esterno;
6- Após a toracotomia, para melhor visualização dos órgãos intratorácicos, as costelas
seccionadas foram afastadas utilizando-se pinças cirúrgicas;
7- Após a toracotomia, os pulmões encontravam-se retraídos ou colapsados devido ao
pneumotórax (ar na cavidade pleural);
8- O coração geralmente (depende da anestesia) apresenta taquicardia em resposta à
descarga simpática nesta emergência;
9- Após observar o batimento cardíaco (átrios e ventrículos contraindo na mesma
frequência, mas em tempos diferentes), a adrenalina foi gotejada sobre o coração da rã.
E então observou-se os efeitos da mesma sobre a contratilidade cardíaca;
10- Por fim, a acetilcolina foi gotejada sobre o coração da rã. E então observou-se os efeitos
da mesma sobre a contratilidade cardíaca;
11- Em outro rato anestesiado, o coração também foi exposto para estudar o efeito da
estimulação elétrica, máxima e difusa, sobre a contratilidade cardíaca.

PERGUNTAS:

1-Explique o que aconteceu com a contratilidade cardíaca quando o coração foi retirado
do corpo da rã e posicionado sobre a mesa cirúrgica.

2- Com base na eletrofisiologia dos canais iônicos, explique os efeitos da água resfriada
e água aquecida sobre a contratilidade do coração da rã.

3-Através observar o efeito da temperatura, explique o que você pensa sobre o efeito
da febre e hipotermia sobre outras células orgânicas, tais como os neurônios?

4- A atividade cardíaca é modulada pelo sistema endócrino e sistema nervoso, através

de mecanismos que afetam, essencialmente, a frequência cardíaca e a força de
contração desenvolvida pelos ventrículos. Com base na fisiologia dos canais iônicos,
explique o efeito da adrenalina e acetilcolina sobre contratilidade do coração do rato
anestesiado.

5- Com base na fisiologia dos canais iônicos, você acredita que a musculatura possa ser
responsiva à deformação mecânica (pressão, estiramento)? Explique e tente
exemplificar.

Referências Bibliográficas

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1. GUYTON, A.C.; HALL, J.E. Tratado de fisiologia médica. 12ed. Rio de Janeiro: Elsevier,
2011.
2. STANFIELD, C.L. Fisiologia Humana. 5ed. Pearson, 2014.

RELAÇÃO DOS INSUMOS NECESSÁRIOS:

1) EQUIPAMENTOS:

Equipamento Quantidade Opções

1. Datashow com cabo HDMI 1

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