UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE

ESCOLA DE QUÍMICA E ALIMENTOS

ENGENHARIA BIOQUÍMICA
PROCESSOS FERMENTATIVOS I

CINÉTICA DE CRESCIMENTO CELULAR

Saccharomyces cerevisiae ATCC 7754

Eduarda Soares (135086)

Larissa Soria (129417)
Victoria Luiza Gunther (127247)

Rio Grande
2023
 2

SUMÁRIO

1.Introdução ......................................................................................................................... 3
2.Objetivo ............................................................................................................................. 3
3.Revisão da literatura ......................................................................................................... 3
4.Material e métodos ............................................................................................................ 3
4.0 Microrganismos.............................................................................................................. 4
4.1 Preparo de inóculo ......................................................................................................... 4
4.2 Cultivo ............................................................................................................................ 4

4.3 Turbidimetria ................................................................................................................. 4

4.4 Determinação da concentração ...................................................................................... 4

4.5 Velocidade máxima de crescimento ............................................................................... 5

4.6 Tempo de geração .......................................................................................................... 5

4.7 Produtividade ................................................................................................................. 5

5. Resultados e discussão ..................................................................................................... 5
6. Conclusão ....................................................................................................................... 12
Referências bibliográficas .................................................................................................. 13
 3

1. INTRODUÇÃO

A dinâmica de crescimento dos microrganismos em um meio de cultura depende

da composição do meio, da cepa do microrganismo e das condições de cultivo. Quando
um meio de cultura é formulado com os nutrientes adequados e é semeado com um
inóculo de micro-organismos, as células começam a se multiplicar e crescer em um ritmo
que é próprio da sua taxa de crescimento (ALVES, 1996).
A taxa de crescimento de microrganismos está diretamente relacionada com a
concentração celular e pode ser descrita em função de diversos parâmetros que podem
influenciar o crescimento celular. O estudo da cinética é fundamental os parâmetros
cinéticos a que o microrganismo é submetido, possibilitam análise de produção de
células pretendida (BORZANI, et al., 2001).
A cinética de crescimento de S. cerevisiae ATCC 7754 é caracterizada pela curva
de crescimento em forma de S, que descreve uma fase lag, exponencial, estacionária e de
morte. A fase lag é caracterizada por um período de adaptação da levedura às condições
de cultivo. Durante uma fase exponencial, a levedura apresenta um rápido crescimento,
com alta taxa de multiplicação celular. Na fase estacionária, a taxa de crescimento
diminui, devido à falta de nutrientes e acúmulo de produtos metabólicos tóxicos. A fase
de morte ocorre quando a taxa de morte das células excede a taxa de crescimento,
levando à diminuição da população celular (TORTORA et al., 2000).
O estudo da cinética de crescimento de S. cerevisiae ATCC 7754 é importante
para a compreensão dos processos fermentativos e para o desenvolvimento de
estratégias de controle de qualidade em produtos alimentícios e de bebidas. Além disso,
a compreensão da cinética de crescimento desta levedura pode levar a melhorias na
produção industrial e em processos biotecnológicos que envolvem o uso de
microrganismos
2. OBJETIVO (MAUTONE, et al., 2008).
O objetivo da prática foi realizar a cinética de crescimento celular para a
levedura Saccharomyces cerevisiae ATCC 7754.
3. REVISÃO DA LITERATURA
Na revisão da literatura,visando uma melhor compreensão do tema, faz-se
necessário abordar os seguintes tópicos i) Leveduras Saccharomyces cerevisiae; ii)
Cinética de crescimento celular; iii) Curva de crescimento celular- velocidade máxima
de crescimento; iv) Meio de cultivo YM .
4. MATERIAL E MÉTODOS
 4

4.0 MICRORGANISMO
Foi utilizado a levedura Saccharomyces cerevisiae ATCC 7754
4.1 PREPARO DO INÓCULO
O método utilizado para definição da curva de crescimento foi o cultivo em
meio líquido YM preparado para 200 ml, apresentando composição: 20 g/L de
glicose, 3 g/L de extrato de levedura, 3 g/L de extrato de malte e 5 g/L de peptona,
o meio YM modificado tem a seguinte composição: 40 g/L de glicose, 3 g/L de
extrato de levedura, 3 g/L de extrato de malte e 5 g/L de peptona foram incubados
a 30ºC , por 24h a 100 rpm.
4.2 CULTIVO
O meio de fermentação foi constituído pelo mesmo meio utilizado para o
pré-inóculo. Após a incubação, os pré-inóculos foram transferidos para
erlenmeyers contendo um volume total de 300 ml, foi retirado 290 ml de meio YM
e 10 mL de inóculo estéril e foram colocados em incubadora com agitação orbital
a 30ºC e 100 rpm. Nas primeiras 10 horas, foram retiradas amostras com volume
de 10 mL de hora em hora e ao final do estudo cinético, após 24 horas para a
determinação da concentração da biomassa. Logo após a coleta das amostras,
foram medidos a transmitância dos sobrenadantes e a transmitância quanto à
concentração de massa seca.
4.3 TURBIDIMETRIA
O instrumento utilizado para medir a turbidez das amostras foi o
espectrofotômetro, através da alteração da luz a ser registrada na escala do
instrumento, assim obteve-se a transmitância da amostra e do sobrenadante,
sendo assim utilizamos a Equação 2 para ter os dados de absorbância.

=2− (% ) (1)

4.4 DETERMINAÇÃO DA CONCENTRAÇÃO

Utilizou-se a Equação 1 da curva padrão de Saccharomyces Cerevisiae
ATCC 7754, construida na prática anterior, substituindo os valores de
absorbância corrigida, para determinar a concentração de biomassa.

y = 1,200x + 0,044
 5

R² = 0,994 (2)

4.5 VELOCIDADE MÁXIMA DE CRESCIMENTO ( máx)

De acordo com Steckelberg (2001) o aumento da população relaciona-se
com a constante de proporcionalidade µ (taxa específica de crescimento), Equação
3 que após realizada a integral, considerando que µ é constante e igual a µmáx na
fase exponencial, obtém-se a Equação 4. Sendo esta equação similar à equação da
reta, Equação 5, linearizando se a curva e plotando-se ln (x/xo), obtém-se o
coeficiente angular que é igual ao µmáx. Onde: X representa a concentração de
biomassa (g/L). = . (3)

á . = ( ) (4)

= + (5)
4.6 TEMPO DE GERAÇÃO (TG)
O tempo de geração foi calculado através dos valores de á aplicado
Equação 6, para saber o tempo necessário que a população vai dobrar de
( )
= á
(6)

4.7 PRODUTIVIDADE
A produtividade de biomassa é uma medida da quantidade de biomassa que foi
produzida pela população em um determinado período de tempo. Foi calculada
aplicando os dados de concentração e o tempo de cada ponto na Equação 7 .
Construindo assim um gráfico de produtividade.

( )= (7)

5. RESULTADOS E DISCUSSÕES

A Tabela 1 apresenta os dados de transmitância e suas respectivas

do grupo G1 e a Tabela 2 apresenta os dados do grupo G2. Os resultados de
absorbância foram obtidos através da Equação 1 e a absorbância corrigida é
da ABS da amostra menos a ABS do sobrenadante. E a partir desses resultados
 6

possível obter a concentração da biomassa em g/L. Que vai ser aplicada nas
equações para se ter a curva de cinética de crescimento.

Tabela 1- Resultados da Transmitância e Absorbância do grupo G1

Tempo (h) FD Média %T Sd %T ABS amostra ABS sd ABS corrigida

0 1 42,6 94,7 0,370590401 0,023650021 0,34694038
1 1 43,45 95 0,362010219 0,022276395 0,339733825
2 1 32,45 93,4 0,488785299 0,029653124 0,459132175
3 5 63,55 99,3 0,196884445 0,003050752 0,193833694
4 5 53,25 100 0,273680388 0 0,273680388
5 5 33,35 99,4 0,476904162 0,002613616 0,474290546
6 10 71,9 100 0,14327111 0 0,14327111
7 10 64 100 0,193820026 0 0,193820026
8 10 32,15 100 0,492819023 0 0,492819023
24 50 78,45 100 0,105407052 0 0,105407052

Tabela 2- Resultados da Transmitância e Absorbância do grupo G2

Tempo (h) FD Média %T Sd %T ABS amostra ABS sd ABS corrigida

0 1 42,05 95,6 0,376234 0,019542108 0,356691892
1 1 40,35 95 0,394156461 0,022276395 0,371880066
2 1 35,65 95,2 0,447940466 0,021363052 0,426577414
3 1 24,95 95,4 0,60292945 0,020451625 0,582477825
4 5 53,75 97,9 0,269621531 0,009217308 0,260404223
5 5 35,65 95,7 0,447940466 0,019088062 0,428852404
6 5 24,4 98,7 0,612610174 0,005682847 0,606927326
7 10 39,9 99,1 0,399027104 0,003926346 0,395100759
8 10 32,05 100 0,494171966 0 0,494171966
24 50 69,55 100 0,157702866 0 0,157702866

A Tabela 3 apresenta os resultados das concentrações de biomassa em g/L

grupo G1 e G2. Assim foi utilizado a Equação 2 da reta gerada pela curva padrão,
 7

aplicando os resultados da absorbância obtidos na Equação 1, a fim de obter os

resultados para todas as soluções como apresentado nos cálculos abaixo.
y = 1,200x + 0,044
0,3469=1,200x + 0,044
X=0,2524 g/L

Tabela 3- Concentração de biomassa (g/L) dos grupos G1 e G2

Tempo (h) Conc g/L G1 Conc g/L G2
0 0,252450317 0,260576577
1 0,246444854 0,273233389
2 0,345943479 0,318814512
3 0,624307057 0,448731521
4 0,957001616 0,180336853
5 1,792877276 0,320710336
6 0,827259247 0,469106105
7 1,248500217 0,292583966
8 3,740158523 0,375143305
24 2,55862717 0,094752388

A partir da plotagem dos pontos de concentração de biomassa em relação ao

tempo de incubação, foi possível construir os gráficos de crescimento de biomassa dos
grupos G1 e G2.
Figura 1- Crescimento de biomassa G1

5
4,5
4
Concentração (g/L)

3,5
3
2,5
2
1,5
1
0,5
0
0 5 10 15 20 25
Tempo (h)
 8

Nesta Figura 1, para termos uma curva de crescimento, retiramos o ponto 5,

porque acreditamos que houve um erro na diluição. Assim conseguimos identificar que
os primeiros pontos representam a fase de latência do microrganismo, e a partir do
ponto 4 podemos observar a fase exponencial de crescimento, onde a biomassa está
crescendo. E após o ponto 8 fase de declínio.

Figura 2- Crescimento de biomassa G2

5,0
4,5
4,0
3,5
Concentração (g/L)

3,0
2,5
2,0
1,5
1,0
0,5
0,0
0 5 10 15 20 25
Tempo (h)

Na Figura 2, não foi necessário retirar nenhum ponto para obter a curva de
crescimento e conseguimos observar a fase exponencial a partir do ponto 4. E após o
ponto 9 identifica-se a fase de declínio.

Para obter o valor de máx é necessário a construção de um gráfico do

Neperiano (Ln) das concentrações de biomassa pelo tempo dos grupos G1 e G2, como
apresentado nas Figuras 3 e 4 respectivamente.
 9

Figura 3- Linearização da fase exponencial G1

1,5

0,5
Ln x (g/L)

0
0 5 10 15 20 25
-0,5

-1

-1,5
Tempo (h)

Figura 4- Linearização da fase exponencial G2

8
7
6
5
4
Ln x (g/L)

3
2
1
0
-1 0 5 10 15 20 25

-2
Tempo (h)

A Tabela 4 apresenta os resultados de ( á ) que foi obtido pela máxima

concentração de biomassas em g/L obtidos através da curva padrão, o valor de ( á )é
medida importante que determinou a quantidade máxima do composto que deve ser
 10

adicionado ao meio de cultura, assim sem prejudicar o crescimento e poder ajustar as

condições de cultivo caso fosse necessário, a velocidade específica máximas ( á ) de
crescimento foi obtida pela equação da curva de linearização pelo tempo a partir da fase
exponencial do crescimento, onde ocorreu a maior síntese de biomassa e a maior
das células e o tempo de geração foi obtido aplicando na Equação 6, a partir dos valores
máx encontrados, a partir desses dados foi feito o seguinte cálculo para ambos os

( )
TG = ,
= 2,1728 h

O tempo de geração é o tempo que levou para a população duplicar o seu número
de células no ambiente favorável que estavam. Assim conseguimos ver qual dos grupos
obteve o melhor tempo de geração.

Grupo á á Tempo de geração (h) Tempo (h)

G1 3,7401 0,319 2,1728 7-9
G2 4,7376 0,345 2,0091 8-9

Comparando os resultados do Xmáx do grupo YM G1 em relação ao YM

G2 podemos observar que o grupo G2 teve uma maior concentração de biomassa
pelo fato de que o YM modificado G2 teve uma quantidade maior de glicose na sua
composição, assim tendo uma maior fonte de carbono para ter um maior crescimento.
relação ás velocidades específicas á não obtivemos diferenças significativas de um
para outro, o tempo de geração do grupo YM G1 foi maior que o grupo YM modificado
acreditamos que as condições de cultivo do YM G1, otimizaram seu crecsimento.

A determinação da produtividade de biomassa foram obtidos para podermos

otimizar o proceso de produção e maximizar o rendimento de biomassa, assim aplicando
os resultados de concentração e tempo na Equação 7, representado no cálculo a seguir
para as respectivas concentrações e dessa forma plotamos os resultados para obter o
gráfico.
0,3459 − 0,2524
(x) = = 0,0467g/L. h
2

A Figura 5 apresenta o gráfico de produtividade de biomassa (Px) por tempo (t)

grupo G1 e a Figura 6 do grupo G2.
 11

Figura 5 - Produtividade de biomassa pelo tempo G1

0,5
0,45
0,4
0,35
Produtividade (g/L.h)

0,3
0,25
0,2
0,15
0,1
0,05
0
-0,05 0 5 10 15 20 25 30
Tempo (h)

Figura 6 – Produtividade de biomassa pelo tempo G2

0,07

0,06

0,05
Produtividade (g/L.h)

0,04

0,03

0,02

0,01

0
0 5 10 15 20 25 30
-0,01

-0,02 Tempo (h)

A partir dos gráficos de produtividade

produtiv e podemos observar a relação entre a
produtividade de biomassa
omassa e a concentração de nutrientes no meio de cultivo. A medida
concentração de nutrientes aumenta,
aum nta, a produtividade também aumenta até um
ponto, onde a biomassa se torna limitada, e em seguida a produtividade diminui.
desses gráficos podemos ver o desempenho do processo de cultivo de cada grupo ao
tempo e como diferentes parâmetros de cultiv
cultivo podem impactar na produtividade de
biomassa.
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6. CONCLUSÃO
O presente relátorio teve seu objetivo alcançado, baseado nos dados
apresentados que possibilitou analisar e construir, a curva de cinética de
crescimento celular para a levedura Saccharomyces cerevisiae ATCC 7754, além
de avaliar outros parâmetros cinéticos de crescimento. Conclui-se que o meio YM
modificado com concentração de glicose de 40 g/L teve uma maior concentração
máxima em relação ao YM com concentração de 20 g/L de glicose e um tempo de
geração menor que do YM, pelo fato de que as condições do meio nutritivo e os
parâmetros são de grande importância para um melhor crescimento do
microrganismo, com esses resultados temos a possibilidade de desenvolver
estratégias para uma melhora no crescimento da levedura.
 13

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICA

ALVES, J. G. L. F. Estudo da influência da temperatura na cinética de crescimento

anaeróbico de Saccharomyces cerevisiae. Dissertação (Mestrado em Engenharia de
Alimentos) - Universidade Estadual de Campinas, Campinas, 1996.

BORZANI, W.; LIMA, U. A.; AQUARONE, E.; SCHMIDELL, W. Biotecnologia

Industrial. São Paulo: E. Blücher, v. 3, 2001.

TORTORA, G. J.; FUNKE, B. R.; CASE, C. L.; Microbiologia. Ed. São Paulo:
Editora Artmed, 2012.

MAUTONE, J. N.; SILVA, P. V. Diversidade e Potencial Biotecnológico de

Leveduras e Fungos Semelhantes a Leveduras Isolados de Folhas de Figueiras do
Parque de Itaupã,RS, Brasil. Universidade Federal do Rio Grande do Sul. Rio
Grande do sul, 2008.
MADIGAN, M. T.; MARTNKO, J. M.; PARKER, J. Microbiologia de Brock. 12
ed. Editora: Artmed. São Paulo. 2010

STECKELBERG, C. Caracterização de leveduras de processos de fermentação

alcoólica utilizando atributos de composição celular e características cinéticas. Tese
(Doutorado em Engenharia Química). Campinas - São Paulo, 2001.