CAPA ESTBarreiro/IPS - Mod.

AL/004

DE SUBMISSÃO DE TRABALHO
Título do Trabalho

Pré tratamento do eucalipto

Número e nome(s) do(s) Aluno(s):
202000189 João Coelho
202000192 Joana Figueira
202000059 Álvaro Alves
201900072 Shelsea Amaral
Data de entrega:

Unidade Curricular:
Laboratórios de Petróleo IIIB
Curso: LPT31
Semestre: 1º Ano Letivo 2022/2023
Certifico/Certificamos que este trabalho foi por mim/nós
desenvolvido e que a utilização de materiais de outras
fontes foi adequada e completamente referida no texto.
Autorizo/autorizamos a divulgação do trabalho na Escola.
A informação nele existente será sempre utilizada com
referências aos seus autores.
Assinatura(s)

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Índice
Objetivo ...................................................................................................................................3
Introdução ...................................................................................................................................4
Reagentes e materiais .............................................................................................................5
Procedimento ..........................................................................................................................6
Bibliografia ..................................................................................................................................8

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Objetivo
O objetivo deste trabalho é determinar os açuçares redutores a partir do método DNS e
determinar a curva-padrão.

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Introdução
Eucalipto e açúcares redutores

Eucalipto (Figura1) é o nome comum dado a muitas espécies dos géneros Eucalyptus,
Corymbia e Angophora. A boa adaptação ao solo e clima nacional, a rapidez de
crescimento e as propriedades da madeira contribuíram para que uma se destacasse em
Portugal (Florestas.pt).
Para além do aroma das folhas e dos frutos em forma de botão, a madeira de eucalipto
começou por ser usada na construção de travessas para os caminhos-de-ferro e na
estrutura das minas, entre outros fins (Florestas.pt).
Desde meados do século XX que o eucalipto mais comum em Portugal, o Eucalyptus
globulus, tem sido plantado como fonte de madeira para produzir pasta para papel de
reconhecida qualidade. Desde então, a área de plantação de eucalipto cresceu e em
2015 representava 845 mil hectares em Portugal, cerca de um quarto da floresta nacional
(26%), de acordo com o 6.º Inventário Florestal Nacional (IFN6, 2019) (Florestas.pt).
Em Portugal em 2017, de toda a área florestal, 24,4% é composta por eucaliptos. Desta
forma existe uma disponibilidade considerável de resíduos florestais provenientes desta
árvore, daí a ênfase na utilização desta árvore como matéria-prima, na sua forma
residual, em processos de obtenção de açúcares. Açúcares redutores são açúcares que,
em solução básica, apresenta um grupo carbonílico livre aldeído e a Sua capacidade de
redução se dá pela presença de um grupo aldeído ou cetona livre. Todo monossacarídeo,
alguns dissacarídeos e oligossacarídeos (Infarma).

Método DNS
Neste trabalho vamos aplicar o método DNS. O método DNS é o teste de DNS (ácido
dinitrosalicílico) baseia-se na reação entre o açúcar redutor e o ácido 3,5-dinitrosalicílico
(cor amarelo), que é reduzido a um composto colorido avermelhado, o ácido 3-amino5-
nitrosalicílico, oxidando o monossacarídeo redutor (2022).

Figura 1- Eucalipto (Potencial Florestal)

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Reagentes e materiais

Materiais e Equipamento (Línea Biotecnología TecnoParque Colombia SENA, 2022):

• Espectrómetro e Célula
• Tubos de ensaio
• Pipetas de 5ml
• Micropipeta de 1000µl e de 100µl
• Banho Maria (“Beaker” grande e placa de aquecimento)
• Balança analítica
• Agitador
• Beaker resfriado

Reagentes (Línea Biotecnología TecnoParque Colombia SENA, 2022):

• Solução padrão de glucose 4(g/l)

• Água destilada
• Solução de DNS

Preparação da solução de DNS (Línea Biotecnología TecnoParque Colombia SENA, 2022):

1. Dissolver 1,6g de NaOH em água destilada

2. Adicionar 30g de tartarato de sódio e potássio
3. Adicionar 1 g de DNS
4. Completar 100ml com água destilada

Nota: A solução de DNS deve armazenar-se a 4ºC em frascos âmbar

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Procedimento

Fazem-se amostras da solução a qual se quer determinar a concentração de açúcares redutores.

As amostras são colocadas em tubos Eppendorf e centrifugam-se a 12000 rpm durante 15 min.
Adiciona-se em tubos Falcon 0,5ml do sobrenadante da amostra seguido por 0,5ml da solução
de DNS. Posteriormente deixa-se a reagir o DNS com a amostra em banho-maria durante 5 a 10
min (Línea Biotecnología TecnoParque Colombia SENA, 2022).

Para a medição da atividade enzimática de um extrato enzimática deve-se realizar os seguintes

passos antes da adição do DNS (Línea Biotecnología TecnoParque Colombia SENA, 2022):

1. Adicionar 0,5ml do extrato e 0,5ml do substrato requerido.

2. Deixar a reagir em encubação e agitação à temperatura e tempo determinado.
3. Finalmente adicionar 1ml de solução de DNS.

Nota: É necessário consultar os valores de temperatura e tempo para a enzima determinada

conforme a atividade.

Nota: A concentração do substrato, temperatura e tempo de reação dependem da atividade

enzimática do extrato.

Assim que se cumpra o tempo do banho-maria, procede-se à interrupção da reação com água
destilada com uma relação de 5:1. 5ml de água por cada mililitro de solução (amostra + DNS).

A presença de açúcares redutores pode se comprovar pela mudança de cor de amarelo para um
laranja ou vermelho-tijolo. A intensidade da cor está relacionada com a concentração dos
açúcares redutores na amostra.

Finalmente procede-se à medição da absorção no espectrómetro a uma longitude de onda de

540nm.

Para se determinar a concentração de açúcares redutores deve-se realizar uma curva de

calibração que relacione a concentração dos açúcares e a absorção, para isso junto com as
amostras deve-se ter 7 tubos Falcon aos quais se adiciona o que se segue na tabela:

TUBO Glucose (ml) Água (ml) DNS(ml)

(s/n padrão 4g/l)
1B 0.000 0.500 0.500
2S 0.025 0.475 0.500
3S 0.050 0.450 0.500
4S 0.075 0.425 0.500
5S 0.100 0.400 0.500
6S 0.125 0.375 0.500
7S 0.150 0.350 0.500

A curva de calibração permite relacionar a absorção medida e a concentração de açúcares.

Mediante uma regressão linear pode-se obter os dados para relacionar mediante a fórmula
y=mx+b onde m é o declive e b é o desvio. (É importante que o coeficiente de coeficiente de
relação R2 seja o mais próximo de 1).

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Ao realizarmos a curva de calibração obtemos o valor do declive e do desvio, e com a medição
obtém-se a absorção. Logo, com a fórmula pode-se obter a concentração de açúcares
desprezando-se o x.

Exemplo:

Supondo que se tem a curva com um valor de m=0,00048, um valor de b=0,0948 e uma absorção
da amostra de 0,098nm então substituindo os valores temos:
0,098 − 0,0948
= 𝑥 ⇔ 𝑥 = 6,67 𝑚𝑔/𝑚𝑙
0,00048

Mediante a relação pode-se determinar qua a amostra com a absorção de 0,098 tem uma
concentração de 6,67 mg de glucose por cada ml de solução.

Açúcares redutores totais (ART)

ART = %AR + 1,05 * %Pol

%AR = percentagem de açúcares redutores no caldo

%Pol = percentagem de sacarose no caldo

%AT = %sacarose no caldo + %açúcares redutores no caldo

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Bibliografia
2022. "Protocolo para determinação de açucares totais em hortaliças pelo método DNS". 05 de
Dezembro de 2022.

Florestas.pt. "Eucalipto: Um nome para centenas de espécies florestais". Eucalipto. [Online]

[Citação: 05 de Dezembro de 2022.] https://florestas.pt/conhecer/eucalipto-um-nome-para-
centenas-de-especies-florestais/.

Infarma. "AVALIAÇÃO DE MÉTODOS QUÍMICOS PARA DETERMINAÇÃO DE AÇÚCARES

REDUTORES E TOTAIS EM ALIMENTOS". Açucares Redutores. [Online] [Citação: 05 de Dezembro
de 2022.]
https://revistas.cff.org.br/?journal=infarma&page=article&op=view&path%5B%5D=981.

Línea Biotecnología TecnoParque Colombia SENA. 2022. "Método DNS". [Online] Dezembro05
de 2022. https://www.youtube.com/watch?v=ESNZjdBGoUc.

Potencial Florestal. "Eucalipto". [Online] https://potencialflorestal.com.br/caracteristicas-

eucalipto/.