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Uma análise comparativa deClitoria ternateaLinn. (Borboleta

Ervilha) Extrato de Flor como Indicador de pH Líquido Natural e
Papel pH Natural

Nur Faezah Syahirah, L., Muhammad Umar Lutfi, M.Y., Atika, A., Muhammad
Hafiz, R., Muhammad Zulhelmi, OA, Mohd Ariff Adzhan, O. e Khor PY.

2Faculdade de Farmácia e Farmácia Ciências da Saúde, UniKL Royal College of Medicine Perak, Malásia

(Recebido: 11 de fevereiro de 2018; Aceito: 25 de abril de 2018; Publicado (web): 10 de junho de 2018)

ABSTRATO:Clitoria ternateaLinn (CT) ou flor de ervilha borboleta é uma planta comestível de flor azul, comumente usada como

corante alimentar. O objetivo deste estudo foi desenvolver um indicador de pH líquido e em papel a partir de extratos de CT. A eficácia

do extrato CT como indicador de pH foi avaliada por titulação e resultado de teste do produto em relação ao indicador padrão. A

estabilidade dos extratos de CT também foi avaliada em 7 dias de armazenamento. Os resultados deste estudo mostram que o extrato
de CT é um indicador de pH líquido eficaz, exceto para amostras de ácido fraco. Considerando que o papel de pH feito de extrato de

CT é eficaz como papel de pH, exceto para testes na faixa de pH de 4 a 6. Conclui-se que os extratos de CT podem ser indicadores de

pH potencialmente eficazes.

Palavras-chave:Clitoria ternateaLinn., ervilha-borboleta, pH, indicador, titulação, teste de produto.

INTRODUÇÃO
O indicador de pH, também conhecido como afirmou conclusivamente que existe uma procura por uma
indicador ácido-base, é um ácido fraco ou base fraca que boa fonte de indicador natural e, portanto, vale a pena fazer
pode apresentar alterações de cor sob diferentes um estudo exploratório relevante.
condições ácidas e alcalinas.1Um indicador de pH
A partir da revisão da literatura, notou-se que mais
disponível comercialmente em forma líquida é
de 50 extratos de pigmentos originados de origem
comumente usado em titulação para sinalizar a conclusão
vegetal já haviam sido investigados por suas
de uma reação ácido-base. Este indicador pode incluir
propriedades de indicação de pH.2-6A escolha comum de
fenolftaleína, azul de bromotimol e laranja de metila. Um
solvente para a extração é etanol, metanol, água ou sua
indicador de pH também pode estar em formato de papel
combinação. A fenolftaleína é o indicador padrão mais
e ser usado para detectar alterações de pH além da
escolhido em comparação ao laranja de metila.
análise titulométrica. Este tipo de indicador de pH inclui o
O indicador natural extraído da fonte vegetal
papel tornassol e o papel universal de pH.
consiste em antocianina, um subgrupo dos
Comercializado indicadores são tipicamente
flavonóides. É um metabólito secundário que
compostos por produtos químicos sintéticos e produzidos
contribui para as cores azul, roxa ou vermelha dos
por meio de tratamento/processo químico que podem
frutos, folhas ou flores.7A antocianina pode reagir ou
ser potencialmente perigosos e têm tendência a poluir o
interagir com ácidos ou bases, resultando em
meio ambiente. Além disso, eles não estão facilmente
alterações a nível molecular e, consequentemente, na
disponíveis e também são caros. Assim, pode ser
exibição de alterações de cor (Figura 1 e 2).

Correspondência para: Khor P.Y. Para este estudo utilizamos uma pétala de flor
E-mail: pykhor@unikl.edu.my comestível comum localClitoria ternatea(CT) ou flor de
ervilha borboleta como fonte natural de indicador.3,8-10
Universidade de Daca. J. Farmacêutica. Ciência.17(1): 97-103, 2018 (junho)
CT é uma planta com flores azuis, capaz
98
para produzir uma cor azul intensa, que é comumente
usada como corante alimentar. Através deste estudo,
relatamos a eficácia do extrato de flores CT em
comparação: indicador de pH líquido versus papel; e
diferentes combinações e estabilidade de força ácido-
base.
METODOLOGIA
Pétala de florClitoria ternateaLinn.Uma flor
CT totalmente desabrochada foi adquirida no
mercado local. As partes florais do CT foram secas
à sombra. A parte verde da sépala foi cortada e
retirada.
Extração de pigmentos coloridos.A extração foi
realizada com método ligeiramente modificado de Nyi
Mekar Saptarinie outros.(2015).3A mistura de flor seca
e água (1:20) foi aquecida a 35ºC com prensagem para
obtenção do máximo rendimento.10Depois que a
solução extraída foi filtrada, os testes nas seções A, B
e C foram feitos de acordo.
A: Desenvolvimento de indicador de pH líquido
natural da CT.Uma série de soluções de pH 1-14 foi
preparada a partir de HCl 0,1N e NaOH 0,1N. Medidor de pH
digital e tiras de pH universais foram utilizados para verificar
os valores de pH. Duas a três gotas de extrato de CT foram
colocadas em cada solução de pH para observar a mudança
de cor. A mudança de cor foi registrada para desenvolver
uma escala de cores do indicador líquido para referência
como ponto final na análise de titulação. Quatro conjuntos de
combinações de titulação ácido-base foram realizados:
1. Ácido forte/base forte (SA/SB);
2. Ácido forte/base fraca (SA/WB);
3. Base forte/ácido fraco (SB/WA); e
4. Ácido fraco/base fraca (WA/WB).
A fenolfateína, um indicador líquido, foi utilizada como
padrão para a análise titulométrica. O teste T foi realizado
para comparar a indicação de pH do líquido e do papel de pH.
B: Desenvolvimento de papel de pH natural da CT.Um
papel de filtro qualitativo foi imerso no extrato de CT por 3 a
5 minutos para garantir que o pH do papel estivesse
totalmente saturado com o extrato de CT que foi seco à
temperatura ambiente. O papel de filtro colorido foi então
cortado em tiras como tiras CT pH. Uma escala de cores foi
desenvolvida mergulhando as tiras de pH CT
Syahirah et al.
preparado em uma série de soluções de pH 1 -14
(desenvolvido na Seção A). As mudanças de cor foram
observadas e registradas como a escala de pH.A
eficácia das tiras de pH foi examinada em várias
amostras de produtos. As alterações de cor
observadas nas tiras de pH CT foram comparadas com
a escala de cores e o papel de pH universal para
confirmar o pH do produto testado.
C: Espectroscopia UV-Vis e análise cromatográfica em
camada delgada.Extratos aquosos de CT (aproximadamente
0,4 mg/ml) foram escaneados8através de comprimentos de
onda de 200-700 nm usando espectrofotômetro UV-Vis
(Perkin Elmer, Lamda 35). Os dados UV-Vis foram registrados.
A escala de cores do indicador líquido desenvolvida na seção
A foi localizada na sílica gel GF254placa (Merck). A TLC foi
desenvolvida no sistema solvente n-butanol:ácido acético
glacial:água (BAW) conforme recomendado para extrato de
antocianina.3Os padrões dos cromatogramas foram
observados.
Teste de estabilidade.Testes de estabilidade
foram realizados para a extração do CT no dia 1 e no
dia 7. As alterações físicas foram observadas,
registradas e comparadas. A titulação foi realizada
entre as combinações ácido forte/base forte e ácido
fraco/base fraca.
RESULTADOS E DISCUSSÃO
No presente estudo, o pigmento azul foi extraído
da flor CT com auxílio de água destilada, pois a água é
o melhor meio para uma ação titulométrica ácido-
base. A antocianina, que é composta por grupos
hidroxila e metoxila, é altamente solúvel em água,
portanto, proporciona um alto rendimento promissor;
o extrato aquoso do CT possui grande estabilidade
térmica e, portanto, tem capacidade de suportar altas
temperaturas.8
O teor de antocianinas no pigmento azul foi
confirmado com dados qualitativos de espectroscopia UV-
Vis e cromatografia em camada delgada. O extrato CT
apresentou múltiplos picos de absorção na região visível,
527 nm - 613 nm (Tabela 1a) e região UV, 223-250 nm
(Tabela 1b). Na região do visível foi observada banda de
absorção correspondente à cor complementar do azul
violeta. Considerando que múltiplos
Uma análise comparativa de ClitoriaTernateaLinn 99

o pico na região UV foi atribuído às múltiplas transições
do estado fundamental para o estado excitado da
molécula devido à amostra impura.11Além disso, a faixa
de absorção de 223-250 nm também indica elétrons de
transição de par solitário e elétrons pi para
anti-ligação sigma e ligação pi.11Isto é consistente com
o grupo dominante do grupo hidroxila, metoxi e
benzeno conjugado nas estruturas de antocianina
(Figura 1).

R1 Cianidina Malvidina
R1: OH R1: OCH3
OH R2:H R2: OCH3

HO Ó
Pelargonidina Peonidina
R2 R1:H R1: OCH3
R2:H R2:H

OH Delfinidina Petunidina
R1: OH R1: OCH3
OH
R2: OH R2: OH

Figura 1. Estrutura das antocianinas e seus derivados.

Tabela 1a. Comprimento de onda (-) em nm e absorbância para extrato aquoso CT por espectroscopia UV-visível (faixa visível).

-- 527,0 530,0 547,0 557,0 564,0 597,0 609,0 613,0

Abdômen 0,645 0,000 0,729 0,446 0,541 0,895 0,406 0,532

Tabela 1b. Comprimento de onda (-) em nm e absorbância para extrato aquoso CT por espectroscopia UV-visível (faixa UV).

-- 223,50 227,0 231,0 233,98 238,92 242,99

Abdômen 10.680 10.000 10h00 10.080 10.100 10.000

O cromatograma TLC para os extratos CT em
diferentes condições de pH são mostrados na tabela 2.
Dois pontos com Rf. 0,47 e Rf. 0,59 foram observados
para todas as condições de pH. Em comparação com o
cromatograma de TLC para o extrato de CT (Tabela 2),
foram observadas três manchas, com Rf. 0,36, 0,47 e 0,59
respectivamente. Este resultado indica que as mudanças
de cor no solvente pH 1-14 são contribuídas pelo mesmo
constituinte químico do extrato de CT. O padrão de
eluição foi o mesmo do estudo anterior.3O Rfo valor está
a concentração de antocianina era muito baixa para que o
composto separado fosse observado ou anotado.
O solvente BAW recomendado para eluição está
na proporção de 5:1:4.12 Neste estudo, a eluição
seguindo esta proporção foi relativamente lenta,
portanto, a modificação para a proporção de 5:4:1
proporciona uma melhor eluição. O Rfobtido neste estudo
foi de 0,47 e 0,59, respectivamente, o que indicou que
aquele extrato de antocianina era de derivado de açúcar
A polar.
ou monoglicosídeo menos polar ou menos confirmação
12

intimamente relacionado ao número de açúcares ligados
à antocianina.12O açúcar é um composto polar e tende a
reter-se na placa TLC de tal forma que quanto maior o
número, menor o Rf. O Rfde 0,36 não foi observado em
TLC de pH 1 - 14; isso pode ser devido ao fato de que
da estrutura pode necessitar de maior isolamento e
caracterização.
No desenvolvimento da escala de pH do indicador líquido, o
extrato CT apresenta cores diferentes sob diferentes condições de
pH (Fig. 3). A cor varia do vermelho em solução ácida ao púrpura,
ao azul e ao verde em solução levemente ácida.
100 Syahirah et al.

solução alcalina para amarelo em uma solução muito alcalina. titulação. A fenolftaleína sofre uma alteração estrutural
Essas mudanças na gama de cores são semelhantes ao roxo do o rearranjo à medida que um próton é removido de um de seus

repolho roxo, ao azul das flores do milho e ao vermelho das grupos fenol à medida que o pH aumenta (Figura 4). O extrato de

papoulas; essas mudanças são características do pigmento CT foi capaz de mostrar múltiplas alterações de cor devido a mais

antocianina.2Ao contrário de alguns indicadores comercializados, de um grupo de doação ou aceitação de prótons (Figura 2).
como a fenolftaleína, apenas dois tipos de alterações de cor são

observados (incolor ou rosa) em ácido base

Figura 2. Mudanças estruturais das antocianinas em diferentes condições de pH.

pH 1 pH 2 pH 3 pH 4 pH 5 pH 6 pH 7 pH 8 pH 9 pH 10 pH 11 pH 12 pH 13 pH 14

Figura 3. Cor do extrato CT em diferentes condições de pH.

Uma análise comparativa de ClitoriaTernateaLinn 101

Tabela 2. Valor Rf para diferentes condições de pH.

Descrição Primeiro lugar Primeiro lugar (Rf) Segundo lugar (Rf)

Extrato de 3 gotas em solução de pH 1 - 14 - 0,47 0,59

Somente extrato de flor 0,36 0,47 0,59

Tabela 3. Comparação do ponto final na titulação com indicador CT e fenolftaleína.

Descrição Extrato de TC Fenolftaleína Teste T Mudança de cor em

(valor p) extrair

Base forte vs ácido forte 6,27±0,06 6,20±0,17 0,56 Vermelho para azul

(NaOH, 0,1 M vs HCl 0,1 M)

Ácido fraco vs base fraca (CH3 1,90±0,17 2,00±0,17 0,52 Verde pálido a azul
COOH, 1M versus NH4Ó, 1M)

Ácido forte vs base fraca 4,13±0,12 4,47±0,06 0,01* Vermelho para azul

(HCl, 0,5M vs NH4Ah, 1M)

Ácido fraco vs base forte (CH3 2,47±0,06 2,83±0,35 0,15 Verde para azul
COOH, 2 M vs NaOH 0,5 M)
P<0,05

Tabela 4. Papel de pH do extrato CT em testes de produto.

produtos Papel pH universal

Mudança de cor Papel de pH de extrato CT
(Padrão)
Detergente para sopa, pasta de dente,
Azul permaneceu 7
limpador facial, sabonete líquido, loção 7
Vinagre Azul para vermelho 2 2
Bicarbonato de sódio Azul para verde 10 10
Creme para acne Azul para roxo 4 3

Tabela 5. Resultado do teste de estabilidade física e química.

Extrair Dia 1 Dia 7

Cor Azul Azul
Odor Odor de ervas Mudança para odor desagradável

Textura Aguado viscoso

Tabela 6. Comparação do resultado da titulação do teste de estabilidade no dia 1 e no dia 7.

Descrição Extrato de TC Fenolftaleína Teste T Mudança de cor em

(valor p) extrair

Base forte vs ácido forte 5,20±0,20 6,20±0,17 0,041 Vermelho para azul

(NaOH, 0,1 M vs HCl 0,1 M)

Ácido fraco versus base fraca (CH3 2,35±0,07 2,00±0,17 0,015 Verde pálido a azul
COOH, 1M versus NH4Ó, 1M)

*p<0,05
 As mudanças de cor se devem principalmente
à doação e aceitação de um próton do grupo
hidroxila e metoxila na estrutura da antocianina.7
No extrato azul CT (como um ácido fraco), doa um
próton para OH-íons na água, formando ânion sob
Figura 4. Rearranjo estrutural da fenolftaleína sob alterações de pH.
A partir do resultado da titulação observado
utilizando a fenolftaleína como indicador padrão, todas as
combinações de titulação não apresentaram diferença
significativa (p < 0,05) entre o ponto final determinado
pelo indicador líquido CT e pela fenolftaleína (Tabela 3). O
extrato CT apresentou mudanças bruscas de cor para azul
ao atingir o ponto final da titulação e isso é fácil de
observar. Porém, na titulação com ácido forte e base
fraca, há diferença significativa entre ambos os
indicadores (p > 0,05) (Tabela 3). Com um ligeiro excesso
de titulante, a solução tornou-se vermelha e atingiu o
ponto final do broto. Isso ocorre porque o ácido forte,
que se dissocia completamente mesmo em baixa
concentração, tem maior capacidade de reagir com a
base fraca. Este problema pode ser superado reduzindo
ainda mais a molaridade do titulante utilizado.
Verificou-se que existe uma limitação no indicador
líquido CT quando o titulante é um ácido fraco. Isso
ocorre porque o extrato de CT aparece como uma cor
arroxeada em uma condição ácida fraca, que está muito
próxima da cor azul como ponto final; portanto, é difícil
observar a mudança de cor ao realizar a titulação. Isto,
portanto, leva a erros de titulação. Então, este estudo
a solução alcalina, formando a forma base, Bb, que é
esverdeada. Conseqüentemente, o ponto em que a cor
muda do azul intermediário para o esverdeado fornece
muitas informações sobre como atingir o ponto
equivalente em uma reação de neutralização.
sugere que o extrato de CT é um potencial indicador ácido-
base apenas para uma amostra alcalina ou amostra de ácido
forte.
O papel de pH feito a partir da flor CT deu uma
mudança instantânea de cor quando mergulhado em
diferentes amostras de produto (Tabela 4). No entanto, a
mudança de cor não foi tão óbvia nas faixas de pH 4 – 6, e
a cor violeta para azul também não foi fácil de diferenciar.
Quanto ao teste do produto, é provável que seja
inconveniente porque quando um produto semissólido
opaco é testado, o papel de pH tende a ficar coberto com
os sedimentos do próprio produto, portanto as mudanças
de cor não podem ser observadas claramente. No
entanto, esta limitação também é observável em outros
papéis de pH disponíveis comercialmente. Assim,
diferentes materiais de pH de papel poderiam ser
explorados para superar esta limitação. Acreditamos que
a ineficiência do papel CT pH pode ser melhorada
melhorando a qualidade do papel, já que o extrato CT na
forma líquida pode produzir um resultado promissor.
A partir do resultado do teste de estabilidade, notou-se
que durante os 7 dias de armazenamento em geladeira a cor
permaneceu inalterada (Tabela 5). No entanto, o odor e a
textura do extrato caíram em qualidade. Em
Uma análise comparativa de ClitoriaTernateaLinn
Em termos do teste de titulação, não há diferença
significativa entre a titulação ácido forte/base forte
e ácido fraco/base fraca (Tabela 6). A única
diferença que pode ser observada é que as
mudanças de cor não são tão acentuadas como no
dia 1. Isso se deve à degradação ou oxidação
durante o armazenamento, causando as alterações
na estrutura molecular da antocianina.+.
CONCLUSÃO
Com base neste estudo de pesquisa, pode-se concluir
com segurança que o extrato de CT pode ser potencialmente
um bom indicador de pH, pois causa claramente uma
mudança gradual na cor em uma ampla faixa de pH. Na
verdade, o pH de uma solução pode ser identificado
aproximadamente quando algumas gotas do extrato CT são
adicionadas à solução.
A condição física do extrato CT realmente mostrou
alteração de luz no dia 7. No entanto, isso não afetou a
indicação da titulação do ponto final. O extrato CT é um
indicador de pH líquido eficaz, pois é capaz de mostrar
mudanças de cor rápidas, precisas e nítidas ao atingir o
ponto final da titulação. Além disso, este indicador de pH
líquido foi considerado bom quando a amostra de análise
não era de nenhum ácido fraco.
Com base nesses achados, recomendamos que para
desenvolver um papel de pH extrato CT, o papel de filtro
qualitativo seja trocado por outros tipos de papel que
tenham melhor capacidade de absorção. Em estudos
futuros, além de pesquisar outros artigos para fazer o
indicador de pH do papel, o CT pode ser expandido como
indicador em outros tipos de titulação, como a titulação
não aquosa, que é comumente usada em ensaios de
produtos farmacêuticos; no entanto, estudos muito
limitados foram conduzidos.
Reconhecimentos
Estamos muito gratos ao assistente de laboratório da
Faculdade de Farmácia e Ciências da Saúde pela excelente
assistência que tornou esta investigação um grande sucesso.
Um sincero agradecimento também é devido ao falecido Prof.
Mohd Syafiq bin Abdullah, que ainda
103
permanece como fonte de força e inspiração para este
pesquisador.
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