Cromatografia em papel

OBJETIVOS

 Aprender sobre as técnicas cromatográficas.

 Entender o processo de separação da cromatografia em
papel.
 Calcular e interpretar os resultados dos valores de Rf de
cada substância analisada no cromatograma.
MATERIAIS

 Papel de filtro
 Ninhidrina a 0,3% em solução alcoólica
 Câmera cromatográfica (ou béquer 250 mL + vidro de relógio )
 Capilares de vidro
 Solução Butanol: H2O (4:1)
 Estufa ajustada (60-65 ºC)
 Tesouras
 Aminoácidos padrões
 MÉTODO
 Em primeiro lugar deve-se preparar o papel de filtro que será posto
na câmara cromatográfica (béquer de 250 mL);
 Os padrões de aminoácidos 0,01M devem estar disponíveis;
 A montagem do cromatograma deve ser feita traçando uma linha
na borda inferior do papel de filtro, onde nesta mesma linha, as
soluções a serem analisadas serão distribuídas usando-se capilares
de vidro;
 Depois o papel de filtro “seco” deve ser posto na câmara ( já com o
solvente Solução Butanol: H2O (4:1)) tomando sempre o cuidado
de não contaminar o cromatograma com os dedos;
 Deixando-se o cromatograma “correr” até que o solvente atinja uma
certa altura abaixo do bordo superior do papel, retira-se o papel,
deixa secar e depois pulverizar ninhidrina a 0,3% em solução
alcoólica ;
 Por fim, leva-se o cromatograma para a estufa à temperatura de 60-
65 ºC até que venha a surgir manhas coloridas;
RESULTADOS E DISCUSSÃO

 Observa-se na Figura 01 a aplicação dos indicadores, em seqüência da esquerda para a

direita: solução problema (Ajinomoto), leucina, ácido glutâmico e triptofano.
 Após o papel permanecer no recipiente por tempo suficiente, quando o solvente não
apresentou mais ascensão, o papel foi removido para proceder com as medidas requeridas
para o cálculo do Fator de retenção.
 As distâncias de retenção foram medidas entre a linha traçada na parte inferior do papel
(linha de base), onde foram depositadas as gotas da fase estacionária até centro da mancha
que foi a distância percorrida pelo soluto, conforme Figura 01 e estão descritas na Tabela
1.
RESULTADOS E DISCUSSÃO

 A leucina é um aminoácido essencial, polar

RESULTADOS E DISCUSSÃO

FIGURA 1:  Papel absorvente com a fase estacionária.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

 A cromatografia permite a separação dos aminoácidos através do cálculo da distância de

locomoção devido à reação de polaridade entre os aminoácidos e o solvente.
 Os aminoácidos quando foram reagidos com a ninhidrina apresentaram coloração lilás. O
aminoácido leucina apresentou uma coloração mais clara, pois foi colocada uma
quantidade pequena do mesmo, como mostra na Figura 1.
RESULTADOS E DISCUSSÃO

Componente Distância de retenção (cm)

Ajinomoto (solução problema) 2.60
Leucina 1.90
Acido glutâmico 2.50
Triptofano 1.95
Tabela 1: Distâncias de Retenção dos Indicadores.
RESULTADOS E DISCUSSÃO

 O cálculo do Rf foi realizado medindo-se a distância que a substância se deslocou a partir

do ponto em que foi aplicada (aL), a partir do centro da mancha e divide-se pela distância
percorrida pelo solvente a partir do ponto da amostra (ds).

Rf

 Os valores dos fatores de retenção estão descritos na Tabela 2.

RESULTADOS E DISCUSSÃO

Compontente Fator de Retenção (Rf)

Ajinomoto Rf=0,981
Leucina Rf=0,717
Ácido Glutâmico Rf=0,943
Triptofano Rf=0,736
Tabela 2: Valores do Fator de Retenção para os diferentes agentes indicadores.
RESULTADOS E DISCUSSÃO

 Os aminoácidos quando foram reagidos com a ninhidrina apresentaram coloração lilás. O

aminoácido leucina apresentou uma coloração mais clara, pois foi colocada uma
quantidade pequena do mesmo, como mostra na Figura 1.
 O aminoácido que apresentou maior Rf foi o do Ajinomoto (solução problema), pois tem a
cadeia mais apolar de todas.
 O aminoácido que apresentou menor Rf foi o da leucina, pois a sua polaridade evitou que
ela subisse tanto durante a cromatografia.
RESULTADOS E DISCUSSÃO

 A partir da análise do cromatograma torna-se possível discutir a causa de tal distribuição

das cores. Foi utilizada uma mistura de um solvente apolar (Butanol) e polar (H 2O) na
proporção de 4:1, porém como o butanol se apresenta em uma maior proporção na mistura,
o solvente mostrará característica apolar. Essa mistura arrastará consigo as substâncias que
tiverem polaridade semelhante à sua, fato que ocorre com a leucina e com o triptofano,
sendo eles apolares.
 CONCLUSÃO

 Logo, para os objetivos fornecidos, foram obtidos os resultados esperados, onde mostrou-
se a forte dependência da polaridade entre os aminoácidos e o solvente em relação as
técnicas cromatográficas, e assim foi possível entender o processo de separação da
cromatografia em papel;
 Com o auxilio do cromatograma, foi possível determinar os valores de fator de retenção
(Rf) para cada aminoácido, onde o maior e menor valor de Rf foi novamente baseada em
relação à característica da polaridade de cada aminoácido.