EXTRAO, CARACTERIZAO E HIDRLISE

DO AMIDO PRESENTE EM TUBRCULOS NAS

AULAS PRTICAS DE BIOQUMICA
Carina Carneiro de Melo Moura
1
, Priscila Alexsandra de Aguiar Freitas
2
, Helena Simes Duarte
3
e Janana de
Albuquerque Couto
4

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1. Aluna do Curso de Bacharelado em Cincias Biolgicas e Monitora de Bioqumica do Departamento de Morfologia e Fisiologia Animal,
Universidade Federal Rural de Pernambuco, Rua Dom Manoel de Medeiros, s/n, Dois Irmos, CEP 52171-900, Recife/PE , E-mail:
carinacarneiro@yahoo.com.br
2. Aluna do Curso de Licenciatura em Cincias Biolgicas e Monitora de Bioqumica do Departamento de Morfologia e Fisiologia Animal,
Universidade Federal Rural de Pernambuco, Rua Dom Manoel de Medeiros, s/n, Dois Irmos, CEP 52171-900, Recife/PE
3. Professora Titular do Departamento de Morfologia e Fisiologia Animal, rea de Bioqumica e Biofsica, Universidade Federal Rural de
Pernambuco, Rua Dom Manoel de Medeiros, s/n,Dois Irmos,CEP 52171-900, Recife,PE
4. Professor Assistente do Departamento de Morfologia e Fisiologia Animal, rea de Bioqumica e Biofsica, Universidade Federal Rural de
Pernambuco, Rua Dom Manoel de Medeiros, s/n-Dois Irmos- CEP: 52171-900- Recife/PE
Introduo
Principal tipo de reserva vegetal, e alm de ser
considerado importante carboidrato da dieta humana, o
amido composto de amilose e amilopectina, sendo
encontrado na forma de grnulos nos cloroplastos das
folhas, em gros, tubrculos e nas frutas [1,2]. Sua
sntese est localizada em estruturas vegetais
denominadas plastdeos, e resulta de reaes de
polimerizao da glicose atravs da fotossntese [3].
Entre as peculiaridades deste polissacardeo, est
diferena entre as molculas que o compe, a amilose
alm de apresentar estrutura linear, mais
hidrossolvel que a amilopectina, a qual apresenta
altamente ramificada. Deste modo torna-se possvel a
separao destes componentes aps aquecimento [1].
O amido pode ser caracterizado por alguns testes que
indiquem a presena de carboidratos, entre eles a
reao de Molisch e reao com iodo, que
respectivamente identifica a presena de carboidrato, e
a presena de amido [4]. A hidrlise enzimtica do
amido ocorre naturalmente no incio da digesto,
durante a mastigao, onde liberada a enzima alfa-
amilase salivar que atua catalisando a hidrlise de
algumas ligaes do amido na boca, resultando em
molculas menores, comumente conhecidas por
oligossacardeos [2]. Para a identificao destas
molculas resultantes da hidrlise enzimtica do amido,
utiliza-se o iodo, que ao entrar em contato com a
amilose e a amilopectina, caracterizado pela
formao de complexos, evidenciado respectivamente
pelas coloraes azul-escura e vermelho-violcea [1].
O acompanhamento da hidrlise tambm pode ser feito
pelo teste de Benedict, o qual baseia-se na identificao
de substncias redutoras [4].
Comumente, as prticas de bioqumica demandam de
reagentes e equipamentos de alto custo, dificultando
sua realizao nas Instituies de Ensino. Tendo em
vista a realizao de uma aula prtica acessvel e de
baixo custo, o presente trabalho tem como objetivo a
realizao da extrao e caracterizao do amido e sua
posterior hidrlise enzimtica, a partir de tubrculos.
Material e mtodos
A. Local da Aula
Os experimentos foram realizados no Laboratrio de
Bioqumica e Biofsica, pertencente ao Departamento de
Morfologia e Fisiologia Animal da Universidade Federal
Rural de Pernambuco.
B. Tubrculos utilizados
Foram utilizados como fonte de amido trs espcies de
tubrculos: Solanum tuberosum (batata inglesa), Ipomoea
batatas (batata doce) e Colocasia esculenta (inhame).
C. Planejamento da aula prtica
No incio da aula foi entregue a cada aluno um protocolo
contendo todos os procedimentos a serem seguidos, bem
como uma breve explanao terica a respeito do
experimento a ser realizado. A realizao dos experimentos
pelos alunos foi acompanhada durante toda a aula, a qual
foi finalizada com as discusses a respeito dos resultados
observados.
D. Extrao do amido
A extrao do amido de tubrculos foi iniciada pelo
fracionamento dos tubrculos, seguida da adio de 50 mL
de gua destilada, e posterior agitao durante 5 minutos.
Aps a agitao, cada mistura foi filtrada, e a cada filtrado,
foi adicionado mais 50 mL de gua destilada fervente, em
constante agitao com auxlio de basto de vidro, at que
houvesse a formao de uma soluo opalescente, sendo
ento obtido o extrato de amido de cada tubrculo.
E. Caracterizao dos extratos
Aps a extrao, foi iniciado o processo de
caracterizao das amostras preparadas. Em trs tubos de
ensaio previamente identificados em A, B e C, foram
colocados respectivamente 1,0 mL do extrato de batata
inglesa, 1,0 mL do de batata doce e 1,0 mL de inhame. Em
seguida, foi realizada uma caracterizao de carboidratos
atravs do teste de Molisch, que consistiu na adio de 3
gotas de alfa-naftol e 2,0 mL de cido sulfrico.em cada
tubo. A caracterizao do amido foi feita pelo teste do
iodo, onde coletamos 2,0 mL de cada extrato, e
adicionamos de 3 gotas de lugol ( soluo de iodo com
iodeto de potssio) em cada amostra.
F. Hidrlise enzimtica
Para hidrlise enzimtica das solues de amido
utilizou-se como enzima a amilase salivar diluda em
tampo fostato (pH 7,0). Para o preparo da soluo de
amilase salivar, diluda 10%, utilizou-se 0,1 mL de
saliva em 4,9 mL do tampo fosfato, sendo ento
adicionado a trs tubos de ensaio identificados 2,0 mL
de cada soluo de amido, 1,0 mL da soluo de
amilase salivar, seguida de aquecimento em Banho
Maria por 15 minutos. A hidrlise enzimtica foi
acompanhada por reaes especficas, por meio do
teste do Iodo e de Benedict. No primeiro, observamos
as alteraes na colorao num intervalo de tempo que
variou de 15 a 45 minutos. No segundo, a presena de
carboidratos redutores foi indicada pela modificao na
cor do reativo de Benedict.
Resultados e Discusses
Nas trs amostras de extratos preparados a partir dos
tubrculos estudados, observamos a formao do anel
de colorao violeta na zona de separao dos dois
lquidos (figura 1-A), por meio do teste de Molisch,
caracterizando a possvel presena de carboidratos na
soluo. Esta reao ocasionada pela formao de
furfural ou derivado, resultante da desidratao da
molcula de amido pelo cido sulfrico e posterior
formao de um complexo de furfural com o alfa-naftol
[5].
A caracterizao do amido na soluo a partir do
teste do iodo evidenciou a presena deste
polissacardeo, visto que em todas as solues houve a
formao de um complexo de colorao azul escuro.
Esta colorao resultado da interao do iodo com o
amido [5]. (Figura 1- B, C e D)
A hidrlise enzimtica do amido foi acompanhada pelo
teste de iodo, no qual observamos que cada colorao
apresentada nos tubos de ensaio fazia referncia a uma
etapa da hidrlise, variando desde a observao da
amilodextrina (colorao roxa) at a identificao da
acrodextrina (colorao amarelada), mais evidente quando
no extrato de Colocasia esculenta (Figura 1-B). Com a
realizao do teste de Benedict, observamos a presena de
acar redutor nos trs extratos a partir da mudana na
colorao, a qual passou de azul para vermelho-tijolo,
devido hidrlise promovida pela amilase salivar (Figura
1- B, C e D) [5].
A partir desta aula prtica, foi possvel trabalhar
contedos abordados nas aulas tericas sobre os
carboidratos, o que torna o assunto mais atrativo, como
tambm proporciona ao aluno a oportunidade de formular
hipteses e interpretar os resultados obtidos. A vantagem
desta prtica pode ser atribuda baixa complexidade
metodolgica, a qual no requer habilidades especficas,
associada a um baixo custo nos seus materiais.
Agradecimentos
Os autores agradecem a Universidade Federal Rural de
Pernambuco, em especial ao Departamento de Morfologia
e Fisiologia Animal.
Referncias
[1] PETKOWICS, C.L.O. 2007. Bioqumica: Aulas Prticas/
Universidade Federal do Paran. 7 ed. Curitiba: Editora UFPR,
188 p.
[2] CHAMPE, A.L.; HARVEY, R. A.; COX, M.M. 2006. Bioqumica
Ilustrada. 3Ed. Porto Alegre: Editora Artmed, 533 p.
[3] VOET, D.; VOET, J. G. 2006. Bioqumica. 3 ed. Rio de janeiro:
Editora Guanabara Koogan, 716 p.
[4] SILVA, L.M.A.; 1988. Bioqumica: aulas prticas, 2.ed. Curitiba:
Editora Scientia et Labor, 116 p.
[5] REMIO, J.O.R; SIQUEIRA, A.J.S; AZEVEDO, A.M.P. 2003.
Bioqumica; guia de aula prticas. Porto Alegre: Editora
EDIPUCRS.
Figura 1. (A) Teste de Molisch: tubo 1, extrato de Ipomoea batatas (batata doce); tubo 2, extrato de Colocasia esculenta (inhame);
tubo 3, extrato de Solanum tuberosum (batata inglesa). (B) Teste de Iodo usando extrato de Colocasia esculenta (inhame): tubo 1,
colorao caracterstica do teste de iodo; tubos 2, 3 e 4, hidrlise enzimtica com variao de tempo em Banho Maria,
respectivamente 15, 30 e 45 minutos; tubo 4, colorao amarelada caracterstica da acrodextrina; tubo 5, teste de Benedict. (C) Teste
de Iodo usando extrato de Ipomoea batatas (batata doce): tubo 1, colorao caracterstica do teste de iodo; tubo 2 e 3, hidrlise
enzimtica com variao de temperatura de 15 a 45 minutos; tubo 4, teste de Benedict. (D) Teste de Iodo usando extrato de Solanum
tuberosum (batata inglesa): tubo 1, colorao caracterstica do teste de iodo; tubos 2, 3 e 4, hidrlise enzimtica com variao de
tempo em Banho Maria, respectivamente 15, 30 e 45 minutos; tubo 5, teste de Benedict.