Universidade de Évora

Escola de Ciências e Tecnologia

Biotecnologia
Princípios e Métodos de Bioquímica
Prática Laboratorial nº 6 e 7:

Separação de lípidos por cromatografia

em camada fina
e
Separação dos componentes de uma
mistura por filtração em gel
26 Abril 2022
3ªf 14h-17h
Docente: Nicasio Jiménez-Morillo

Rodrigo Mealha nº52174 ___________________

José Ferreira nº52665 ______________________
Miguel Pires nº 51468______________________
Tiago Pereira nº52598______________________
 Objetivos
1. Separar diferentes classes de lípidos de extrato lipídico de fígado, por cromatografia
em camada fina. (6)
2. Determinar os coeficientes de retenção (Rf) de cada composto. (6)
3. Separação cromatográfica de uma mistura de compostos de acordo com as suas
massas molares. (7)
4. Determinação dos respetivos coeficientes de distribuição (Kav). (7)
Procedimento experimental
 Resultados obtidos
Tubos de ensaio Absorvância

Tabela 1- Valores de absorvância obtidos na cromatografia em gel, em função dos

respetivos tubos de ensaio
 1 -1,222
2 -1,205
3 -1,210
4 -1,217
5 -1.214
6 -1.217
7 -1.216
8 -1.221
9 -1.219
10 -1.215
11 -1.219
12 -1.218
13 -1.225
14 -1.168
15 -0.927
16 -0.706
17 -0.627
18 -0.643
19 -0.758
20 -0.885
21 -0.948
22 -0.970
23 -0.993
24 -1.005
25 -1.024
26 -1.058
27 -1.050
28 -1.001
29 -0.986
30 -0.984
31 -0.990
32 -0.932
33 -0.743
Oleato de colesterol

Ácido
 Trioleína

Colestero

Imagem 1- Resultado da cromatografia em camada fina dos diversos

padrões de lípidos juntamente com o analíto

Análise e discussão de resultados

Cromatografia em camada fina

A cromatografia é uma técnica qualitativa, tem por finalidade geral duas
utilizações, a de identificação de substâncias e de separação-purificação de
misturas. Usando propriedades como solubilidade, tamanho e massa. Em todos
os tipos de cromatografia distingue-se uma "fase estacionária" e uma "fase
móvel". A primeira é onde se dá a separação dos diversos compostos e a
segunda é a substância (geralmente líquida) com a qual se faz correr a mistura.
 A cromatografia em camada fina é um método simples, rápido e barato
usado com o objetivo de obter uma resposta rápida quanto à composição
química de uma dada mistura.
As placas de TLC são folhas de vidro, metal ou plástico, cobertas com uma
fina camada de um adsorvente sólido, normalmente sílica ou óxido de alumínio
(fase estacionária). Uma pequena quantidade de amostra a analisar é colocada
junto à base da placa, através da utilização de um capilar de vidro. Depois de
carregada, a placa é então colocada na vertical, sobre uma pequena porção de
um eluente adequado (de forma que a zona da base contacte com o líquido),
dando início então à separação dos diversos compostos.
O eluente sobe lentamente sobre a placa, por acção de capilaridade. Em
princípio, os componentes irão diferir na solubilidade e na força da sua adsorção
à matriz da placa, pelo que alguns componentes irão migrar mais que outros
quando o eluente chega ao topo da placa, a placa é removida da câmara de
desenvolvimento, o solvente é evaporado e os componentes separados são
visualizados. Sendo posteriormente a placa colocada numa câmara com um
agente revelador como o iodo ou o ácido sulfúrico, que vão corar as amostras.

Figura 1- Esquema da cromatografia em camada fina

No trabalho realizado na aula obtivemos uma cromatografia em camada

fina sendo que os compostos com maior afinidade à fase móvel, ou seja, menor
afinidade à fase estacionária vão se encontrar mais abaixo, sendo o composto
com mais afinidade o colesterol e o com menos o oleato de colesterol.
Com base na cromatografia chegamos à conclusão que a amostra vai
corresponder à trioleína pois ambas apresentam a mesma com a fase
estacionária.
 Cromatografia em gel
A cromatografia em gel (gpc) é uma técnica cromatográfica que separa
moléculas dissolvidas com base no seu tamanho, bombeando-as através de
colunas especializadas que contém no seu interior um material microporoso.
À medida que a amostra é separada e eluída da coluna, ela pode ser caracterizada
por um único detetor de concentração (calibração convencional) ou por uma série
de detetores (calibração universal e deteção tripla). GPC é usada para caracterizar
polímeros naturais e sintéticos, bio polímeros, proteínas ou nanopartículas.
 Moléculas maiores migram mais rapidamente que as menores porque não
conseguem penetrar no interior dos poros do gel, eluindo diretamente da coluna.
As moléculas menores, por entrarem pelos poros da coluna, e levarem mais
tempo a percorrer os "labirintos", eluem tardiamente em relação às maiores.

Ao analisar o gráfico 1 e comparando a gráficos pesquisados podemos concluir

que o primeiro composto a sair foi o azul de dextrano, sendo o composto que
ficou menos tempo retido na fase estacionária, posteriormente saíram o
citocromo c e o cromato de potássio, respetivamente.

Conclusão
 Bibliografia
Campos, L. (2001). Entender a Bioquímica, 3ª edição. Escolar Editora, Lisboa.

Hipólito-Reis, C., Alçada, M.N., Azevedo, I. (2002).

Práticas de Bioquímica para as Ciências da Saúde, Lidel, Lisboa.

Holme, D. & Peck H. (1998). Analytical Biochemistry, 3rd ed., Addison Wesley Longman
Limited, New York.

MCKEE, T & MCKEE, J. R. (2003). BIOCHEMISTRY: THE MOLECULAR BASIS OF LIFE, 3RD ED.,
MCGRAW-HILL, NEW YORK.
QUINTAS A.; FREIRE, A. P.; HALPERN, M. J. (2008). Bioquímica - Organização Molecular da
Vida, Edições Lidel, Lisboa.

Pombeiro, A. (1983). Técnicas e Operações Unitárias em Química Laboratorial. Fundação

Calouste Gulbenkian, Lisboa.

Voet, D., Voet, J. G & Pratt, C.W. (2005). Fundamentals of Biochemistry, 2ª ed. John Wiley &
Sons, Inc., New York.

Cromatografia de gel de filtração - 610 Palavras | Trabalhosfeitos

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