UNIVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAIS Departamento de Qumica Qumica Orgnica Experimental

ATIVIDADE 1: CROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA (CCD)

Grupo 2 Turma PS1 Nathlia Pacfico de Carvalho Regiane Silva Paiva Prof. Gaspar Diaz

Belo Horizonte, 20 de agosto de 2013

1. OBJETIVOS Introduzir a tcnica da cromatografia em camada delgada (CCD). Realizar um estudo experimental da fotoisomerizaocis-trans do azobenzeno. Realizar a identificao dos compostos benzidrol e benzofenona. 2. INTRODUO A cromatografia um mtodo fsico-qumico que permite separar, isolar, identificar e quantificar substncias. Ela fundamentada na migrao diferencial dos componentes presentes em uma mistura, o que ocorre devido a diferentes interaes entre duas fases imiscveis: a fase mvel e a fase estacionria. O mtodo apresenta grande versatilidade e aplicabilidade graas grande variedade de combinaes possveis entre fase mvel e fase estacionria (DEGANI, CASS & VIEIRA, 2008). Existem vrias tcnicas cromatogrficas, desde as mais simples, como cromatografia em papel e em camada delgada, que so classificadas como planas, at as mais sofisticadas, como a cromatografia lquida de alta eficincia. Atualmente as diferentes modalidades de cromatografia so responsveis por mais de 70% das anlises em Qumica Analtica (NUNES & RIBEIRO, 2008). Uma dessas modalidades a cromatografia em camada delgada (CCD); um tipo de cromatografia planar que se baseia na adsoro lquido-slido. A fase estacionria (adsorvente) slida e distribuda em um suporte slido inertede modo a formar uma camada delgada. A fase mvel (eluente) elui pela placa por capilaridade, arrastando substncias presentes na amostra aplicada na placa. A separao se d pela diferena de afinidade dos componentes da mistura pela fase estacionria (DEGANI, CASS & VIEIRA, 2008). A fase estacionria pode ser composta por diversos tipos de adsorventes, os mais utilizados, no entanto, so a slica, a alumina, a celulose e a poliamida. Dentre esses, a slica o adsorvente mais utilizado. um material altamente poroso e, devido presena dos grupos silanis (ligao de silcio com uma hidroxila), tambm um material fortemente polar. A fase mvel pode ser constituda por um solvente puro ou por misturas de solventes. A escolha deste parmetro essencial para a eficincia da CCD. No se deve utilizar solventes com polaridade muito baixa, porque eles no conseguiriam remover os compostos do ponto de aplicao, j que a fase estacionria bastante polar. Solventes muito polares tambm no devem ser a primeira opo, j que eles so capazes de arrastar os componentes da amostra at o topo. O ideal trabalhar com misturas de solventes para obteno de polaridade mdia com relao polaridade dos compostos presentes na amostra (DEGANI, CASS & VIEIRA, 2008). 1

Dentro da CCD, o parmetro mais importante a ser considerado o fator de reteno (Rf), que a razo entre a distncia percorrida pela substncia analisada e a distncia percorrida pela fase mvel (DEGANI, CASS & VIEIRA, 2008). Por ser um mtodo simples, rpido, visual e de baixo custo, a CCD largamenteutilizadapara o acompanhamento de reaes orgnicas, sendo tambm muito empregada na purificao de substncias e na identificao de fraes coletadas em cromatografia lquida clssica.

3. RECURSOS NECESSRIOS 3.1 Materiais Bquer (50 mL) Cubas de vidro Esptula Papel de filtro Placas cromatogrficas previamente preparadas Tubos capilares Vidros de penicilina 3.2 Reagentes Acetona Azobenzeno Benzidrol Benzofenona Tolueno

4. PARTE EXPERIMENTAL 4.1. Procedimentos PARTE I - Isomerismo cis-transno azobenzeno a) Utilizando um tubo capilar, aplicou-se uma gota de soluo de azobenzeno em uma placa de vidro contendo adsorvente, na altura de 1,0 a 1,5 cm e prximo a uma das bordas laterais desta lmina (ver Figura 1 com esquema de cromatoplaca). b) Exps-se a placa ao sol por 15 minutos. c) Adicionou-se o tolueno, solvente da eluio, em cuba seca com papel filtro, de modo que no ultrapassasse 1 cm de altura. 2

d) Transcorrido o tempo de exposio da placa ao sol, retirou-se a lmina da exposio ao sol e fez-se uma segunda aplicao de azobenzeno em outra extremidade desta placa, empregando-se a soluo que estava no escuro. e) Introduziu-se a placa na cuba de eluio e tampou-a (ver Figura 2). Aguardou-se o solvente eluir at uma altura aproximada de 1 cm abaixo da extremidade superior da placa. f) Ao remover a placa para o exterior, marcou-se com lpis a posio atingida pelo eluente. Aps isso, verificou-se as diferenas de posies e o nmero de manchas no cromatograma. g) A fim de permitir a evaporao do solvente, inseriu-se a placa na estufa. Aps alguns segundos, mediu-se as distncias entre o ponto de aplicao da amostra e a frente do eluente, assim como do ponto de aplicao e o centro de cada uma das manchas para o clculo dos Rfs (ver Figura 3). h) Associou-se as manchas ao cis-azobenzeno e ao trans-azobenzeno.

PARTE II - Identificao dos compostos benzidrol e benzofenona a) Em um bquer pequeno, adicionou-se pequena quantidade da substncia A e trs gotas de acetona para dissolv-la. b) Em seguida, aplicou-se essa soluo prxima a uma das bordas laterais de uma cromatoplaca, reforando com segunda aplicao. c) Semelhantemente, procedeu-se para a substncia B na outra borda da placa, de modo que as aplicaes permanecessem afastadas uma da outra. d)Eluiu-se a placa com tolueno em cuba cromatogrfica, at que o solvente alcanasse aproximadamente 1 cm abaixo da borda superior da cromatoplaca. e) Ao remov-la da cuba, marcou-se a frente do eluente e esperou-se a evaporao do solvente. f) Introduziu-se a placa em uma cuba reveladora (ver Figura 4) e aguardou-se a complexao do iodo contido nesse recipiente, de modo a permitir a visualizao das manchas. g) Retirou-se a placa e contornou-se as manchas com material pontiagudo, fazendo-se as medidas para obteno dos Rfs (ver Figura 3). 3

4.2. Montagens

Figura 1. Esquematizao de uma cromatoplaca usada em CCD Fonte: Arquivo pessoal

Figura 2. Cuba cromatogrfica de vidro com cromatoplaca e papel de filtro dentro Fonte: Arquivo pessoal 4

Figura 3. Esquematizao de um cromatograma obtido por CCD, com clculo do fator de reteno (Rf) indicado Fonte: DEGANI, CASS & VIEIRA, 2008

Figura 4.Cuba reveladora de iodo Fonte: Arquivo pessoal

5. RESULTADOS E DISCUSSO PARTE I - Isomerismo cis-transno azobenzeno Os resultados obtidos para o estudo da fotoisomerizaocis-transdo azobenzenos por CCD so apresentados em forma de cromatograma (Figura 5) e fatores de reteno - Rf (Tabela 1). No cromatograma, o azobenzeno aplicado em 1 sofreu exposio solar por 15 minutos e o aplicado em 2, no. O clculo dos Rf mostrado na Figura 3 e consiste razo entre a distncia percorrida pela substncia em questo e a distncia percorrida pela fase mvel. As manchas obtidas no cromatograma foram identificadas pelas letras a, b e c para serem relacionadas com os Rf apresentados.

Figura 5.Cromatogramados ismeros cis e trans do azobenzeno Fonte: Arquivo pessoal

Tabela 1. Fatores de reteno calculados para as manchas obtidas no cromatograma dos ismeros do azobenzeno.
Ponto de aplicao 1 Exposto ao sol 2 No exposto ao sol Identificao da mancha a b c Rf 0,21 0,74 0,75

O experimento realizado com o azobenzeno objetivou demonstrar o seu fotoisomerismo e como ele poderia ser comprovado atravs da CCD. A Equao 1 mostra o equilbrio de isomerizao do composto. Os dois ismeros podem se interconverter de um para o outro com partilhares comprimentos de onda de luz.

Equao 1. Fotoisomerizao do azobenzeno Fonte: FAVARIM, 2006

Analisando-se as estruturas dos dois ismeros do azobenzeno, fcil notar que a forma cis representa o mais polar e a trans o menos polar. Esta anlise simples e feita com avaliao dos momentos de dipolo das duas molculas. Na forma trans, os momentos de dipolo se cancelam, enquanto que na cis eles conferem polaridade estrutura. Tendo em vista que o trans-azobenzeno o menos polar, a identificao das manchas observadas no cromatograma (Figura 5) facilmente realizada. Submeteu-se a cromatoplaca com o ponto de aplicao 1 exposio solar. Para esta aplicao, observouse duas manchas. Isto um indcio de que o azobenzeno aplicado sofreu fotoisomerizao resultante da exposio luz solar, contendo raos ultravioleta (UV). A mancha a, que eluiu menos, certamente corresponde forma cis, mais polar e consequentemente mais retida pela slica, adsorvente fortemente polar. Esta fase estacionria apresenta por toda a sua superfcie grupos silanis (Si-OH), que lhe conferem suas propriedades polares (Figura 6). A

Figura 6. Superfcie simplificada da slica gel. Grupos silanois indicados por a, b, c e d Fonte: COSTA, 2007 7

A mancha b, que eluiu mais, apresenta menor carter polar e cert amente representa a forma trans do azobenzeno. O solvente utilizado para a eluio o tolueno (Figura 7), substncia com caractersticas apolares. Sua baixa polaridade em contraste com a alta polaridade da fase estacionria configura um meio capaz separar substncias que apresentam entre si grandes diferenas de polaridade.

Figura 7. Estrutura do tolueno

Os resultados obtidos no cromatograma para a aplicao 1 demonstram que a fotoisomerizao ocorre e que h um equilbrio entre os ismeros responsvel pela presena simultnea dos dois nos resultados analisados. A aplicao 2 do azobenzeno no foi exposta a luz solar. Objetivou-se com este procedimento verificar qual forma isomrica do azobenzeno predomina sem ao dos raios solares. Obteve-se apenas uma mancha para esta aplicao (Figura 5), a mancha c. O Rf desta mancha muito prximo ao obtido para a mancha b da aplicao 1 (Tabela 1). Como discutido para a aplicao 1, esta mancha representa o trans-azobenzeno, substncia menos polar e que, portanto, mais facilmente eluda junto ao solvente. O fato de o trans-azobenzeno ser identificado na soluo no exposta ao sol e o fato da mancha para as formas trans aparecerem com colorao mais intensa (o que dificilmente visualizado na Figura 5), constituem evidncias experimentais de que a configurao trans para o azobenzeno a mais estvel e predomina fortemente no equilbrio desta substncia quando no exposta luz solar. A forma trans , portanto, a predominante no frasco de reagente do azobenzeno. Outro aspecto que deve ser ressaltado a utilizao dos valores de Rfs. Eles constituem uma ferramenta importante para a identificao de compostos por comparaes com padres. No caso do experimento relatado, os valores de Rfs prximos observados para as manchas b e c reforaram a identificao do trans-azobenzeno.

PARTE II - Identificao dos compostos benzidrol e benzofenona Os resultados obtidos para a identificao das substncias A e B por CCD so apresentados em forma de cromatograma (Figura 8) e fatores de reteno - Rf (Tabela 2). Sabe-se que uma das substncias aplicada a benzofenona e outra o benzidrol. Empregou-se o mtodo da CCD para identificao das substncias A e B, o que se deu pelo estudo da relao polaridade e eluiona nacromatoplaca.

Figura 8. Cromatograma das substncias A e B Fonte: Arquivo pessoal Tabela 2. Fatores de reteno calculados para as manchas obtidas no cromatograma das substncias A e B.
Ponto de aplicao A Substncia desconhecida A B Substncia desconhecida B Identificao da mancha a b Rf 0,16 0,29

Para a correta identificao das substncias aplicadas na cromatoplaca, deve-se avaliar a polaridade do benzidrol e da benzofenona (substncias utilizadas na aplicao), a fim de se verificar qual delas eluiria mais com o tolueno (eluente). Na Figura 9 so apresentadas as estruturas dessas duas substncias.

OH

Benzidrol

Benzofenona

Figura 9. Estruturas qumicas do benzidrol e da benzofenona

Tanto o benzidrol quanto a benzofenona apresentam um grupamento contendo oxignio em suas molculas, o que lhes confere certa polaridade. No entanto, o grupo hidroxila do benzidrol torna essa substncia a mais polar, devido possibilidade de realizao de ligaes de hidrognio. O grupo benzofenona, com seu grupamento cetona, possui interaes tambm fortes do tipo dipolo-dipolo, mas no to intensas quanto as ligaes de hidrognio do grupo funcional lcool presente no benzidrol. Discutida a polaridade das duas substncias e considerando-se a natureza do adsorvente utilizado (slica, bastante polar), fcil concluir que a mancha a, proveniente da substncia A e que apresentou o menor valor de Rf (eluiu menos com o tolueno), corresponde ao benzidrol. Por ser o composto mais polar, ele ficou mais adsorvido pela slica, sendo menos eludo pelo solvente. Por conseguinte, a mancha b, proveniente da substncia B e que apresentou o maior valor de Rf, corresponde benzofenona.

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6. CONCLUSES O emprego da cromatografia em camada delgada para a identificao dos fotoismeros de azobenzeno e para a distino entre benzidrol e benzofenona, permitiu a compreenso da metodologia envolvida deste recurso laboratorial. Atravs do experimento, verificou-se o fundamento fsico-qumico deste mtodo, pois tem como bases a interao intermolecular do adsorvente, da amostra e do solvente, alm da velocidade de separao devido polaridade dos trs componentes. Apenas com essas simples propriedades, pode-se identificar compostos, atestar as diferenas estruturais entre ismeros e confirmar a interconverso entre eles por meio de um fator externo (no caso, a luz). Dessa forma, como fornece uma pluralidade de anlises se alicerando em propriedades simples das substncias, torna-se uma tcnica bem vantajosa e flexvel.

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7. BIBLIOGRAFIA COLLINS, C.H.; BRAGA, G.L. e BONATO, P.S. Introduo a mtodos cromatogrficos. 5 ed. Campinas: Editora da Unicamp, 1993. COSTA, J. R.Novos agentes sililantes contendo nitrognio e enxofre como precursores para a sntese de slica gel e de slicasmesoporosas modificadas. Joo Pessoa, Programa de Ps-Graduao em Qumica, UFPB. Dissertao de Mestrado, 21p, 2007. DEGANI, A. L. G.; CASS, Q. B.; VIEIRA, P. C. Cromatografia: um breve ensaio. Qumica Nova na Escola, n 7, p. 21-25, maio, 2008. Disponvel em: http://qnesc.sbq.org.br/online/qnesc07/atual.pdf Acesso em: 03/09/13, s 22:45h. FAVARIM, H. R. Estudo dos processos fotofsicos em heteroestruturas orgnicas que utilizam chaveamento de luz por fotoalinhamento molecular. Dissertao (Mestrado em Cincias Fsica Bsica) Instituto de Fsica de So Carlos, Universidade de So Paulo, So Carlos, 2006 NUNES, C. R.; RIBEIRO, N. B. Anlise de pigmentos de pimentes por cromatografia em papel. Qumica Nova na Escola, n 29, p. 34-37, agosto, 2008. Disponvel em: http://qnesc.sbq.org.br/online/qnesc29/08-EEQ-0707.pdf Acesso em: 03/09/13, s 23:10h. VIEIRA, H. S.; SILVA, R. R. Qumica orgnica experimental para farmcia. UFMG, Belo Horizonte, 2013.

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ANEXO 1 Questionrio 1. Em que consiste a tcnica CCD? A cromatografia em camada delgada um mtodo fsico-qumico de separao de componentes de misturas que se baseia na adsoro lquido-slido. Uma fina camada de adsorvente, usualmente a slica, constitui a fase estacionria e depositada sobre uma placa plana e inerte, geralmente de vidro, formando as cromatoplacas. As amostras so aplicadas sobre a cromatoplaca, conforme mostra a Figura 1, e uma fase mvel (solvente puro ou mistura) colocada em contato com esse sistema dentro de uma cuba cromatogrfica. O solvente elui pela cromatoplaca por capilaridade, levando consigo substncias presentes nas amostras. A separao se d pela diferena de afinidade dos componentes presentes na mistura pela fase estacionria. Aqueles mais polares ficam mais retidos no adsorvente, que fortemente polar (como a slica). 2. Em que situaes a CCD pode ser utilizada como tcnica de separao/purificao? Justifique. O uso da CCD como tcnica de separao/purificao est principalmente atrelado ao uso da cromatografia em coluna. A CCD pode, por exemplo, ser usada para monitorar uma separao realizada por cromatografia em coluna ou determinar o solvente mais adequado para esta separao. Neste sentido, ela amplamente utilizada para a separao de componentes presentes em matrizes vegetais, por exemplo. 3. Complete a tabela a seguir
Substncia Estrutura Polaridade (ordem decrescente) Rf experimental

cis-azobenzeno

0,21

cis-azobenzeno>transazobenzeno transazobenzeno 0,74

OH
Benzidrol 0,16

Benzidrol>benzofenona

O
Benzofenona 0,29

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4. Qual azobenzeno foi utilizado na atividade? Justifique O azobenzeno utilizado na atividade foi o trans. O experimento mostrou que o azobenzeno aplicado na cromatoplaca e no exposto ao sol permanece predominantemente na forma trans, o que indica que ele foi utilizado. 5. Qual deles o mais estvel? Por qu? O trans. O experimento forneceu evidncias experimentais para isso, uma vez que as manchas correspondentes ao ismero trans apareceram com maior intensidade, indicando mais concentrao dele e tambm devido ao fato de ele ser o ismero predominante na ausncia da luz solar, como foi verificado pela segunda aplicao. Um dos motivos que explica isso a conformao mais distorcida do ismero cis, que o torna menos estvel. 6. O que ocorreu durante a irradiao de luz? Equacione a reao qumica correspondente ao processo. A irradiao de luz provoca a isomerizao da forma trans, deslocando o equilbrio da reao para a formao de certa quantidade do ismero cis.

7. Identifique as substncias A e B. A: benzidrol e B: benzofenona. 8. Como a confirmao da identidade dessas substncias poderia ser feita, utilizando CCD? Ao aplicar as duas substncias e deixa-las eluir com um solvente apropriado, aquela que elusse mais corresponderia benzofenona, j que ela menos polar, e a que elusse menos corresponderia ao benzidrol, mais polar e mais retido no adsorvente de slica gel. De fato, fez-se isso na prtica e identificou-se as duas substncias com base nos Rfs apresentados.

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