Replicação do Dna

Fundamentos da biologia celular [recurso eletrônico] / Bruce Alberts ... [et al.]. – 3. ed. – Dados eletrônicos. – Porto
Alegre: Artmed, 2011. – Capítulo 6: Replicação, Reparo e Recombinação do DNA

A cada divisão celular, todo o A replicação do DNA produz duas

genoma deve ser duplicado com precisão, duplas-hélices completas a partir da
1 para isso ocorre a replicação do DNA. molécula original de DNA, cada uma dessas
hélice nova possui a sequência idêntica à
PAREAMENTO DE BASES
dupla-hélice do DNA original, exceto em
Cada fita da dupla-hélice de DNA raros erros.
contém uma sequência de nucleotídeos,
que é exatamente complementar à
sequência de nucleotídeos da outra fita da
hélice.

E cada uma dessas fitas podem

servir de molde para uma nova fita
complementar.
Replicação
Por exemplo: se denominarmos duas fitas semiconservativa
como S e S’, a fita S pode servir de molde
para uma nova fita S’, e, ao mesmo tempo a
fita S’ original pode servir de molde para
uma nova fita S. Observe:

ORIGENS DE REPLICAÇÃO

Geralmente a dupla-hélice de DNA

é bem estável. Para que ocorra a replicação
é necessário que separe as duas fitas, no
entanto, essas fitas estão unidas
fortemente devido ao grande número de
Pares de bases: pontes de hidrogênio entre as bases
presentes em ambas fitas.
A–T
Desta forma, o processo de
G-C replicação se começa com as proteínas
- O DNA atua como um molde para sua iniciadoras que se ligam ao DNA e
própria duplicação; provocam a aberturas dessas fitas,
quebrando as pontes de hidrogênio.
A replicação do DNA é considerada
semiconservativa, pois cada dupla-hélice Os locais que ocorrem essa
filha é formada por uma fita conservada e abertura inicial recebem o nome de origens
uma nova. A cada ciclo de replicação, uma de replicação, geralmente caracterizados
é conservada e a outra é nova, as fitas por uma sequência específica de
originais (conservadas) permanecem nucleotídeos.
intactas por diversas gerações.

@med.laisalcolea
 O par de bases A -T é unido por
menos pontes de hidrogênio do que o par
G-C. Portanto, um segmento de DNA rico
em pares de bases A -T é relativamente mais
fácil de ser separado e segmentos de pares
2 A-T são normalmente encontrados nas
origens de replicação.
Em um genoma bacteriano,
geralmente possui uma única origem de
replicação, diferente do genoma humano
que apresenta vários locais de replicação.
FORQUILHAS DE REPLICAÇÃO
Durante o processo de replicação,
existem estruturas em forma de Y, são
denominadas de forquilhas de replicação.
São nessas forquilhas, que a
máquina de replicação se desloca sobre o
DNA, causando a abertura dessas fitas, e
cada uma das fitas é usada como molde
para produzir a nova fita.
Duas forquilhas de replicação são
formadas a partir de cada origem de
replicação, e essas se afastam da origem
nas duas direções, separando o DNA à
medida que vão se afastando, devido a isso
a replicação do DNA é dita como
bidirecional.
@med.laisalcolea
Na máquina de replicação contém a
enzima DNA-polimerase, que já vai
sintetizando o DNA novo utilizando uma das
fitas existentes como molde.
As forquilhas de replicação se
movem em direções opostas.
- O DNA é sintetizado na direção 5’-3’.
- A polimerização do DNA ocorre na direção
5’-3’, o DNA-polimerase não se dissocia do
DNA cada vez que adiciona um novo
nucleotídeo na cadeia crescente, pelo
contrário, permanece associada ao DNA e
se desloca a cada etapa, sobre a fita molde
por vários ciclos da reação de
polimerização.
FORQUILHA DE REPLICAÇÃO E
ASSIMETRIA
A direção 5’-3’ da polimerização,
impõe um problema para as forquilhas.
As duas fitas da dupla-hélice,
possuem orientações opostas, desta forma,
uma das fitas novas de DNA é sintetizada
sobre o molde com orientação 3’-5’ e a
outra com a orientação oposta 5’-3’.
Porém, a forquilha de replicação é
assimétrica, então à primeira vista, ambas
as fitas novas de DNA parecem crescer na
mesma direção, isto é, na direção do
movimento da forquilha.
 A DNA-polimerase, entretanto,
pode catalisar o crescimento da cadeia de
DNA em uma única direção; a adição de
novas subunidades só pode ocorrer na
extremidade 3’ da cadeia. Assim, uma fita
3 nova de DNA só pode ser sintetizada na
direção 5’-3’.
A fita de DNA cuja extremidade 5’
deve crescer é produzida de modo
descontínuo, em pequenos segmentos
sucessivos, na qual a DNA-polimerase
polimeriza para trás em relação ao
movimento da forquilha, na direção 5’-3’
em cada novo segmento, esses pequenos
segmentos de DNA recém o no de
fragmentos de Okazi.
Fita retardada: sintetizada de modo
descontínuo.
Fita-líder: sintetizada de modo contínuo
DNA-POLIMERASE É AUTOCERRETIVA
- A enzima monitora cuidadosamente o
pareamento de bases entre cada
nucleotídeo;
- A DNA-polimerase catalisa a reação de
adição apenas quando o pareamento está
correto;
- Quando DNA-polimerase produz um erro
e adiciona um nucleotídeo incorreto, ela
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pode verificar o erro por uma atividade
chamada de correção de erros
(proofreading).
- A correção de erros ocorre ao mesmo
tempo em que a síntese de DNA.
- Antes de adicionar um próximo
nucleotídeo à cadeia crescente de DNA, a
enzima verifica se o nucleotídeo inserido
anteriormente está pareado de forma
correta à fita-molde. Se estiver, a
polimerase adiciona o próximo nucleotídeo;
se não, a polimerase remove o nucleotídeo
malpareado e tenta novamente.
- Esse mecanismo de correção explica por
que a DNA-polimerase sintetiza DNA apenas
na direção 5’-3’, apesar de esse modo impor
um mecanismo complicado de costura para
trás na forquilha de replicação.
- Caso a DNA-polimerase hipoteticamente
sintetizasse na direção 3’-5’ (e assim não
necessitaria “costurar para trás”) seria
incapaz de autocorreção;
PEQUENOS SEGMENTOS DE RNA
ATUAM COMO INICIADORES
A enzima é capaz de começar
uma nova cadeia polinucleotídica devido
a junção de dois nucleotídeos, mas não é
capaz de sintetizar DNA.
Ela produz um tipo de ácido
nucleico relacionado com o RNA, esse
pequeno segmento de RNA é pareado à
fita-molde e fornece a extremidade 3’
pareada como ponto de início para a DNA-
polimerase. Portanto, atua como um
iniciador (primer) para a síntese de DNA, e a
enzima que sintetiza o iniciador de RNA é
denominada primase.
Fita-líder: apenas um iniciador de RNA é
necessário para começar a replicação na
origem de replicação; uma vez que a
forquilha de replicação tenha se
estabelecido, uma extremidade 3’ pareada
 é continuamente apresentada à DNA-
polimerase à medida que se desloca pela
fita-molde.
Fita retardada: síntese de DNA é
descontínua, novos iniciadores são
4
continuamente necessários. À medida que
o movimento da forquilha de replicação
expõe um novo segmento de bases não
pareadas, um novo iniciador de RNA é
produzido em intervalos na fita retardada.
Para produzir uma fita nova
contínua de DNA, a partir da fita retardada,
três enzimas são acionadas para remover o
iniciador de RNA e substituir por
fragmentos de DNA, essas enzimas são:
Nuclease: degrada o iniciador;
Polimerase de reparo: substitui o RNA pelo
DNA;
DNA-ligase: une a extremidade 5’- fosfato
de um fragmento novo de DNA à
extremidade 3’–OH do próximo.
A primase pode iniciar novas
cadeias polinucleotídicas, mas essa
atividade só é possível porque a enzima não
verifica seu trabalho. Como resultado, os
iniciadores possuem uma alta frequência de
erros. Como são feitos de RNA em vez de
DNA, eles são como “cópias suspeitas” para
serem automaticamente removidos e
substituídos por DNA.
MÁQUINA DE REPLICAÇÃO
A máquina de replicação é formada
pela união das proteínas com a DNA-
polimerase e a primase, ela tem a função
de empurrar a forquilha de replicação para
frente e sintetizar o DNA nova atrás dela.
A síntese de DNA só ocorre se a
dupla-hélice estiver aberta à frente da
forquilha de replicação, para que o
trifosfato de desoxirribo-nucleosídeo
possam ser pareados na fita molde.
@med.laisalcolea
Proteínas de replicação: DNA-helicases e
proteínas ligadora de fita simples.
A helicase fica na frente da máquina
de replicação e utiliza energia da hidrólise
do ATP para separar a dupla-hélice e a
proteína ligadora de fita simples se liga ao
DNA de fita simples exposto pela helicase
evitando que ocorra o repareamento de
bases temporariamente e mantem a fita
alongada para que possa atuar como molde
para a DNA-polimerase.
Grampo deslizante (proteína adicional de
replicação): É responsável por manter o
DNA-polimerase firmemente ligado ao
DNA-molde, enquanto sintetiza novas fitas
de DNA. Forma um anel ao redor da hélice
de DNA e como está fortemente ligado à
polimerase, permite que se desloque sobre
a fita-molde sem se desligar, ao decorrer
que vai sintetizando o DNA novo.
Caso não tivesse a proteína
adicional, o DNA-polimerase sintetizaria
apenas pequenos segmentos de
nucleotídeos e se desligariam da fita-molde
de DNA.
Esse grampo em volta do DNA só é
possível devido ao montador do grampo
(proteína adicional da replicação), que
hidrolisa ATP cada vez que prende um
grampo ao redor da hélice de DNA. A
montagem ocorre apenas uma vez por ciclo
de replicação na fita-líder e na fita
retardada, no entanto, o grampo é
removido e colocado novamente cada vez
que tem um novo fragmento de Okazaki.
REPARO NO DNA
A máquina de replicação,
geralmente previne os erros durante a cópia
do DNA, é extremamente difícil ocorrer um
erro por conta disso. Porém, quando ocorre
a célula possui um sistema de segurança,
que recebe o nome de reparo de
malpareamento de DNA cuja função é
 corrigir esses erros raros. Desta forma,
quando a máquina de replicação comete
um erro de cópia um conjunto de proteínas
de reparo de malpereamente reconhece e
remove uma das duas fitas de DNA
5 envolvidas e sintetiza novamente a fita
perdida.

@med.laisalcolea