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Imprinting Genómico

• Alguns genes são expressos de modo

Hereditariedade não Mendeliana diferente no alelo materno ou paterno
• Por vezes um deles é preferencialmente
expresso
• Se houver uma deleção dum destes alelos,
habitualmente activo, o gene não estará
Pilar de Quinhones - Levy funcionante ainda que exista uma cópia
(nem a 50%)

1 2

Evidencia Evidencia
Experiências em ratos • Ratos criados, utilizando translocações
• Embriões com cromossomas só paternos ou equilibradas, com ambas as cópias de uma
maternos não eram viáveis (transplantes
pronucleares) região cromossómica provenientes de um só
• Só com contribuição paterna: progenitor
O embrião não se desenvolve, a placenta
está alterada
# expressão se M ou P, metilação
• Só com contribuição materna:
Embrião com alterações variáveis, placenta e
membranas diminuídas

3 4

Genoma Parental não são totalmente

Evidencia equivalentes
•Macho •Fêmea
•Espécie •Pronuclei •Pronuclei •Efeito

• Transgénicos – sequências de DNA •Rato •2 •Nenhum

•Placenta Normal
• Embrião muito pequeno
integradas em regiões cromossómica com
•Embrião Normal, placenta
imprinting do rato •Nenhum •2
malformada

• Se provenientes de um progenitor o gene •Humano •2 •1 •Principalmente placenta

será expresso, se do outro não •Mola Hidatiforme
•2 •0
•(Principalmente placenta)
•Embrião Normal, placenta
•1 •2
malformada
•Teratoma (massa de tecido
•0 •2
diferenciado)

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1
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Imprinting Evidencia - Humanos

Genómico
Variação na expressão dos genes:
• Origem materna ( p. e. Distrofia Miotónica)
ou paterna ( p. e. Coreia de Huntington)
influenciam a:
• idade de aparecimento
• gravidade
• características da doença

7 8

Imprinting e Doenças
Evidencia - Humanos A delecção no cromossoma 15 revela imprinting

• Anomalia cromossómica idêntica (p.e.

delecção 15q11-q13) origina patologias
diferentes
• Sindroma de Angelman
• Sindroma de Prader-Willi
• Transmissão do Sindroma do X frágil
Falta contribuição Paterna Falta contribuição Materna
=> Sindroma Prader-willi => sindroma Angelman

9 10

Imprinting Fenómenos Epigenéticos

Mecanismo pelo qual, em certos genes, os Modificações da acção do DNA

alelos são expressos de modo diferente independentes da sua síntese
dependendo se a sua origem é materna ou
paterna

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2
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Metilação (5-metil-citosina) Expressão dos genes

• Responsável pela activação e inactivação de
genes. A sua ausência favorece transcrição
(ilhéus CpG)
Depende de:
• Características genéticas “intrínsecas”
(seguindo regras mendelianas dependentes
das sequências de DNA presentes nos
cromossomas)
• Fenómenos epigenéticos

13 14

Delecção cr. 15q

Disomia parental Imprinting / Disomia

Material duplicado dum só progenitor

S. Prader-Willi S. Angelman

Deleção paterna Deleção materna

Disomia materna Disomia paterna

15 16

Região Cr. 15q11-13 - A/PW 4MB

Antecipação
• Fenómeno que consiste no aumento de
gravidade ou frequência das características
patológicas de determinada doença, nas Zonas de quebra UBE3A-gene
ubiquina proteina
fratrias ao longo das gerações ligase

Genes paternos com imprinting

Genes maternos com imprinting

A porção centromérica é
Não se conhece imprinting responsável pela troca de
imprinting materno/paterno,
IC Imprinting center deleção nessa região causa SA

17 18

3
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Sindroma de Prader-Willi
Imprinting centre -15q11-13
• 1/10.000-1/15.000
Imprinting center regula • Recém nascido –
Inicialmente não comem nada dificuldades na deglutição
• A estrutura da cromatina e, de repente, tornam-se obsessivos
• Hipotonia
para a ingesta de alimentos,
• Metilação do DNA havendo uma grande obesidade. • Face achatada
• Expressão gene através de elementos cis actuantes • Genitais externos com
• Estrutura bipartida hipoplasia
• Melhoria posterior da
• Uma parte envolvida da mudança hipotonia
Paterna Materna durante a gametogénese • Obesidade
• Pele e cabelo mais claros
• A outra parte responsável pela mudança do que a família
Materna Paterna

19 20

Sindroma de
Prader-Willi
• Deficiência mental
moderada/grave
• Alterações endócrinas
• Tristes, birras
• Comportamento
obsessivo-compulsivo

21 22

Sindroma de Angelman
• 1/10.000-1/15.000
S. Angelman
• “happy puppet syndrome”
• Ausência ou défice de
• Deficiência mental grave Não falam (pois não desenvolvem linguagem)
linguagem
• Ataxia, movimentos de
• Convulsões com EEG
“boneco”
característico (>80%)
• Riso inapropriado
• Magreza
• Pele e cabelo mais claros
do que a família

23 24
"Happy puppet syndrome", pois parecem uma marionete e têm um riso despropositado

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AMPLIFICAÇÃO DE

SEQUÊNCIAS REPETITIVAS DE

TRIPLETOS

25 É necessário fazer o estudo, pois o risco de recorrência pode variar

desde < 1% a 50%, havendo uma enorme importância de perceber este
26
risco.

Amplificação de Sequências
Repetitivas de Tripletos Situs Frágil
• Síndrome do X frágil
(Martin e Bell, 1943)
•Em 1969, Lubs identifica
um marcador genético, situs
• Fenotipo caracterizado frágil Xq27.3 no
principalmente pela presença de: cromossoma X (FRAXA), o
• face alongada que levou à actual
• maxilar inferior proeminente denominação deste síndrome
• orelhas grandes e
proeminentes (podendo não estar presentes) Cariotipo - meio de cultura
• macroorquidismo (após a pobre em ácido fólico
puberdade) (testículos aumentados)
• deficiência mental /autismo

27 28

Gene FMR1 mutação dinâmica = amplificação instável

• 1991 - mapeamento do gene FMR1
Fragile mental retardation tipe-1
• Primeiro exemplo de um novo tipo de mutações
genéticas humanas a ser identificado, que envolve
a existência de
uma amplificação variável e instável do número de
tripletos de uma região (mutação dinâmica)
• Neste caso CGG situada no cromossoma Xq27.3
Sindroma do X frágil (FXS)
• É a forma herdável mais frequente de
deficiência mental (note-se que, por exemplo, a Trissomia 21 não é, regra
geral, uma forma herdável de deficiência mental).
• É causado pelo silenciamento
transcripcional do gene FMR1 que codifica
a “fragile X mental retardation protein”
(FMRP)

29 30

5
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Prevalência Prevalência
• Mutação completa no sexo masculino de Premutação
1/4000 a 1/7000 • 1/750 a 1/850 no sexo masculino
• Nas mulheres será de 2/3 a ½ da prevalência • 1/250 a 1/300 no sexo feminino
masculina mas com grande variabilidade,
SXF
podendo ser superior por as mulheres com
quadro ligeiro não serem detectadas • 3% em rapazes com doenças do
neurodesenvolvimento não sindrómicas

31 32

Representação esquemática do promotor do

FMR1 e das repetições CGG
Amplificação das repetições
CGG e mudança da
estrutura da cromatina de
uma estrutura aberta, via
metilação e desacetilação de
histonas, para uma estrutura
muito fechada

Apenas a estrutrura aberta é

transcripcionalmente activa.
•A amplificação de tripletos CGG situa-se na 5´UTR (região não traduzida) do primeiro exão
do gene FMR-1
•Transcrição anulada pela hipermetilação da ilha de CpG na região 5´deste gene, que ocorre na
maioria dos indivíduos quando o tamanho da expansão é superior a 200 repetições

33 34

Penagarikano O
et al, 2008

FXS
• A mutação completa resulta numa hipermetilação e
silenciamento do gene FMR1 e consequente deficiência ou
ausência da proteína FMR1(FMRP)
• A FMRP é uma proteína RNA-biding que se pensa regular
a tradução no dentrito em resposta à activação neural
glutamatérgica, modulando assim a plasticidade sináptica e
a morfologia dentrítica

Plasticidade Sináptica:
• Capacidade da sinapse para mudar de força ou mudar o
potencial transmembranar

35 36

6
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FXS
• A probabilidade de existência de expansão depende do
número de repetições
• Alelos com mais de 90-100 repetições CGG apresentam
um risco de expansão para > 200 CGG de quase 100%, na
geração seguinte

• O FMR1 normal revela que as repetições CGG não são

puras mas apresentam uma interrupção AGG a cada 9-10
repetições, a o alelo mais comum é
(CGG)9−10AGG(CGG)9AGG(CGG)9

Hagerman et al, Pediatrics

2009;123;378-390

37 38

FXS Gene FMR1

• A perda destas interrupções é um factor
importante para a existência de instabilidade
Apresenta fenómenos de
Antecipação
• Para além deste mecanismo o FXS também
pode ser causado por deleções e mutações
pontuais que levam ao sindroma por
deficiente produção de proteína ou proteína O processo de amplificação ocorre durante a
não funcional
oogénese

39 40

Sindroma do X frágil
• A transmissão através das mulheres é
essencial para a existência da expansão de
tripletos, podendo esta ocorrer na meiose e
mitose, a última dando a origem a
mosaicismo
• O número de CGG e a lionização são
factores determinantes para o grau de
gravidade da patologia no sexo feminino

41 42

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Sindroma do X
Frágil

2 filhos afectados

43 44

Sindroma do X
Frágil
Prémutação 55-200 CGG
Falência prematura ovárica (POF)
• <40 anos
• Causa genéticas e ambientais
• 60% sem causas conhecidas

FXTAS - Fragile X tremor ataxia syndrome

• Tremor e Ataxia cerebelosa aos 50-60 anos

45 46

FXTAS
• Os níveis e mRNA estão aumentados mais de 10x nos
indivíduos com prémutação, apesar da redução da
expressão da FMRP
• A actividade transcripcional parece aumentar em resposta a
uma taxa de tradução diminuída
• Foi proposto um mecanismo de ganho de função de RNA
dominante como o mecanismo responsável pelo FXTAS
• O número elevado de transcriptos FMR1 presentes nos
portadores de prémutação pode resultar na sequestração de
proteínas celulares e na formação de inclusões

Elizabeth Berry-Kravis, 2007

47 48

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Outras doenças por amplificação

de tripletos

49 50

Orr et Zoghbi . Annu. Rev. Neurosci. 2007. 30:575–621 Orr et Zoghbi . Annu. Rev. Neurosci. 2007. 30:575–621

51 52

53 54

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Doença de Huntington Doença de Huntington

• Autossómica dominante (amplificação tripletos) • Demência/neurodegenerativa, regressão
• Inicio na idade adulta • Mioclonias
• Doença neurodegenerativa caracterizada nos • Espasticidade / reflexos bruscos/ Babinski
estádios iniciais por sintomas cognitivos
moderados com movimentos de Coreia (mov. • Coreia
involuntários dance-like) progressivos • Atetose
• Podem ocorrer doenças psiquiátricas • Pons/medula/ gânglios basais, anormais
• Ao nível anatómico - degeneração dos gânglios • Amplificação de repetição de tripletos CAG
basais caudal e putamen cerebrais
• Cromossoma 4p16

55 56

D. Huntington
correlação genotipo - fenotipo
Imprinting
Idade de inicio
neurológico • Huntington – Imprinting Paterno
relacionado
com nº tripletos
Variabilidade
devido a genes
modificadores • Distrofia Miotónica – Imprinting Materno

Tempo desde
o inicio à morte
Não relacionado
• Mais grave e mais precoce

57 58

Distrofia Miotónica Distrofia Miotónica

• Distrofia muscular mais comum nos humanos
• DM1 – 19q13.3 • Miotonia – incapacidade do músculo se
• Autossómica dominante, causada por tripletos- CTG na relaxar após a contracção
região 3’ não codificante do gene da serina-teonina kinase
DMPK ( CUG) e SIX5 (adjacentes) • Aperto de mão prolongado
• MPK- Myotine-Proteine Kinase • Fraqueza muscular
• DM2-associada a cr 3- intrão ZNF9 (gene finger zinco)
• Mais marcada na face, com ptose bilateral
das pálpebras e boca aberta
• Envolvimento cardíaco
• Predisposição para cataratas e diabetes
mellitus

59 60

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Distrofia Miotónica
Distrofia
Miotónica
Fácies miotónico (“descaído” )

Mãe Filha

61 62

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