Citogenética Clínica

Genética Clínica
* Especialidade que trabalha a prevenção,
diagnóstico e tratamento das doenças
hereditárias, metabólicas congênitas, erros inatos
do metabolismo, retardamento mental,
diagnóstico de malformações e outras anomalias
congênitas, orientação de casais consanguíneos e * Von Winiwarter – 1912

casais com abortamentos habituais. - Homens: 47 cromossomos

- Mulheres: 48 cromossomos

Citogenética
* Painter (1923,1925)
* Estudo dos cromossomos, de sua estrutura e
- Começou a estudar os cromossomos na meiose
sua herança aplicado à prática da genética
= 46 cromossomos
médica.
* Cariótipo - análise cromossômica (do conjunto * HSU – 1952
de cromossomo); com uma resolução e precisão - Relatou que a análise cromossômica poderia ser
muitíssimo melhoradas, é um procedimento facilitada pelo uso da técnica de cultura de
diagnóstico cada vez mais células de tecido (Fischer, 1946)
importante em várias áreas da medicina. - Utilizando cultura de células embrionárias,
obteve metáfases e ideograma de todos os 48
* Citogenética é o ramo da genética que estuda a cromossomos humanos!
estrutura, função, o comportamento dos - Relatou ainda, que o bom espalhamento dos
cromossomos e suas anomalias. cromossomos
- Anomalias são responsáveis por alta taxa de obtidos no estudo, foram resultado de um
perdas reprodutivas = Citogenética clínica acidente (erro de
auxilia o diagnóstico, prognóstico e conduta laboratório) - Ao invés de lavar as células com
terapêutica dos pacientes. solução isotônica, as culturas foram lavadas com
solução hipotônica antes da fixação.
História da Citogenética
* Walter Flemming – 1882 ! Solução/Meio isotônico: meio que tem a
- Publicou a primeira ilustração dos mesma quantidade de solvente e soluto.
cromossomos humanos ! Solução/Meio hipotônico: mais soluto do que
solvente.
! No meio hipotônico, a água tende a entrar para
a célula, o que faz com que ela estoure. Quando
ela estoura, ele conseguiu ver os cromossomos
espalhados.

* Tjio e Levan - 1956

- Cultura de fibroblastos pulmonares
embrionárias, otimizaram o uso de hipotônica e
colchicina e após revisarem imagens publicadas
há décadas, diplomaticamente relataram que a
espécie humana apresenta: 46 cromossomos.

Distúrbios Citogenéticos
* Mais comuns de todos os distúrbios
mendelianos:
- 1% dos nativivos
- 2% das gestações em mulheres com mais de 35
anos * Centrômero: região central; divide o
- 50% dos abortos espontâneos do 1º trimestre cromossomo em braço curto (p; sempre na parte
de cima) e braço longo (q; sempre na parte de
Efeitos
baixo)
* Problemas na blastogênese - Ex.: 22 p = braço curto do cromossomo 22
- implantação transitória ou não implantação do * Telômero: extremidades dos cromossomos
concepto
* Problemas na embriogênese
- com abortamento espontâneo, normalmente no
primeiro
trimestre
* Ruptura completa, moderada ou leve da
morfogênese - efeitos fenotípicos variados

Estrutura do cromossomo * Bandas: regiões claras e escuras do

cromossomo.
- São formadas na hora que fazemos a coloração.
- Região clara - Eucromatina: corante usado não
se ligou, ou ligou muito pouco. Região em que o
DNA está menos compactado.
- Região escura - Heterocromatina: onde o
corante fixa mais. DNA mais compactado.
! Por que o corante fixa mais na região escura? * Responsável pela produção de nucléolos (Zona
Pois nessa região tem mais compactação de Sat – durante a telófase) – organizador nuclear
DNA - Telófase: célula já está fazendo a formação da
membrana celular
Telômero
Classificação do Cromossomo
* Função:
- Proteger o cromossomo, fazendo com que ele,
na hora em que o DNA fique na forma de
cromossomo, ele consiga se manter estruturado.
- Início do pareamento de cromossomos na
meiose: através dos telômeros, durante a meiose,
os cromossomos vão se organizando para parear.

* É uma região com DNA repetitivo (sequência

repetida de DNA).

Centrômero (ou Constrição Primária)

* Ponto de união das cromátides irmãs.

* Promove a interação do cromossomo com o * No genoma humano, não encontramos
fuso mitótico. cromossomos telocêntricos.
- Cinetocoro: centrômero + fusos mitóticos ! Não tem classificação telocêntrica em humanos

Satélite (ou Constrição Secundária)

* Aparecem na parte terminal de material

cromossômico separado do cromossomo por uma
constrição secundária.
* Constituído de cromatina
 * Fenótipos específicos
* Problemas de crescimento e desenvolvimento
- Caracteres dismórficos, genitália ambígua,
baixa estatura, retardo mental
* Natimortos e morte neonatal
- Incidência em natimortos: ~ 10%
- Nativivos: 0,7%
- Morte neonatal: 10%

! A análise cromossômica deveria

ser realizada em todos os

* Cromossomos de células somáticas: células natimortos e óbitos neonatais:

diploides - 46 cromossomos (23 pares). 1. Para identificar uma possível

causa específica ou, descartar
uma anomalia cromossômica
como o motivo para a perda.

* Células dos gametas: 2. A cariotipagem é essencial

células haploides, 23 para uma consulta genética precisa, podendo

cromossomos; apenas uma fornecer importantes informações para o

cromátide. diagnóstico pré-natal em gestações futuras.

Obtenção dos cromossomos

* Tipos de amostras:
- Sangue periférico (leucócitos)
- Medula óssea
- Fragmento de pele
- Vilo corial
Indicações clínicas para análise - Líquido amniótico
cromossômica - Restos ovulares e de aborto
* Problemas de fertilidade - Tumor
- Abortamento recorrentes, mulheres com
amenorreia e casais com história de infertilidade.
- Proporção de anomalias cromossômicas em um Sangue Periférico

dos genitores = 3 a 6% * Heparina Sódica (tubo tampa

* Histórico familiar verde);
* Neoplasia * Coleta estéril e de preferência
* Gestação em mulher com idade avançada a vácuo;
* Quando não for possível a coleta a vácuo,
Colocar 0,1 mL de heparina na seringa e colher
de 3 a 5 mL de sangue, não transferir para o
tubo, jogar agulha fora e colocar outra tampada
no lugar, enviar na própria seringa para o setor;
* Se for para Cariótipo constitucional manter
refrigerado;
* Se for para doenças hematológicas manter em
temperatura ambiente até 6 horas após a coleta;
* Coleta realizada somente pelo médico;
* Após a coleta o material deverá ser colocado
em frasco estéril e no soro fisiológico estéril;
* Temperatura refrigerado;
* Deverá estar no setor técnico até no máximo 1
dia após a coleta;
* Questionário obrigatório.
Vilo Corial

* Questionário obrigatório. * Coleta realizada somente

- Qual a suspeita clínica do médico; pelo médico;
características clínicas do paciente. * Coleta invasiva, risco para
Medula Óssea o feto;
* Idade gestacional
* Heparina Sódica
recomendada é da 12 a 14ª
* Esse tipo de coleta é realizado somente pelo
semana de gestação;
médico;
* Após a coleta o material
* Coleta estéril;
deverá ser colocado em frasco estéril contendo
* Enviar na própria seringa para o setor;
meio apropriado para conservação dos
* Manter em temperatura ambiente até 6 horas
fibroblastos;
após a coleta;
* Temperatura refrigerado;
* Caso ultrapasse 6 horas verificar no setor um
* Deverá estar no setor técnico até no máximo 1
meio de transporte para conservação dos blastos
dia após a coleta;
por até 1 dia após a coleta;
* Questionário obrigatório.
* Questionário obrigatório.

Líquido Amniótico
Tumor Sólido
* Coleta realizada somente
* Coleta realizada somente pelo médico;
pelo médico;
* Material deverá ser entregue em bloco de
parafina; * Coleta invasiva, risco para

* Temperatura ambiente, tomar cuidado com o feto;

temperaturas muito altas para não danificar a * Idade gestacional

parafina; recomendada é da 15 a 20ª

* Questionário obrigatório. semana de gestação;

* Volume mínimo de 15 mL do líquido
Fragmento de Pele
amniótico;
* Temperatura refrigerado;
* Deverá estar no setor técnico até no máximo 1
dia após a coleta;
* Questionário obrigatório.

Sangue de cordão umbilical

* Coleta realizada somente pelo médico;

*Heparina sódica;
* Idade gestacional recomendada é a partir da 20ª
semana de gestação;
* Temperatura refrigerado;
* Deverá estar no setor técnico até no máximo 48
hs após a coleta;
* Questionário obrigatório.

Restos ovulares de aborto

* Assim que o material for

coletado deverá ser colocado em
frasco estéril e em soro fisiológico
estéril;
* Para fetos com mais de 20 semanas de
gestação, o médico deverá coletar 2 cm da pele
do feto e ou fragmento de placenta;
* Temperatura refrigerado;
* Deverá estar no setor técnico até no máximo 1
dia após a
coleta;
* Questionário obrigatório.
Obtenção dos cromossomos

* Técnica do bandeamento G;
* Sangue coletado no tubo verde (heparina);
* Passos:
1. Centrifugar o sangue – para pegar leucócitos
(por causa do núcleo);
2. Colocar hemácias em um meio de cultura;
- Colocando em meio rico, com suplementos, o
leucócito vai crescer, replicar.
3. Deixar proliferar por 72h
4. Passado 72h, adicionar colchicina – reagente
que impede a formação da fibra dos fusos ISCN – Nomenclatura de citogenética
mitóticos (metáfase de mitose). * Sistema Internacional para Nomenclatura
5. Adicionar uma solução hipotônica (água tende Citogenética Humana
a entrar na célula, e a célula estoura). * Revisão mais recente é o ISCN 2020.
6. Fixar as células em lâmina com um corante
Classificação e Nomenclatura
específico (mais comum é o giensa); caso
necessário, colocar uma lamínula.
7 Visualizar no microscópio.

Como analisar os cromossomos?

* Definição do nº de metáfases;
* Definição da resolução de bandas; * Mais comum – Banda G
* Contagem dos cromossomos; * Idiograma – desenho do cromossomo.
* Avaliação da estrutura dos cromossomos.

Definição e organização do cariótipo

* Na 1ª imagem, cada bolina é uma célula.
Algumas estão estouradas, outras não.
* Conjunto de cromossomos: metáfases.
* Na 2ª imagem, 1º avalia a quantidade de
- Todos os cromossomos 4 começa com uma
cromossomos (46); em seguida analisar tamanho
banda clara no braço curto.
e padrão de bandeamento, e depois montar.
! Analisar 22 conjuntos de Resolução de Bandas (Idiograma)
cromossomos/paciente.
* Como que varia o número de bandas
produzidas?
* Como ter diferentes níveis de resolução dos
cromossomos? Com 400 ou 850 bandas?
- Grau de condensação do cromossomo; no
momento em que está (melhor em prófase e pro
metáfase, onde está menos condensado).
- Delimita melhor cada local gênico dos
cromossomos tripsina e o momento em que está
na divisão.
Métodos de Coloração
Métodos de Citogenética Convencionais
* Convencional (Giemsa) – Banda G
* Banda G – descrimina segmentos
cromossômicos – escuro
* Banda R – reversa de G
* Banda Q – quinacrina, bandas brilhantes
correspondem a bandas G escuras.
- Quinacrina mostarda
* Banda C – evidencia região centromérica e
pericentromérica
- Suspeita de alteração que envolva centrômero.
* Banda NOR (RON) – evidencia região
organizadora de nucléolos
- RON – Zona Sat
* Banda T – evidencia telômeros
Métodos de Citogenética Molecular
* FISH
* SKY
* CGH
Bandeamento G
* Corante Giemsa se liga onde tem histona, DNA
* Heterocromatina – regiões mais condensadas,
escuras do DNA, ricas em adenina e timina;
genes menos ativos.
* Eucromatina – regiões menos condensadas,
claras do DNA, ricas em guanina e citosina;
genes mais ativos.
Análise Cromossômica - Cariótipo
* É o principal exame para análise cromossômica
- Avaliar a integridade e a dosagem da totalidade
do cariótipo cromossômico.
* Método de coleta
- Mais comum é a punção venosa (sangue +
heparina)
* Células utilizadas
- Leucócitos / Linfócitos T
- Princípios: células que crescem e dividem-se
rapidamente em cultura.
- Fibroblastos, linfoblastos, células da medula
óssea não é necessária cultura – elevada
proporção de células em divisão.
* Bloqueio do processo de divisão na metáfase
(agentes químicos - colchicina).
- Fixados em lâminas – corados – técnicas
específicas (bandas) – analisados.
Bandeamento Cromossômico
* Tratamentos cromossômicos envolvendo
desidratação, desnaturação ou digestão
enzimática seguida da incorporação de corante
DNA-específico.
- Enzima: tripsina – desnaturação de proteínas
- Corante: Giemsa
OU
- Desnaturação por calor (tampão fosfato 0,06
M)
- Corante Wright
- Formação de bandas claras e escuras ou
coloridas, evidenciando estruturas de 1-10Mb.
* O mais comum na prática dos laboratórios de
citogenética humana é a análise em cariótipos
com resolução na faixa entre 450 a 550 bandas.
- Aproximadamente 6 milhões de pares de base
por banda;
- Aproximadamente 50 genes por banda.;
Coloração Convencional – Banda G
* Técnica mais rápida, mais fácil e de menor
custo no laboratório.
* Permite contagem do nº total de cromossomos.
* Permite avaliar a qualidade dos preparados
cromossômicos.
Ideograma com banda G
Identificação Cromossômica
* Padrão Banda Q (Quinacrina Mostarda)
- As bandas brilhantes correspondem as bandas
escuras na banda G
* Padrão Banda R
- Tratamento especial (aquecimento) antes da
coloração, as bandas são o reverso daquelas
produzidas na banda G.
* Padrão Banda C
- Coloração da região do centrômero de cada
cromossomo e de outras regiões que contêm
heretocromatina.
Banda R
* Desnaturação com solução salina e calor;
- Aquecimento é para desnaturação da proteína.
* Corante: Giemsa
* Bandamento inverso ao de Banda G e Banda
Q:
- Banda R escura -> Banda G clara, Banda Q
opaca
- Banda R clara -> Banda G escura, Banda Q
brilhante
! Era usado para contraprova.
 divisão celular, nossa célula vai encurtando os
cromossomos. Assim, telômeros vão ficando
menores.
- Envelhecimento tem a ver com o tamanho do
telômero.

Banda C
*Solução de hidróxido de bário e HCl + Corante
Giemsa
* Evidenciam regiões que contenham
heterocromatina constitutiva (heterocromatina
bem condensada):
- centromérica
* A progéria (Síndrome Hutchinson – Gilford) –
- pericentromérica
alteração cromossômica que leva ao
- Yq (braço longo do cromossomo y)
envelhecimento precoce.

Banda Ron (NOR)
* Corante: Nitrato de prata
* As bandas NOR evidenciam
organizadora de nucléolo.
- Prata impregna nos ribossomos ativos.
- Cromossomos 13, 14, 15, 21 e 22.
Banda T
* Correspondem a regiões teloméricas.
* Para que é usado?
- Telômero – telomerase.
- Telomerase, com o passar dos anos, vai
perdendo sua atividade, e com isso, a cada
Aplicações e limitações
* Diagnóstico clínico pré e pós-natal
* Natimortos e óbitos neonatal
* Infertilidades ou abortos recorrentes
* História familiar com cromossomopatias
* Câncer (Leucemias e tumores sólidos)
região
* Permite a elucidação de muitos casos
* Mas, apresenta limitações:
- Resolução de 550 bandas é indicada na análise
de rotina de pacientes com suspeita de alterações
cromossômicas;
- Mesmo assim, alterações muito pequenas
(menores que 5 Mb) não podem ser visualizadas;
exemplo: microdeleção (vista na citogenética
molecular).
 Ex. de microdeleção

Nomenclatura

Abreviatura ISCN