Genética Molecular e

Humana
2020-2021

Aula Teórica

Maria Teresa Coelho

Liliana Silva
mteresacoelho@ipcb.pt
 Citogenética - Alterações
cromossómicas numéricas
As mudanças no nº de cromossomas
podem ser de 2 tipos:

Mudanças de conjuntos
cromossómicos inteiros:

Euploidia aberrante - perda ou

ganho de genomas completos
(ex: n, 2n, 3n, 4n - poliploidias)
 Citogenética - Alterações
cromossómicas numéricas

Mudanças em partes de conjuntos

cromossómicos:

Aneuploidia - diminuição ou aumento

de apenas um ou alguns cromossomas
no cariótipo.
Ex: trissomia 2n+1
monossomia 2n-1
 Citogenética - Alterações
cromossómicas numéricas
Terminologia
 Citogenética - Alterações
cromossómicas numéricas
Euploidias
▪ Poliploidia
• + comum nas plantas
• Rara entre os animais (anfíbios, répteis, peixes)
• Letal nos humanos
- mola hidatiforme parcial ou completa (óvulo fertilizado anormal que se desenvolve em

mola hidatiforme, e não um feto - um quadro clínico chamado de gravidez molar)

- abortos espontâneos - 1º trimestre

- mosaicismo (3n/2n) - sobrevivência muito reduzida (retardação
motora e cerebral profunda)
 Citogenética - Alterações
cromossómicas numéricas
Aneuploidias

▪ Mais frequentes em humanos:

1) Não disjunção meiótica Os 2 cromossomas ou cromatídeos vão

para polos opostos incorretamente (ex.
2) Não disjunção mitótica os 2 para um polo e nenhum para outro)
 Citogenética - Alterações
cromossómicas numéricas
Aneuploidias
1) Não disjunção meiótica
 Citogenética - Alterações
cromossómicas numéricas
Aneuploidias
2) Não disjunção mitótica
 Citogenética - Alterações
cromossómicas numéricas
Trissomia 18 (Síndrome de Edwards)
Cópia extra
Trissomias Autossómicas Trissomia 13 (Síndrome de Patau) de 1
Viáveis cromossoma
Trissomia 21 (Síndrome de Down)

Aneuploidias ligadas Síndrome de Turner (Monossomia X)

ao X/Y Síndrome de Klinefelter (47, XXY ou 48, XXYY)
 Citogenética - Alterações
cromossómicas numéricas
Trissomia 21

• Incidência aumenta com a idade materna

- 1:20 > 45 anos
- 1:95 > 40
- 1:300 > 35
- 1:1000 > 20
• 95% dos casos derivam da não disjunção
meiótica
• Risco aumentado de aborto espontâneo
 Citogenética - Alterações
cromossómicas numéricas
Trissomia 21
• Cariótipo: 47, +21;

• Diagnóstico pré-natal

- Líquido amniótico
- Biópsia das vilosidades coriónicas
(tecido da placenta)

- Diagnóstico pré-natal não invasivo

 Citogenética - Alterações
cromossómicas numéricas
Diagnóstico
pré-natal
não invasivo
 Citogenética - Alterações
cromossómicas numéricas
Trissomia 21
Fenótipo
• Atraso do crescimento intra-uterino
• Baixa estatura
• Face larga e achatada
• Olhos com pregas epicânticas
• Língua protuberante e lábios grossos
• Tonicidade muscular fraca
• Atraso cognitivo (QI: 20-85)
• Anomalias cardíacas
• Sobrevida diminuída
 Citogenética - Alterações
cromossómicas numéricas
Trissomia 21
 Citogenética - Alterações
cromossómicas numéricas
Trissomia 13 - Síndrome de Patau
Sobrevida:
• 45% dos casos morrem no 1º mês
• 70% em 6 meses
• 86% em 12 meses
• Muito poucos sobrevivem
mais de 5 anos

Formas:
• 75%-80% são trissomias
• 20% têm translocações
• Alguns apresentam mosaicismo
(células normais e células com mutação) Pés em “cadeira de balanço”
 Citogenética - Alterações
cromossómicas numéricas
Trissomia 18 - Síndrome de Edwards

Fenótipo:

- Baixo peso

- Dismorfias faciais

- Defeitos cardíacos

- Anomalias dos membros

- Malformações abdominais

- Morrem nas primeiras semanas após o nascimento;

Outros podem durar alguns anos.
 Citogenética - Alterações
cromossómicas numéricas
Síndrome de Turner (Monossomia X)

- Mais comum em mulheres

- Retenção do X materno
(um cromossomo X ausente ou parcialmente ausente)

- Incidência 1/1.500-2.500

- 15% de abortos espontâneos

- Cerca de 50% apresenta mosaicismo* XO

- 99% dos embriões não mosaicos são perdidos durante o 1º trimestre de gravidez

* coexistência de células geneticamente diferentes dentro do mesmo individuo, que se desenvolveram de um único
zigoto.
 Citogenética - Alterações
cromossómicas numéricas

Síndrome de Turner
(Monossomia X)

Mulheres de baixa estatura, com

caracteres sexuais pouco desenvolvidos
e frequentemente estéreis.
Inteligência, geralmente, normal.
 Citogenética - Alterações
cromossómicas numéricas
Síndrome de Klinefelter
- 47, XYY
- 47, XXY
- 48, XXYY
- Mosaicismo
- Outras formas raras (48, XXXY; 49, XXXYY)
- Hipogonadismo
- Azoospermia
- Testículos atróficos
- Ginecomastia (inchaço do tecido mamário) Homens de elevada estatura,
com caracteres sexuais pouco
- Dificuldades de aprendizagem desenvolvidos e quase sempre
estéreis. Inteligência,
- Estatura elevada geralmente, normal.
 Citogenética - Anomalias
estruturais cromossómicas

Delecção Duplicação
Perda de 1 segmento Alteração na ordem
cromossómico dos segmentos

Inversão Translocação

1 segmento é movido para

um cromossoma diferente
 Citogenética - Anomalias
estruturais cromossómicas

Espontâneas

Rutura e
União Induzidas artificialmente (ex: radiações)

Crossing-over ilegítimo (ocorrem em células

somáticas, após emparelhamento entre
segmentos de DNA repetitivo)
 Citogenética - Anomalias
estruturais cromossómicas
Mecanismos de
rearranjos
cromossómicos
 Citogenética - Anomalias
estruturais cromossómicas
Mecanismos de
rearranjos
cromossómicos
 Citogenética - Anomalias
estruturais cromossómicas
(Se o objetivo de estudo é a deteção de
Deteção de deleções e outras alterações cromossómicas, os cromossomas
anomalias estruturais devem ser marcados de uma forma específica, de
modo a que cada um dos pares seja identificado
individualmente)

Bandeamento diferencial
Ex: bandeamento G é uma técnica usada para produzir
um cariótipo visível pela coloração de cromossomas
condensados.
Os cromossomos em metafase são tratados com tripsina e
coradas com corante de Giemsa. As regiões
heterocromáticas, que tendem a ser ricas em AT, coram
mais escuras. A cromatina menos condensada, que tende a
ser rica em GC incorpora menos corante Giemsa, e estas
regiões aparecem como bandas claras.

O padrão de bandas são numerados em cada braço do

cromossoma.
O bandeamento pode ser usado para identificar
anormalidades cromossómicas, tais como
translocações, porque há um padrão único de bandas
claras e escuras para cada cromossoma.
 Citogenética - Anomalias
estruturais cromossómicas
Deteção de deleções e outras
anomalias estruturais

Hibridação in situ
Utilização de sondas complementares à
região de DNA alvo
- Fluorescente (FISH)
- Colorimétrica (CISH)
- Radioactividade
 Citogenética - Anomalias
estruturais cromossómicas
DELEÇÃO

Efeito da deleção depende do tamanho e da região atingida

Deleção intragénica → inativação do gene
Usualmente são deleções mutagénicas → consequências graves
 Citogenética - Anomalias
estruturais cromossómicas
DELEÇÃO
Fragmentos deletados são acêntricos –
sem centrómeros

Perdidos durante a divisão celular

Deleções heterozigóticas:
▪ Desequilíbrio do genoma
▪ Possibilidade de efeito letal
▪ Compensação pelo outro alelo -
deleção viável
 Citogenética - Anomalias
estruturais cromossómicas
DELEÇÃO
Exemplo:
Síndrome do Cri du chat

- Deleção terminal no braço

curto do cromossoma 5

- Choro - mio de gato

- Microcefalia
- Face de lua
- Atraso mental
- Normalmente atingem a
idade adulta
 Citogenética - Anomalias
estruturais cromossómicas
DELEÇÃO

✓ Nem todas as células do

tumor mostram as
deleções indicadas

✓ Geralmente existe uma

mistura de mutações
cromossómicas diferentes
num dado tumor

Outros exemplos
O tumor de Wilms é um tipo especifico de tumor do rim que ocorre principalmente em crianças mais novas.
 Citogenética - Anomalias
estruturais cromossómicas
DUPLICAÇÕES

• Cópia extra de uma

Tandem:
região cromossómica ABCBCD

• As cópias podem estar

localizadas adjacentes Inversas:
ABCCBD
uma à outra
 Citogenética - Anomalias
estruturais cromossómicas
DUPLICAÇÕES

Ex: Crossing-over desigual

- O crossing-over das
regiões emparelhadas
assimetricamente pode
levar a uma triplicação
em tandem de uma
região cromossómica.
 Citogenética - Anomalias
estruturais cromossómicas
INVERSÃO
Rutura em dois locais de um cromossoma e subsequente ligação do
fragmento cromossómico no sentido inverso (180º)

▪ Alteração estrutural equilibrada - não altera a quantidade de material genético

▪ Rutura cromossómica intragénica - gene não viável

Relativamente à localização do centrómero:

 Citogenética - Anomalias
estruturais cromossómicas
TRANSLOCAÇÃO (1 segmento é movido para um cromossoma diferente)

• Recíproca (mais comum)

• Podem alterar:
- O tamanho do
cromossoma
- A posição do
centrómero
 Citogenética - Anomalias
estruturais cromossómicas
TRANSLOCAÇÃO
Recíproca: Não há perda de material genético → translocação balanceada
 Citogenética - Anomalias
estruturais cromossómicas
TRANSLOCAÇÃO
Ex: Translocações encontradas consistentemente em tumores sólidos
 Técnicas de Genética
Molecular
✓ Extração de DNA/RNA - filme:
https://www.youtube.com/watch?v=SmjhKGYjoX0&feature=youtu.be

✓ PCR

✓ Variantes da PCR

✓ Análise dos produtos da PCR

• Sequenciação - Projeto genoma humano

• Genotipagem

• Análise de Polimorfismos - SNP

 Técnicas de Genética
Molecular
Programa do termociclador:

Passo Função Temperatura Duração Nº de

ciclos
Desnaturação Desnaturar 94˚C 2 min X1
inicial

Ciclo de Desnaturar 94˚C 30 sec X35

temperatura Annealing 52˚C 30 sec
Extensão 72˚C 1 min

Extensão final Extensão 72˚C 10 min X1

 Técnicas de Genética
Molecular
SEQUENCIAÇÃO - Método de Sanger

▪ Determinação da sequência de nucleótidos que compõem um fragmento

de DNA

▪ Envolve a síntese de novo de uma série de cadeias simples de DNA, usando

como molde a cadeia de DNA que se quer sequenciar

▪ A síntese começa sempre num ponto definido (por um primer) e termina

por incorporação de nucleótidos terminadores

▪ As cadeias sintetizadas são terminadas prematuramente nos vários

tamanhos possíveis.
 Técnicas de Genética
Molecular
SEQUENCIAÇÃO - Método de Sanger
Nucleótidos terminadores:

▪ Derivados didesoxi dos nucleótidos normais - não possuem um grupo

hidroxilo na posição 3’ da desoxirribose - impedindo as ligações
fosfodiestéricas do DNA

▪ A ligação de ddA, ddC, ddG ou ddT termina a

adição de novos nucleótidos na cadeia
recém-sintetizada
 Técnicas de Genética
Molecular
SEQUENCIAÇÃO
 Técnicas de Genética
Molecular

Omics Technologies
 Técnicas de Genética
Molecular
PROJETO GENOMA HUMANO
 Técnicas de Genética
Molecular
PROJETO GENOMA HUMANO

▪ Iniciou-se em 1900 com James Watson;

▪ Consorcio internacional coordenado do Instituto Nacional de Saúde (NIH)

dos Estados Unidos e a partir de 1993 pelo geneticista Francis Colins;

▪ O projeto originalmente foi planeado para ser terminado em 15 anos,

mas o desenvolvimento da tecnologia acelerou o seu final para 2003.
 Técnicas de Genética
Molecular
PROJETO GENOMA HUMANO
 Técnicas de Genética
Molecular
PROJETO GENOMA HUMANO

Objetivos:

▪ Identificar todos os genes humanos

▪ Determinar a sequência dos cerca de 3,2 biliões de pares de bases que compõem

o genoma do Homo sapiens

▪ Armazenar a informação em bancos de dados

▪ Desenvolver ferramentas de análise dos dados

▪ Transferir a tecnologia relacionada ao Projeto para o setor privado

 Técnicas de Genética
Molecular
PROJETO GENOMA HUMANO

Resultados:

▪ O genoma humano contém 3,2 biliões de nucleotídeos

▪ O tamanho médio dos genes é de 3.000 bases, mas varia muito, sendo o maior

deles o gene da distrofina com 2,4 milhões de pares de bases

▪ A função de cerca de 50% dos genes descobertos é desconhecida

▪ A sequência do genoma humano é 99,9% igual em todas as pessoas

 Técnicas de Genética
Molecular
PROJETO GENOMA HUMANO
 Técnicas de Genética
Molecular
PROJETO GENOMA HUMANO
Resultados:

▪ O cromossoma 1 tem o maior número de genes - 3.168 e o cromossoma Y, o menor

- 344

▪ Algumas sequências específicas foram associadas com inúmeras doenças e

disfunções (ex: cancro da mama, doenças musculares, surdez e cegueira)

▪ Existem milhares de locais nos quais há diferença de apenas uma base → potencial
associação a doenças cardiovasculares, diabetes, artrite e cancro.
 Técnicas de Genética
Molecular
PROJETO GENOMA HUMANO
 Técnicas de Genética
Molecular
PROJETO GENOMA HUMANO

A principal desvantagem do projeto envolve a questão ética.

Área recente e que vai além das questões científicas.
 Técnicas de Genética
Molecular
PROJETO GENOMA HUMANO
• Disponibilidade do sequenciamento do DNA para até 2 mil doenças genéticas;

• Melhoria da compreensão das causas de alguns tipos de cancro;

• Possibilidade de diagnóstico de doenças genéticas;

• Produzir medicamentos com maior poder de atuação e menores efeitos

colaterais;

• Novas terapias e tratamentos baseados no perfil genético de cada indivíduo;

• Possibilidade de personalizar medicamentos conforme a necessidade individual

do paciente;

• Maior suporte para a medicina forense, possibilitando o esclarecimento de

crimes com precisão.
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Molecular
PROJETO GENOMA
HUMANO