Fisiologia da Hemostase,

Plaqueta,
Patologia da plaqueta
 Hematopoiese

MO
0,01 a 0,05%

HSC
Pluripotencial

Auto-
renovação
Diferenciação
Hematopoiese
Hematopoiese
Eritropoiese

Megacariopoiese

Leucopoiese
Megacariopoiese
Trombopoiese
Trombopoiese
Trombopoiese
Trombopoiese
Hemostase
 Processo fisiológico que protege o sistema
vascular aquando de uma lesão.
 Os tecidos são reparados
 E as funções restabelecidas

 Mecanismo de defesa – preserva a

integridade da circulação e limita a perda
de sangue

 Consiste em 3 componentes:
 Vasos sanguíneos e células endoteliais
 Plaquetas
 Proteínas plasmáticas
 Hemostase
Conjunto de mecanismos de defesa

Hemorragia Coagulação

Hemorragia
Coagulação
Coagulação
Hemorragia
 Lesão vascular

Exposição do colagénio
Fator tecidular
Ativação plaquetar
Sinal intracelular

Tromboxano A2, ADP Fosfolípidos

Serotonina CASCATA DA
Vasoconstrição Agregação plaquetar plaquetares COAGULAÇÃO

Hemostase primária
Redução do fluxo Coágulo reversível
sanguíneo Trombina
Fusão plaquetar

Coágulo estável Fibrina

Crescimento celular e Fibrina lentamente

Reparação tecidular dissolvida pela plasmina

VASO SANGUÍNEO INTACTO

 AGREGAÇÃO
FUNÇÃO
ADESÃO PLAQUETAR

SECREÇÃO

ATIVIDADE COAGULANTE
 CASCATA DA COAGULAÇÃO - -
- -
III
• Necessita dos fatores de
coagulação XII, XI, IX, VIII, X além
das proteínas Pré-Calicreína,
Cininogénio de Alto Peso
Molecular e iões cálcio e potássio.

COMPLEXO TENASE
INTRÍNSECO

Ca2
 CASCATA DA COAGULAÇÃO - -
• Necessita dos fatores de - -
coagulação XII, XI, IX, VIII, X além
das proteínas Pré-Calicreína,
Cininogénio de Alto Peso
Molecular e iões cálcio e potássio. III
• Começa quando a Pré-
Calicreína, o Cininogénio de Alto
Peso Molecular, fator XII e XI são
expostos a cargas negativas do
vaso lesado, isso é chamado de
"fase de contacto".
COMPLEXO TENASE
INTRÍNSECO

Ca2
 CASCATA DA COAGULAÇÃO - -
• Necessita dos fatores de - -
coagulação XII, XI, IX, VIII, X além
das proteínas Pré-Calicreína,
Cininogénio de Alto Peso
Molecular e iões cálcio e potássio. III
• Começa quando a Pré-
Calicreína, o Cininogénio de Alto
Peso Molecular, fator XII e XI são
expostos a cargas negativas do
vaso lesado, isso é chamado de
"fase de contacto".

• A Pré-calicreína então converte- COMPLEXO TENASE

se em Calicreína e esta ativa o INTRÍNSECO
fator XII.
O fator XII ativado acaba
convertendo mais Pré-calicreína
em Calicreína e ativando o fator
XI. Ca2
Na presença de iões cálcio, o
fator XI ativado ativa o IX. Por sua
vez o fator IX ativado junto com o
fator VIII ativado, levam à
ativação do fator X. Deste modo,
o complexo enzimático
constituído pelo fator X ativado,
juntamente com o fator V ativado
e Ca++, denomina-se de
Complexo Protrombinase.
CASCATA DA COAGULAÇÃO

FIII
• Após a lesão vascular, o
fator tecidual (fator III) é
lançado e forma junto ao
COMPLEXO TENASE fator VII ativando um
EXTRÍNSECO
complexo (Complexo FT-
FVIIa) + Ca2+ – COMPLEXO
TENASE EXTRÍNSECO que por
sua vez ativa o fator X.
CASCATA DA COAGULAÇÃO

III
• Após a lesão vascular, o
COMPLEXO
fator tecidual (fator III) é
TENASE lançado e forma junto ao
EXTRÍNSECO fator VII ativado um
complexo (Complexo FT-
FVIIa) + Ca2+ – COMPLEXO
TENASE EXTRÍNSECO que por
sua vez ativa o fator X.

• O fator X ativado junto ao

fator V ativado formam o
Complexo protrombinase -
que irá ativar a
Protrombina em Trombina.
 CASCATA DA COAGULAÇÃO
III

Trombina ativa outros componentes

da coagulação entre eles os fatores
V e VII (que ativa o fator XI que por
sua vez ativa o fator IX).
Agregação plaquetar
Liga-se diretamente às plaquetas
induzindo a agregação plaquetar

Ativa fibrinólise.
 INICIAÇÃO

PROPAGAÇÃO

ATIVIDADE DA
TROMBINA
Regulação da coagulação
 As reações bioquímicas da coagulação do sangue
devem ser estritamente reguladas de modo a evitar
ativação excessiva do sistema, formação
inadequada de fibrina e oclusão vascular.

 A atividade das fatores da coagulação é regulada

por numerosas proteínas inibitórias que atuam como
anticoagulantes naturais.

 Inibidores fisiológicos da coagulação:

 TFPI (“tissue factor pathway inhibitor”)
 Proteína C (PC)
 Proteína S (PS)
 Anti-trombina (AT).
INIBIDORES
COAGULAÇÃO TFPI
(Anti-coagulantes)

ANTI-TROMBINA III

PROTEÍNA C e S

Tissue factor pathway inhibitor (or TFPI)

 Fibrinólise

PDF e
D-Dímeros

Produtos de
degradação
da fibrina

Plasminogénio
PLASMINA

Desintegração da fibrina em produtos solúveis, através da ação de enzimas.

O sistema fibrinolítico ou sistema plasminogénio/plasmina é composto por diversas
proteínas que regulam a geração de plasmina, uma enzima ativa produzida a partir de
uma pro-enzima inativa (plasminogénio) que tem por função degradar a fibrina e ativar
metaloproteinases de matriz extracelular.
 Fibrinólise
(pró-coagulante)

PDF e
ATIVADORES D-Dímeros
t-PA
u-PA

Produtos de
degradação
da fibrina

Plasminogénio
PLASMINA

São conhecidos dois ativadores fisiológicos do plasminogénio: o ativador do plasminogénio do

tipo tecidual (t-PA, “tissue-type plasminogen activator”) e o ativador do plasminogénio do tipo
uroquinase (u-PA, “urokinase-type plasminogen activator”).
Os dois ativadores têm alta especificidade de ligação com seu substrato (plasminogénio) e
promovem hidrólise de uma única ponte peptídica (Arg560-Val561) que resulta na formação de
uma serino-protease ativa, a plasmina
 Inibição
Fibrinólise

PAI-1 TAFI – Inibidor da

Inibidor do activador fibrinólise
do Plasminogénio ativado pela
Trombina

t-PA

Plasminogénio
PLASMINA

α2-ANTIPLASMINA
Células Endoteliais
Mecanismos não trombogénicos (anti-coagulantes)
 Cargas negativas na superfície

 Prostaciclinas (PGI-2)
Inibem a adesão plaquetar
 Ácido Nítrico

 Ativador tecidular do plasminogénio (t-PA)

 Promove lise do coágulo – “limpa” depósitos de fibrina
na superfície endotelial

 Trombomodulina
 Inativa fatores coagulantes por inibição da trombina

 ADPase
 Catalisa destruição do ADP – diminuindo a ativação
plaquetar
 Lesão vascular

Hemostase primária Hemostase secundária Fibrinólise

Vasoconstrição Ativação do sistema Ativação da fibrinólise

(imediata) procoagulante (minutos)

Adesão plaquetar Formação de fibrina

(segundos) (minutos) Lise do coágulo
(horas)
Agregação plaquetar Ativação do sistema
(minutos) inibidor
 Proteínas da hemóstase:
Locais de síntese
Coagulação Anti-coagulação Fibrinólise

Fatores II, VII, IX, X, XII, PK AT Plasminogénio

Fígado Fígado Fígado
Fatores I e XIII PC t-PA (ativador do
Fígado Fígado, Endotélio plasminogénio tecidular)
Fígado, Endotélio
Fatores V e VIII PS PAI-1 (Inibidor do ativador
Fígado, megacariócito Fígado, Endotélio do plasminogénio)
Fígado, Endotélio,
megacariócito
Factor de vW TFPI (Inibidor da via do fator α2-antiplasmina (Inibidor
Endotélio, megacariócito tecidular) da plasmina)
Fígado, Endotélio Fígado
Fator tecidual TAFI (Inibidor da fibrinolise
Endotélio, monócitos ativada pela trombina)
Fígado
 Fatores da coagulação
Fator Designação [plasmática] Semi-vida

I Fibrinogénio 2500 mg/dL 20h

II Protrombina 100 mg/dL 100h
III Fator tecidular (tromboplastina)
IV Iões Cálcio
V Fator instável, próacelerina 5-12 mg/L 25h
VII Fator estável, proconvertina 1 mg/L 5h
VIII Fator anti-hemofílico 7 mg/L 10h
IX Fator Christmas 4 mg/L 20h
X Fator Stuart-Prower 5 mg/L 65h
XI Anti-tromboplastina plasmática 5 mg/L 65h
XII Fator Hageman 29 mg/L 60h
XIII Fator estabilizante da fibrina
Fatores da coagulação
 Proenzimas
 Fator VII
 Fator IX
 Fator X
 Fator XI
 Protrombina (Fator II)

 Cofatores
 Fator tecidual
 Fator VIII
 Fator V

 Proteínas reguladoras
 Proteína C
 Proteína S
 Fatores da coagulação -
grupos

Grupo da fase de contato FXI, FXII, Précalicreína, KAMP

Grupo dependente de FII, FVII, FIX, FX

Vitamina K

Grupo do fibrinogénio Fibrinogénio, FV, FVIII, FXIII

(estabilizante da fibrina)
 Ativação dos fatores II, VII,
IX, X pela vitamina K
Origem da vitamina K
Vegetais verdes
Sintetizada pela flora intestinal

Essencial para a ativação de

FII, FVII, FIX, FX
Proteína C e S Atua como cofator da enzima
gamma-glutamil carboxilase que
adiciona um carboxil ao ácido
glutâmico residual dos fatores
 Coagulopatias
ANOMALIAS HEMORRÁGICAS

Coagulação deficiente (falta de fatores)

Fibrinólise alterada (hiperfibrinólise)

Fatores procoagulantes

Fatores anticoagulantes

Anti-coágulo
Hemorragia
 Coagulopatias
ANOMALIAS TROMBÓTICAS

Hipercoagulabilidade

Fatores anticoagulantes

Fatores procoagulantes

Coágulo
Trombose
COAGULAÇÃO

Vasos sanguíneos

Plasma
(proteínas
plasmáticas)

Plaquetas
COAGULAÇÃO

Vasos sanguíneos

Plasma
(proteínas
plasmátic
as)

Plaquetas
Estrutura e função
plaquetar
 Estrutura e função plaquetar
 Mecanismos de função plaquetar
 Adesão
 Ativação
 Agregação

 Patologias congénitas e adquiridas

 Metodologias de estudo – screening e diagnóstico

 PFA-100
 Agregação plaquetar
 Citometria de fluxo
Plaquetas

Megacariócitos – células gigantes com Plaqueta – Formadas na MO por

múltiplas cópias de DNA no núcleo fragmentação de megacariócitos

Discóides e anucleadas

Pequenas (1-3µm; 7 fl)

Abundantes: 150-450 x109/L

Vida média – 10 dias

Anatomia das plaquetas
Área da submembrana
Glicocalix Sistema canicular aberto

Membrana trilaminar
Mitocôndria
Microtubos
Sistema tubular denso

Grânulos
densos
Glicogénio

Grânulos Alfa Grânulos Densos

Albumina ADP
Fibrinogénio ATP
FvW Serotonina
FVIII Ca2+
Fibronectina Mg2+
Fator plaquetar 4
β-tromboglobina
 Anatomia das plaquetas - grânulos

Grânulos de secreção: grânulos alfa, grânulos densos

Quando ativadas, mudam de forma, alteram as

propriedades da sua superfície e libertam o conteúdo dos
grânulos através do sistema canicular aberto
 Porque respondem as plaquetas tão
rapidamente a lesões vasculares?

Circulam inativas, contudo, após uma lesão vascular, são

ativadas de um modo “explosivo”, o que é facilitado por:

Elevado número de recetores

Número elevado
Ricas em sinais proteicos
de plaquetas
circulantes
Mecanismos de feedback
positivo
 Hemostase primária
As plaquetas promovem a hemóstase por 5 mecanismos
interligados:

1) ADESÃO aos locais de lesão vascular

2) ATIVAÇÃO e SECREÇÃO dos conteúdos granulares

3) AGREGAÇÃO ligação plaqueta a plaqueta para formar

um trombo plaquetar

4) ATIVIDADE COAGULANTE fornecendo a superfície da

membrana fosfolipídica para ativação dos complexos
da coagulação

5) RETRAÇÃO DO COÁGULO ativação actina-miosina

 AGREGAÇÃO FUNÇÃO
ADESÃO PLAQUETAR

GPIa/IIa SECREÇÃO
Colagénio GPIV
GPVI

Fibronectina α5β1
ATIVIDADE COAGULANTE
 Glicoproteínas de membrana da plaqueta
Fibrinogénio
(Agregação)

GPIIb/IIIa
F vW (Adesão)
GPIa/IIa
GPIV
GPIb/IX/V GPVI
Colagénio (Adesão)

Fibronectina

α5β1
Numerosas glicoproteínas na superfície exterior da membrana plasmática associadas
a interações ou funções específicas:
- GPIb liga FvW e medeia a adesão plaquetar ao subendotélio
- O complexo GPIIb/IIIa liga ao fibrinogénio e medeia a agregação
Adesão e ativação plaquetar
AGREGAÇÃO
ADESÃO

GPIa/IIa SECREÇÃO
Colagénio GPIV
GPVI

Fibronectina α5β1
ATIVIDADE COAGULANTE
 Adesão e ativação plaquetar

ADESÃO: FvW liga-se ao colagénio subendotelial

Capta as plaquetas que

deslizam sobre o endotélio
exposto – ligação à GPIb

Associação não estável –

devido à elevada taxa de
dissociação

Integrinas (proteínas de
membrana) na
conformação inativa.
 Adesão e ativação plaquetar

ATIVAÇÃO: Interação com o FvW permite:

Plaquetas ligarem
diretamente ao recetor do
colagénio, GPVI – Ativação
das integrinas

SECREÇÃO: TXA2 + ADP

ESTIMULA A ATIVAÇÃO DE
OUTRAS PLAQUETAS
 AGREGAÇÃO
ADESÃO ATIVAÇÃO
PLAQUETAR

ADESÃO
ESTÁVEL
GPIa/IIa SECREÇÃO
Colagénio GPIV
GPVI

Fibronectina α5β1
ATIVIDADE COAGULANTE
 Agregação/ estabilização do coágulo

AGREGAÇÃO: Depende de GPIIb/IIIa que liga o

fibrinogénio e o FvW
Agregação/ estabilização do coágulo

Estabilização do coágulo

Clivagem do fibrinogénio a fibrina pela trombina –

Estabilização do trombo

Retração do coágulo pela ativação da actina-miosina

 Resumo
3-5 segundos

10 segundos

Estabilização do coágulo
5 minutos
Anomalias da função plaquetar

Anomalias hereditárias (raras)

Anomalias adquiridas
 Anomalias hereditárias
Anomalias associadas com trombocitopenia Disfunção Plaquetar
(anomalias quantitativas) (anomalias qualitativas)

Autossómicas recessivas Autossómicas recessivas

Síndrome de Bernard Soulier Síndrome de Bernard Soulier
Trombocitopénia amegacariocítica Trombastenia de Glanzmann
Anomalia Storage Pool
Síndrome plaqueta cinzenta
Trombocitopénia com ausência radius Síndrome plaqueta cinzenta
Deficiência da cicloxigenase
Deficiência da tromboxano sintetase
Autossómica dominante Síndrome de Scott´s
Anomalia May-Hegglin
Anomalia Plaquetar Quebec
Síndrome Epstein
Síndrome Fletcher
Síndrome Sebastian
Síndrome Plaqueta Montreal
Macrotrombocitopénia
Ligada ao cromossoma X
Síndrome Wiskott-Aldrich
Trombocitopénia ligada ao Cr X
Mutação GATA-1
 Afibrinogenémia
AGREGAÇÃO
Trombastenia de Glanzman
ADESÃO

Doença de vW
SECREÇÃO
Síndrome de Bernard Soulier
Síndrome Storage Pool
Colagénio
Síntese do TXA
Diminuição dos sinais de
transdução

Fibronectina α5β1
ATIVIDADE COAGULANTE

Síndrome de Scott´s
 Anomalias hereditárias
1. DÉFICES NA INTERAÇÃO PLAQUETA/ PAREDE VASO
Doença de Von Willebrand (Def FvW)
Síndrome de Bernard Soulier
2. DÉFICES INTERAÇÃO PLAQUETA-PLAQUETA
Trombastenia de Glanzmann (Def GPIIb/IIIa)
Afibrinogenémia (Def de Fibrinogénio)
3. DÉFICES NOS GRÂNULOS PLAQUETARES
Storage Pool Disease (Def grânulos α, grânulos δ, grânulos αδ (plaqueta cinzenta)
Anomalia Quebec
4. DÉFICES DE SECREÇÃO E SINAIS DE TRANSDUÇÃO
Défice de recetores – ADP, colagénio, epinefrina, TXA2
Défice na ativação da proteína G
Défice no metabolismo de fosfoinositideos – fosfolipase C e fosfolipase A2
Défice de mobilização do Ca2+
Défice de fosforilação da plekstrina
Anomalias da via do ácido araquidónico e síntese de tromboxano
5. DÉFICES NA FUNÇÃO PRÓ-COAGULANTE DA PLAQUETA
Síndrome de Scott´s
6. DÉFICES NOS COMPONENTES DO CITOESQUELETO
Síndrome de Wiskott-Aldrich
Anomalias adquiriras

Fármacos

Urémia
Cirrose/ Hepatite crónica
Anomalias de proteínas plasmáticas
Bypass cardiopulmonar

Leucemias e Neoplasias Mielodisplásicas (NMD)

Neoplasias Mieloproliferativas (NMP)
 Inibição de PDF
Paraproteínas
Farmacos (anti-agregantes plaquetares)
ADESÃO
AGREGAÇÃO
Urémia (acumulação de Oxido
Nitrico NO)
Cirrose + Insuficiência
hepática (Def de GP Ib SECREÇÃO
adquirida)

NMP
Colagénio Bypass cardiopulmonar
(plaquetas ativadas e desgranuladas)
Aspirina + AINE´s
(inibição do TXA2)

Fibronectina α5β1
ATIVIDADE COAGULANTE
 Fármacos que afetam a função plaquetar
Analgésicos (aspirina, AINE´s) que afetam a síntese de
prostaglandinas.

Cafeína, teofilina, dipiramidol, drogas que aumente o cAMP.

Antimicrobianos (penicilinas, cefalosporinas, nitrofurantoína)

Agentes cardiovasculares (quinidina, diuréticos, vasodilatadores)

Psicotrópicos (tricíclicos, fenotiazinas), anestésicos

Antidepressivos (fluoxetina)

Agentes quimioterapeuticos

Miscelânea de agentes (dextrano, clorofibratos, vitamina E,

ETOH, cebolas, alhos, ginger e óleo de peixe)
ADESÃO
AGREGAÇÃO

Reopro
GPIIb/IIIa Integrilina
Dipiramidol Agrastat
cAMP
SECREÇÃO

α5β1
ATIVIDADE COAGULANTE
Estudo da função plaquetar
Estudo da função plaquetar
PFA-100
PFA-100

Sensível:

Doença de Von Willebrand (cerca de 80%)

Défices de recetores plaquetares:

Síndrome de Bernard Soulier
Trombastenia de Glanzman

No entanto não é específico:

Não distingue a doença de von Willebrand de défices de

fatores plaquetares

TESTE DE SCREENING
Testes diferenciados
Testes de agregação plaquetar
(método Born e O´Brien)
Transmitância para estudos de agregação com agonistas
Testes diferenciados
Testes de agregação plaquetar
(método Born e O´Brien)
Testes diferenciados
Citometria de fluxo
Algoritmo de diagnóstico