Aula 5: Proteínas – Estudo

Prof Med Vet Bruna Martins Mota

 ESTUDO DAS PROTEÍNAS
▪ Podem ser separadas e purificadas

Ptn de tecido
ou célula Rompimento
microbiana

pH, Tº, [ ] de sais

Diálise Fracionamento Centrifugação
ESTUDO DAS PROTEÍNAS
 ESTUDO DAS PROTEÍNAS

• Cromatografia em coluna
• Cromatografia de troca
iônica
• Cromatografia de exclusão
por tamanho
• Cromatografia por afinidade
• Cromatografia líquida de alta
eficiência
ESTUDO DAS PROTEÍNAS

• Migração de proteínas Eletroforese

carregadas em campo
elétrico
• Vizualização e separação de
ptn => nº de ptn na mistura
ou grau de pureza.
• Vizualização: azul de
cromassie
ESTUDO DAS PROTEÍNAS
ESTUDO DAS PROTEÍNAS

Focalização elétrica: pI da proteína

Eletroforese bidimensional: separa
uma mistura complexa de proteínas
-Massa =, mas pI ≠
-Massa ≠, mas pI =
Enzimas: quantidade determinada
pela velocidade de conversão do
substrato
 ESTRUTURA
▪ Primária: ligações peptídicas e dissulfeto entre resíduos de aa
(SEQUENCIAMENTO)

▪ Secundária: arranjos de aa estáveis – padrões estruturais recorrentes

▪ Terciária: Dobramento tridimensional de um polipeptídeo

▪ Quaternária: 2 ou + cadeias polipeptídicas na sua cadeia espacial

 ESTRUTURA
1ª Lig. 2ª Lig. De H
Peptídicas e
dissulfeto

*Determina
como a proteína
se enovela na
estrutura
tridimensional –
função.
 ESTRUTURA
▪ Doenças = mudam 1 resíduo; deleção de grande parte da cadeia polipeptídica
▪ Polimórficas = sequência de aa variáveis na população
- Sequência crítica = Não pode mudar
▪ Sequenciamento de pequenos peptídeos

+ Nº de
Aa
1-flúor-2,4-dinit Hidrólise em aa polipeptídeos
aminoterminais
robenzeno em 1 proteína
Anemia falciforme:
- Substituição da glutamina
(ác. Glutâmico) por valina

ROCHA, J. R. L. Avanços das políticas públicas para a anemia falciforme no Brasil. Recife, 2015. Disponível em:
<https://www.ccecursos.com.br/img/resumos/hematologia/monografia-anemia-falciforme.pdf>
 ESTRUTURA
▪ Sequenciamento de grandes proteínas
- Clivagem em locais específicos (mais de 1 vez)
- Sobreposição dos fragmentos
- Eletroforese

▪ Síntese (até 100 aa):

- Purificação a partir de tecidos, engenharia genética, síntese química direta
- Objetivo: Agentes farmacológicos; estudo de estrutura e função das proteínas