AULA 2

MIGRAÇÃO DIFERENCIAL:
Migração diferencial = diferentes velocidades médias que as moléculas
dos solutos migram através da coluna.

Sem taxas diferentes de migração diferencial, ocorre sobreposição ou

coeluição de bandas cromatográficas!

2
 AULA 2

O objetivo final de todo método cromatográfico é ter resolução entre os picos.

Sem resolução não conseguimos quantificar corretamente.

RESOLUÇÃO
Mede a qualidade da separação entre dois picos;
Resolução de linha de base é alcançada com valores Rs ≥ 1,5, ou seja, é
possível diferenciar o fim de um pico e o início de outro da linha de base do
cromatograma;

𝑡2 −𝑡1 𝑡2 −𝑡1
𝑅𝑠 = 2 ou 𝑅𝑠 = 1.18
𝑊1 +𝑊2 𝑊1/2(1) +𝑊1/2(2)

A equação abaixo é uma APROXIMAÇÃO e relaciona os parâmetros

cromatográficos k, α e N com a resolução;

1 𝑘 𝛼−1
𝑅𝑠 = 𝑁
4 1+𝑘 𝛼

3
 AULA 2

Rs = 0,5

Rs = 1,0

Rs = 1,5

Rs = 2,0

4
 AULA 2

FATOR DE RETENÇÃO (k)

O k é o fator de retenção e ele nos ajuda a interpretar se os tempos de
retenção estão bons ou ruins.
O k pode ser expresso em função do tempo de retenção:

𝑡𝑟 − 𝑡0
𝑘=
𝑡0
tr é o tempo de retenção de cada pico;
t0 é o tempo morto da coluna;

Valor ideal de k: 1 ≤ k ≤ 10
Exemplo do efeito da %B nos valores de k.

Condições: Coluna 150 x 4,6 mm, 5 µm; mentanol/água; 2,0 mL/min; temp.
ambiente.

5
 AULA 2

SELETIVIDADE (α):
Mede a separação relativa entre duas bandas cromatográficas.
Leva em consideração apenas os tempos de retenção.
É o parâmetro mais importante para melhorar (ou piorar) a
separação cromatográfica!

𝑘2 𝑡𝑟2 − 𝑡0
𝛼= =
𝑘1 𝑡𝑟1 − 𝑡0

NÚMERO DE PRATOS (N):

Utilizado para avaliar a eficiência da coluna.
Quanto maior, melhor... Em HPLC fica entre 10000 e 20000.
2
𝑡𝑟 2 𝑡𝑟
𝑁 = 16 ou 𝑁 = 5,54
𝑊𝑏 𝑊1/2