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UNIVERSIDADE PÚNGUÉ
Faculdade de Ciências Agrárias e Biológicas

Meios e Técnicas de Cultura de Microrganismos

Curso de Licenciatura em ensino de Biologia com Habilidade a Química

Tálcida Judite Suite

Chimoio
Março 2024
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Tálcida Judite Suite

Meios e Técnicas de Cultura de Microrganismos

Trabalho sobre Meios e Técnicas de

Cultura de Microrganismos á ser
apresentado na Faculdade de Ciências
Agrárias e Biológicas da Universidade
Púngué, para fins de avaliação. Docente։
Dr. Milagre Phele

Chimoio
Março 2024
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Índice
1.Introdução................................................................................................................................4
2.Objectivos................................................................................................................................5

2.1.Geral:.....................................................................................................................................5

2.2.Específicos:...........................................................................................................................5

3.1.Meios de Cultura de Microrganismos...................................................................................6

3.2.Técnicas de Cultura de Microrganismos...............................................................................6

4. Classificação de meios de cultura...........................................................................................6

4.1.Quanto à consistência...........................................................................................................6

4.2.Quanto à função....................................................................................................................7

4.3.Quanto à natureza.................................................................................................................8

5. Exigências nutricionais dos microrganismos..........................................................................8

6. Técnicas básicas de cultura e de semeadura...........................................................................9

7.Métodos de detecção/quantificação de microrganismos........................................................10

7.1.Métodos de detecção de microrganismos...........................................................................10

7.2.Métodos de quantificação de microrganismos....................................................................10

7.2.1.Contagem em placas (Unidades Formadoras de Colónias – UFC)..................................10

7.2.2.Vantagens.........................................................................................................................10

7.2.3.Desvantagens...................................................................................................................11

8. Conclusão..............................................................................................................................12

9. Bibliografia...........................................................................................................................13
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1. Introdução
O presente trabalho é da cadeira de Microbiologia, elaborado pela estudante do curso de
Biologia, sob indicação do respectivo docente da cadeira. O mesmo descreve aspectos
relacionados com Meios e Técnicas de Cultura de Microrganismos; dizer que os meios de
cultura são preparações químicas feitas em laboratórios que fornecem nutrientes para o
crescimento e desenvolvimento de microrganismos fora do seu habitat natural, como por
exemplo os fungos e as bactérias.

Por sua vez, cultura de microrganismos é considerada uma cultura pura quando apenas um
tipo de organismo está presente, já uma cultura mista é quando populações de organismos
diferentes estão presentes.

Ora, o trabalho está dividido em três partes nomeadamente a parte introdutória e de definição
de objectivos, a abordagem dos tópicos com base em algumas bibliografias e a parte
conclusiva bem como das respectivas referências bibliográficas.
Espera-se com o mesmo alcançar os objectivos traçados e, aprimorar as competências na
elaboração de vários outros trabalhos do género.
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2.Objectivos

2.1.Geral

 Estudar Meios e Técnicas de Cultura de Microrganismos.

2.2.Específicos

 Desenvolver as técnicas básicas de semeadura;

 Classificar e descrever os meios de cultura;
 Descrever os Métodos de detenção e quantificação de microrganismos;
 Enumerar as vantagens e desvantagens Métodos de quantificação de microrganismos.
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3.Meios e Técnicas de Cultura de Microrganismos

3.1.Meios de Cultura de Microrganismos

Os meios de cultura de Microrganismos - são preparações químicas feitas em laboratórios que
fornecem nutrientes para o crescimento e desenvolvimento de microrganismos fora do seu
habitat natural, como por exemplo os fungos e as bactérias.

Cada tipo de meio de cultura é indicado para uma determinada função e um microrganismo
específicos: alguns têm a função de nutrir e estimular o crescimento, outros inibem
determinado microrganismo e conseguem indicar seu potencial hidrogeniónico. Existe uma
enorme variedade destes meios e eles são usados em análises laboratoriais e estudos
científicos em diversas áreas, principalmente em alimentos, água, cosméticos e microbiologia
clínica.

3.2.Técnicas de Cultura de Microrganismos

A escolha da técnica para o cultivo de microrganismos varia de acordo com o tipo de meio de
cultura e a finalidade do cultivo, porém algumas regras devem ser seguidas nas inoculações:

 A agulha e alça de níquel-cromo (também chamada de agulha e alça de platina) devem ser
esterilizadas por flambagem antes e após qualquer cultivo. Tome cuidado de esfriá-las
antes da colecta.
 Os recipientes devem sempre ser abertos próximos à chama do bico de Bunsen.
 Deve-se evitar ao máximo que as tampas dos tubos e placas fiquem sob a bancada durante
o cultivo.
 Para garantir uma semeadura correta, deve-se evitar ao máximo perfurar ou rasgar o Ágar,
pois poderá ocorrer acúmulo de bactérias neste sector do meio além de alterar as
condições de crescimento bacteriano.

4. Classificação de meios de cultura

4.1.Quanto à consistência.
 Meio líquido: sem agente solidificante, apresentando-se como caldo. O meio é distribuído
em tubos de ensaio, erlenmeyers, balão; Mais utilizado para o crescimento massal ou
provas bioquímicas, em fermentação industrial etc.
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 Meio semi-sólido: adiciona-se uma pequena quantidade de agente solidificante (0,5 a 1%

de ágar). Apresenta uma consistência intermediária, sendo distribuído em tubos de ensaio.
Utilizado para o teste de motilidade, como exemplo.
 Meio sólido: contém maior quantidade de agente solidificante (1,5 a 2,0%). Apresenta
uma consistência sólida e pode ser distribuído tanto em tubos de ensaio (meio inclinado),
quanto em placas de Petri. Utilizado para diversas finalidades, sendo o meio indicado para
observação da morfologia colonial.

A substância solidificante utilizada nos meios é a ágar, extraída de algas vermelhas (Gelidium
corneum – alga marinha japonesa) a 80ºC com ácido sulfúrico diluído (H2SO4). Esse é o
agente solidificante mais usado, sendo considerado também o melhor, porque se funde à
temperatura de fervura e solidifica a 42-45ºC. Portanto, deve ser distribuído entre 50-60oC,
antes de solidificar. O ágar é ainda um excelente agente gelatinizador porque não é degradado
por microrganismos, sendo um polímero composto principalmente por D-galactose, 3,6-
anidro-Lgalactose e ácido D-glucurônico.

4.2.Quanto à função
 Meios simples - meios de cultura, nos quais os componentes possuem todas as fontes de
nutrientes requeridas pelos microrganismos mais comuns e menos exigentes
nutricionalmente. Ex: ágar nutriente ou caldo nutritivo.
 Meios selectivos - promovem o crescimento de um determinado microrganismo em
detrimento de outros, devido à presença de substâncias adicionadas ao meio de cultura ou
a condição de cultivo. Alguns meios selectivos possuem corantes na sua composição,
feniletanol e antibióticos, que inibem determinados grupos de organismos. Ex: ágar
MacConkey (contém sais biliares e cristal violeta para inibir o crescimento de bactérias
Gram-positivas, permitindo, portanto, o crescimento de bactérias Gram-negativas); o meio
de Chapman ou ágar manitol possui alta concentração de cloreto de sódio (NaCl 7,5%),
para selecionar bactérias halófitas (vivem em alta concentração de sal), adequado para o
isolamento de Staphylococcus; o Meio Sabouraud muito utilizado no cultivo de fungos,
devido sua composição desfavorável para bactérias, em função do pH e concentração de
açúcares; meio batata-dextrose-ágar (BDA) acidificado que é seletivo apenas para fungos
em função do pH.
 Meios enriquecidos - meios convencionais enriquecidos com um ou mais componentes
químicos, que favoreça o crescimento de determinados microrganismos numa população
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mista. Meios mais indicados para microrganismos fastidiosos. Ex: ágar-sangue e ágar
chocolate, ambos utilizados no crescimento de Streptococcus, Neisseria e Haemophilus.
 Meios diferenciais ou indicadores - são utilizados para diferenciar microrganismos entre
os vários tipos que crescem numa mesma placa de Petri. Ex: meio ágar MacConkey, além
de selecionar o grupo de bactérias Gram-negativas como visto por ser selectivo, permite
uma diferenciação entre as mesmas pela produção de ácido, baseada na utilização da
lactose presente no meio. Bactérias que utilizam à lactose acidificam o meio e as colónias
ficam na cor vermelha ou rosa, enquanto as demais não adquirem essa coloração. Meio de
Chapman também é um meio diferenciador, pois contém manitol. Quando a bactéria
utiliza esse polissacarídeo como fonte de C o meio, originalmente vermelho, muda de cor
para amarelo. Entre as espécies de estafilococos apenas S. aureus fermenta manitol.
 Meios de transporte - estes meios conservam as características da amostra desde a
colecta ao semeio final. Este meio é muito utilizado para bactérias sensíveis ao
deslocamento, evitando, muitas vezes a inactivação da bactéria, em ambiente longe do
laboratório. Ex. meio Stuart.
 Meio de manutenção - utilizado na manutenção de amostras de bactérias. São meios
pobres em nutrientes, nos quais as bactérias não podem crescer muito, para evitar a
formação de compostos tóxicos.

4.3.Quanto à natureza
 Naturais - são preparados com base em produtos naturais, como: peptona, extracto de
carne, soro, leite, folhas, frutos etc. Neste, a quantidade exacta de cada nutriente não é
especificada.
 Sintéticos - são quimicamente definidos, onde a quantidade exacta de cada nutriente ou
elemento químico é conhecido, permitindo saber se um elemento em particular é essencial
para o crescimento de determinado microrganismo (fator de crescimento).
 Mistos ou semi-sintético - meios preparados com a mistura dos naturais com os
sintéticos.

5. Exigências nutricionais dos microrganismos

Todos os organismos vivos requerem nutrientes para seu crescimento e reprodução. Essas
substâncias químicas podem ser orgânicas ou inorgânicas e são encontradas no ambiente em
várias formas. De todos os organismos vivos, os microrganismos são os mais versáteis e
diversificados em suas exigências nutricionais. Alguns podem crescer com algumas poucas
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substâncias inorgânicas como sua única exigência nutricional, enquanto, outros se

assemelham aos organismos superiores na sua necessidade de compostos orgânicos
complexos. Contudo, todos os organismos vivos compartilham algumas necessidades
nutricionais em comum, tais como a necessidade de carbono, nitrogênio, enxofre, fósforo,
vitaminas e água. A água é importante para os microrganismos, porque a maioria deles pode
absorver os nutrientes somente quando as substâncias químicas estão dissolvidas nela. Estas
exigências químicas (fatores nutricionais), juntamente com as condições físicas (pH,
temperatura, atmosfera, pressão osmótica e pressão hidrostática) são particulares para cada
microrganismo e, devem ser fornecidas aos organismos para que ocorra seu desenvolvimento.

6. Técnicas básicas de cultura e de semeadura

As técnicas de semeadura - são o método pelo qual se transfere inóculos bacterianos (repique)
de um meio de cultura ou material a ser analisado (ex.: secreções, alimentos etc.) para um
outro meio de cultura.

Para a aplicação de qualquer

uma das
diferentes técnicas de
semeaduras é
essencial a utilização das
manobras
antissépticas. As principais
técnicas de
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semeadura são: meio ágar

inclinado em
estria sinuosa, transferência
de meio
líquido para meio semi-
sólido em
picada, transferência do
meio líquido
para o líquido e a técnica
de estrias
múltiplas em meio sólido
(placa de
petri, técnica do esgotamento)
Para a aplicação de qualquer
uma das
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diferentes técnicas de
semeaduras é
essencial a utilização das
manobras
antissépticas. As principais
técnicas de
semeadura são: meio ágar
inclinado em
estria sinuosa, transferência
de meio
líquido para meio semi-
sólido em
picada, transferência do
meio líquido
para o líquido e a técnica
de estrias
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múltiplas em meio sólido

(placa de
petri, técnica do esgotamento)
A semeadura microbiológica - é um procedimento, mediante o qual se deposita (semeia-se),
assepticamente, um microrganismo em um meio de cultura. Neste meio de cultura, os
microrganismos multiplicar-se-ão produzindo milhões de descendentes que formarão
unidades macroscopicamente visíveis, denominadas colônias.

O material que contém os microrganismos que serão semeados recebe o nome de inóculo e
este procedimento é realizado utilizando-se uma alça de cultivo ou uma pipeta. Para realizar a
semeadura, deve-se considerar o estado físico do meio de cultura.

As semeaduras podem ser realizadas de:

 Meio sólido para meio líquido;

 Meio sólido para meio sólido;
 Meio líquido para meio líquido;
 Meio líquido para meio sólido.

Cultivo puro - é aquele que contém somente um tipo de microrganismo e que se originou a
partir de uma única célula.

Semeadura por estria ou disseminação (esgotamento) - consiste em passar a alça de cultivo

contendo o inóculo sobre a superfície de uma placa de Petri, à qual contém o meio de cultura
adequado para a bactéria que se deseja isolar. Ao passar a alça, fazendo estrias separadas
umas das outras, objetiva-se que o inóculo seja diluído progressivamente de forma tal que, ao
final das estrias, obtenha-se colônias isoladas.

Semeadura por diluição - a uma mistura de microrganismos faz-se uma diluição seriada e,
de cada diluição, realiza-se uma semeadura em placa. Apresenta uma grande desvantagem,
que é o isolamento do microrganismo predominante na amostra.

Outros métodos de obtenção de culturas puras são:

 Semeadura por difusão em ágar fundido;

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 Incubação em temperaturas elevadas (≥ 42°C);

 Adição de substâncias químicas inibitórias (ex. antibióticos);
 Cultivos por enriquecimento.

7.Métodos de detecção/quantificação de microrganismos

7.1.Métodos de detecção de microrganismos

Para o estudo dos microorganismos, deve-se obter uma cultura pura a partir de uma cultura
mista. Para isso, é necessário o isolamento dos microorganismos que é obtido através da
semeadura em meios de cultura sólidos em placas de petri que permitem a formação de
colónias. Os meios de cultura devem ser estéreis, o que deve ser obtido através da técnica
asséptica de inoculação.

7.2.Métodos de quantificação de microrganismos

7.2.1.Contagem em placas (Unidades Formadoras de Colónias – UFC)

 Mede o número de microrganismos viáveis, que são contados em Unidade Formadora de
Colónia (UFC).
 São necessárias 24 horas para que as colónias visíveis sejam formadas.

7.2.2.Vantagens
 Somente células viáveis são contadas;
 Permite o isolamento das colónias, que podem ser subcultivadas em culturas puras, as
quais podem ser facilmente estudadas e identificadas.

7.2.3.Desvantagens
 Não existe um meio que permita o crescimento de todos os microrganismos; É necessária
a incubação apropriada para permitir o desenvolvimento das colónias;
 Relativamente trabalhoso;
 A necessidade de muita manipulação pode originar erros nas contagens devido a erros de
diluição e/ou plaqueamento.
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8. Conclusão

Finda a elaboração do trabalho dizer que, a aplicação dos meios de cultura em um estudo,
auxiliam na identificação dos microrganismos que podem provocar infecções, alergias e, ate
mesmo, a contaminação da água ou alimentos; por sua vez, Os meios de cultura são insumos
preparados em laboratórios que fornecem os nutrientes para o crescimento e desenvolvimento
de microrganismos, como bactérias e fungos, isto é fora do seu habitat natural.
De um modo geral, o trabalho permitiu, conhecer os contornos históricos sobre a
Microbiologia e da visão ampla sobre importância; ramos da microbiologia e, espera-se que
os leitores façam um uso proveitoso deste trabalho que foi carinhosamente produzido.
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9. Bibliografia
 Madigan, M.T; Martinko, J.M.; Dunlap, P.V.; Clark, D.P (2009) Brock Biology of
microorganisms. 12ed. Tortora, G.J; Funke, B.R; Case, C.L (2005) Microbiologia. 8ed.
 Estrela, Carlos. Metodologia Científica: Ciência, Ensino, Pesquisa (Página 195 a 221).
 JAY, J. M. Microbiologia de alimentos. São Paulo: Artmed, 2005.
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