• Não se integram ao DNA das células hospedeiras;
• Não ativam proto-oncogenes;
TERAPIA
GÊNICA
by Luma 루마
• A terapia genética é um campo da medicina que
envolve o uso de técnicas para modificar o
material genético de uma pessoa com o objetivo
de tratar ou prevenir doenças;
• A ideia central por trás da terapia genética é
corrigir ou substituir genes defeituosos ou
ausentes que estão causando uma condição
médica específica;;
• Mais de 2.000 protocolos de terapia gênica
envolvendo mais de 100 genes diferentes -
aprovados em testes experimentais;
Terapia Gênica de Substituição
•Técnicas envolvem a substituição de um produto
gênico ausente inserindo-se um gene normal em
células somáticas;
•Técnicas para introduzir genes em células –
vetores virais.
Vetores Retrovirais
• Os retrovírus podem inserir cópias de seus
genomas nos núcleos de células hospedeiras após
a transcrição reversa de seu RNA viral em DNA -
TRANSDUÇÃO.
•Suas vantagens:integração estável e eficiente
ao genoma, podem transduzir apenas células que
estão em divisão;
•Desvantagens: retrovírus alocar-se próximo a
um proto-oncogene - ativando-o, maioria dos
retrovírus entra no núcleo apenas durante a divisão
celular (carioteca desorganizada), ineficaz em
células de divisão lenta (neurônios).
Vetores Adenovirais
•Transduz células que não estão em divisão;
• Não perturbam o genoma de qualquer forma;
• Expressão gênica transitória – são inativados
(pode requerer a readministração do vetor);
• O vetor provoca uma resposta imune (parte do
genoma do adenovírus é removida)
•Resposta aumenta ou estimula outra resposta
imune (readministração);
(Adenovírus do tipo “gutless” em que quase todo o
genoma viral é removido)
Vírus adenoassociados (VAAs)- Mais popular
•O tipo de parvovirus (DNA)- requer um
adenovírus para sua replicação normal;
•O transduz células que não estão em divisão;
•O produzem menos resposta imune do que os
adenovírus;
•O pouco efeito patogênico;
•Mantém expressão terapêutica prolongada
(meses a anos), DNA com apenas cerca de 4,5 kb
(inserção em duas partes - produtos de mRNA
podem se reunir);
Vetores Lentivirais
•Retrovírus de RNA complexos,podem transduzir
células que não estão em divisão (poros na
membrana nuclear;
•Podem se integrar com estabilidade ao genoma;
•Podem aceitar inserções maiores que 8 kb;
(pesquisas em desenvolvimento)
● Vetores Não Virais
•DNA “nu” (puro) ocasionalmente entra na célula,
escapa da degradação e codifica proteínas
temporariamente;
•Cromossomos humanos artificiais - centrômeros e
telômeros funcionais, devem ser capazes de se
integrar e se replicar nos núcleos de células
humanas (inserções grandes);
(não apresentam a mesma eficiência
de transferência dos vetores virais)
● Lipossomos
•Lipossomo - micro vesícula de gordura, pode
aceitar grandes inserções de DNA;
•Lipossomos às vezes se fundem com as células,
permitindo que o DNA inserido entre nas
mesmas;
•Não desencadeia resposta imune;
↪Desafios:
•Menos eficiência em transferência que os vírus
• Maioria degradada no citoplasma e a maioria dos
que
•Não são degradados é incapaz de entrar no
núcleo.
antes de alcançar o alvo;
•Oligonucleotídeo antisense pode não ser capaz de
se ligar à sua sequência complementar;
↪Explicações Experimentais
•Bloqueio da expressão do oncogene KRAS em
células tumorais pancreáticas e colorretais.
•Distrofia de Duchenne→ induzir que o éxon da
DMD alterado seja pulado durante a tradução do
mRNA + inserir uma cópia corrigida dentro das
células musculares.

Terapia com Ribozimas

Técnicas de Bloqueio de Genes
Podem reverter os efeitos de mutações
negativas dominantes ou de ganho de função.
-moléculas antisense
-ribozimas - clivadoras de RNA
-RNA de interferência

Desafios da Terapia Gênica Viral

•Ribozimas moléculas enzimáticas de RNA, clivar
• Expressão em baixo nível e transitória → mRNA em sequências específicas →com mutação;
incorporação;
•Teste → reverte expressão aumentada do
• Dificuldades em alcançar ou especificar um receptor tipo 2 do fator de crescimento
tecido-alvo → vetores modificados; epidérmico - tumores de mama;
(Alguns tipos de terapia, a resposta imune contra
um tumor ou gerar novos vasos sanguíneos é Interferência do RNA
suficiente)
• Necessidade de regulação precisa da atividade
•RNA de interferência (RNAi);
gênica;
•Síntese de RNAi (correspondem a uma sequência
• Potencial para mutagênese insercional → mutação
de DNA causadora de doença) pode ser induzida
por inserção, evento raro, mas, observado em
a destruir o mRNA produzido pela sequência
pacientes;
mutada.

Terapia Antisense

↪Desafios:
•Degradação da molécula de RNA antes que ela
alcance seu alvo (inserção de moléculas de RNAi
em vetores lentivirais e virais adenoassociados);
*RNAi demonstrou bloquear transcritos do
gene da fusão BCR-ABL -leucemia mieloide crônica
•Oligonucleotídeo - sequência de DNA é
(testada – asma; hepatite C; doença de Huntington);
complementar à sequência do RNAm alvo
(mutação);
•Oligonucleotídeo antisense se liga ao mRNA alvo,
evitando a tradução;
↪Desafios:
•Oligonucleotídeos antisense são degradados