Exame Micológico

Exames Micologicos
Vários materiais podem ser colectados para esse exame , como
escamas , pelos , unhas, secreção, pus, crostas , grãos , espécime
de biopsia , liquor, urina e escarro.
É útil no diagnostico das micoses superficiais , cutâneas e
subcutâneas. Em algumas situações pode-se estabelecer o
diagnostico de micoses sistémicas,como a detecçao de
Cryptococcus neoformans no liquor e de paracoccidioides
brasiliensis no escarro.
Exames Micologicos
O material colectado pode ser processado de varias
maneiras : a fresco, em solução fisiológico, clareado
com KOH/DMSO, corado com nanquim, gram,
Leishman, entre outras.
Técnicas Laboratoriais Utilizadas em Micologia Médica

Várias técnicas são utilizadas para estabelecer ou confirmar

o diagnóstico de uma infecção fúngica. A interpretação
correcta dos resultados laboratoriais depende não só de um
profissional de laboratório experiente como também da
qualidade da colecta e processamento do material
inadequadamente colectado , estocada e processado.
Técnicas Laboratoriais Utilizadas em Micologia Médica

Informações necessários como idade, profissão , local da

colecta do material, residência ou viagens recentes do
paciente podem auxiliar, no laboratório para o diagnostico
correcto e sugerir a selecção de outras técnicas laboratoriais
para a identificação do fungo.
O laboratório deve ser informado dos riscos inerentes a
algum tipo de material clínico (por ex. se o paciente é
portador de hepatite viral ou HIV-positivo).
 Principais técnicas para o Diagnóstico em Micologia Médica

A visualização de estruturas fúngicas em material clínico é um

importante instrumento diagnóstico, por isso dos exames
microscópicos que tem como finalidade detectar a presença de
fungos em material colhido de pacientes com suspeita de infecção
fúngica.
Mas atenção, os resultados devem ser interpretados de acordo
com o tipo de material e o local da lesão, pois muitas vezes, o
fungo pode ser parte da flora local, não tendo significado clínico.
 Principais técnicas para o Diagnóstico em Micologia Médica

Exame Microscópico Direto com Hidróxido de Potássio (KOH) a 20%

Tipo de amostra: pelos, pele, unha, tecido obtido por biópsia,
exsudatos espessos e outros materiais densos.
Colocar uma gota de KOH (aquoso a 20%) em uma lâmina de
microscopia em seguida a amostra a ser examinada. Cobrir com uma
lamínula e aquecer ligeiramente, sobre a chama de um bico de
Bunsen, sem deixar ferver a mistura. Examinar a preparação após 20
minutos.
Principais técnicas para o Diagnóstico em Micologia Médica

Exame Microscópico Direto com Tinta de Nanquim (tinta da China)

Tipo de amostra: líquor, urina, secreções ou exsudatos para
visualização de leveduras capsuladas do gênero Cryptococcus.
Colocar uma gota de tinta nanquim e uma gota da amostra
centrifugada sobre uma lâmina. Cobrir a preparação com lamínula e
observar ao microscópio óptico. Nesta técnica, um erro bastante
frequente é confundir linfócitos com células de leveduras.
 Principais técnicas para o Diagnóstico em Micologia Médica

Exame Microscópico com Coloração pelo Método de Gram

Tipo de amostra: urina, secreções e fezes.
Todos os fungos são Gram- positivos, por isso a coloração
não visa a diferenciação dos microrganismos, mas possibilita
discriminar elementos fúngicos de artefatos existentes nas
amostras.
Principais técnicas para o Diagnóstico em Micologia Médica

Exame Microscópico com Coloração Panótica (Giemsa,

Leishman ou Wright)
Tipo de amostra: medula óssea, sangue, aspirados e
secreção cutânea.
Estas colorações são usadas para pesquisa de Histoplasma
capsulatum. Faz-se um esfregaço semelhante ao usado para
coloração de Gram. Fixa-se com metanol e cora-se segundo
o método escolhido.
 Principais técnicas para o Diagnóstico em Micologia Médica

Resumindo
Vários materiais clínicos podem ser colectados para esse exame, como
escamas ,pelos, unhas, secreção, pus, crostas , grãos espécime de biopsia,
liquor, urina e escarro. útil no diagnostico das micoses superficiais, cutâneas
e subcutâneas.
Em algumas situações, pode estabelecer o diagnóstico das micoses
sistémicas com a detecção de Cryptococcus neoformans no liquor e de
Paracoccidioidesbrasiliensis no escarro. O material coletado pode ser
processado de várias maneiras: a fresco, em solução fisiológica, clareado com
KOH/DMSO, corado com nanquim, Gram, Leishman, entre outras.
 Principais técnicas para o Diagnóstico em Micologia Médica

Cultura
É indispensável para o isolamento e a identificação do fungo
patogénico. O isolamento de fungos oportunistas de sítios estéreis, tais
como liquor e sangue, tem significado importante de infecção, mas ,
quando isolado de materiais como pus, escarro, ou urina, deve ser
interpretado com muita cautela. O meio de cultura mais utilizado é o
ágar-Sabouraud-dextrose, que pode ser modificado (ciclo-heximida e
cloranfenicol para dermatófitos; bile de boi para Malassezia spp. E
outros)
 Principais técnicas para o Diagnóstico em Micologia Médica

Cultivo em lâmina (microcultivo)

Técnica utilizada para o estudo dos aspectos microscópicos característicos :
micélio vegetativo e micélio reprodutivo ou frutificação.
A técnica consiste em uma camara húmida contendo uma lamina de
microscópio colocada sobre um bastão de vibro .Uma pequena quantia (1cm2)
de ágar-batata sobre a lâmina é semeado com o fungo a ser estudado.
Uma lamínula estéril é colocada sobre o bloco de ágar, e, após o crescimento
satisfatório , a lamínula é retirada e colocada em lamina corada com lactofenol
azul de algodão e submetida ao estudo das estruturas microscópicas do fungo.
 Principais técnicas para o Diagnóstico em Micologia Médica

Testes biológicos
Para diferenciação entre alguns dermatófitos , isto é entre
Tricophyton mentagrophytes e T. rubrum. incubam-se pelos
estéreis em placa de petri contendo caldo sabouraud e inóculo de
T. mentagrophytes. A cada 24 horas, um pelo da placa é retirado e
examinado ao microscópio corado com lactofenol azul de algodão.
O T. mentagrophytes perfura o pelo radialmente, enquanto o
Trubrum não é capaz de perfurá-lo.
 Principais técnicas para o Diagnóstico em Micologia Médica

Testes bioquímicos ( Prova da Urease)

Prova bioquímica usada para diferenciação entre T.
mentagrophyte e T. rubrum. O repique do dermatófito é feito em
meio de Christensen , rico em ureia , e a actividade ureásica
produz alteração alcalina do pH (de amarelo a vermelho).
Somente T. altera a coloração desse meio , tornando-o róseo.
 Principais técnicas para o Diagnóstico em Micologia Médica
Anatomopatológico
A demonstração de elementos fúngicos em tecidos é útil para o
diagnostico das micoses subcutânea e sistémicas
Inoculação em animais
As culturas em estudo podem ser inoculadas em animais
susceptíveis , como cobaias, camundongos , coelhos, e outros. Tem
como finalidade o isolamentos de determinados fungos, a
determinação de sua virulência e a obtenção de soros
heperimunes.
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Lâmpada de Wood
Para auxiliar o diagnóstico e controle do tratamento de tinha do
couro cabeludo, pitiríase versicolor e entrasma. O wood contém
10% de sais de níquel, o que permite a passagem de radiações
entre 340 e 450nm. O exame é feito em locais escuro, e observam-
se:
a)Tinha do couro cabeludo: pelos infectados com alguns
dermatófitos emitem fluorescência de cores variadas, como: M.
canis ou M. audouini - verde-azulada ; T. schoenleini-verde -palha
Principais técnicas para o Diagnóstico em Micologia Médica

Lâmpada de Wood
b) Pitiríase Versicolor : escamas infectadas com
malassezia spp. emitem fluorescência em tom
prateado
c) Eritrasma : escamas infectadas com
corynebacterium minutissimum emitem
fluorescência em tom vermelho-coral.
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Intradermorreação
Prova realizada com injecção intradérmica de 0,1ml do antigeno
padronizado, na face anterior do antebraço. Considera-se positivo o
aparecimento de pápula eritematosa igual a ou maior do que 5 mm .
Sorologico
Uma opção no auxilio no diagnostico e na avaliação prognostica de
determinadas infecções fúngicas , como coccidioidomicose,
paracoccidioidomicose, histoplasmose etc. Os resultados dessas
provas devem ser interpretados juntamente com os dados
epidemiológicos , quadro clínico e exame micológico.
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Hemocultura
Essa prova realiza-se em todos os casos suspeitos de infecção
fúngica sistémica.
Viabilidade
Técnica indicada para observar a viabilidade de células fúngicas
através do método do fluorocromasia , no qual células fúngicas
vivas acumulam a solução de diacetato de fluoresceina (DF),
corando -se em verde , e células fúngicas mortas impregnam-se da
solução de brometo de (BE), corando -se em alaranjado.