ENGENHARIA GENÉTICA DE

LEVEDURAS

Como está ?

Mário Lúcio Lopes

 PE-2 COM ATIVIDADE
ANTIBACTERIANA

OBJETIVO: Dar condições para que a levedura seja

capaz de produzir uma substância com
atividade antibacteriana.

OBSERVAÇÃO: Alguns laboratórios já possuem

leveduras com atividade antibacteriana para serem
empregadas em alimentos e bebidas.

REALIZAÇÃO: Fermentec, ICB-USP e ESALQ-USP

Autora: Maria Evangelina Camargo
Orientação: Luiz Carlos Basso
Co-orientação: Elizabete J. Vicente
 Principais Etapas

APLICAÇÕES
ENSAIOS DE
FERMENTAÇÃO

TESTES IN VITRO

TRANSFORMAÇÃO

ESCOLHA DO GENE

LEVEDURA
ESCOLHA DA LEVEDURA

POR QUE A PE-2 ?

• Levedura isolada de fermentações

industriais

• Grande capacidade de adaptação

em diferentes unidades industriais
 ESCOLHA DO GENE

POR QUE O GENE DA PEDIOCINA ?

• A bactéria Pediococcus acidilactici é

considera segura
• Não produz substâncias tóxicas
• Não oferece risco à saúde animal ou
meio-ambiente
• O gene pedA já foi expresso em
leveduras de vinho
(ação contra bactérias Gram-positivas)
 TRANSFORMAÇÃO
VETOR

CPC

CAN1 tPGK Pediocina pPGK CAN1

PEDIOCINA
PE-2 resistente
a canavanina
 TESTES IN VITRO
Crescimento de Listeria monocitogenes na presença
da pediocina produzida pela PE-2 transformada
 TESTES IN VITRO
Crescimento de Bacillus coagulans na presença da
pediocina produzida pela PE-2 transformada
 RESUMO DOS RESULTADOS

A clonagem do gene da pediocina e transformação da

linhagem PE-2, foram realizadas com sucesso.
 
Foram obtidos vários clones recombinantes mas alguns
perderam o gene da pediocina ou não apresentaram
atividade antibacteriana in vitro.
 
A pediocina produzida pela PE-2 MMS20 apresentou
atividade biológica inibindo o crescimento das bactérias
L. monocitogenes e Bacillus coagulans.
 
 ETAPA SEGUINTE

Avaliar as leveduras transformadas

em ensaios de fermentação com
reciclos leveduras transformadas.
AVALIAÇÃO DE LEVEDURAS
TRANSFORMADAS

Silene Cristina de Lima Paulillo

BIOTECNOLOGIA
 OBJETIVO

AVALIAR ISOLADOS DA PE-2 OBTIDOS

APÓS TRANSFORMAÇÃO COM O GENE
DA PEDIOCINA DE Pediococcus acidilactici
E PCR MUTAGÊNICO, SIMULANDO O
PROCESSO INDUSTRIAL
 METODOLOGIA
LEVEDURAS: PE-2 (ORIGINAL)
PE-2 MMS20

ENSAIO: MOSTO MISTO (14 % ART)

Lactobacillus fermentum (CCT 1407): 2o e 3o ciclos
10 CICLOS FERMENTATIVOS

PARÂMETROS AVALIADOS: RENDIMENTO, GLICEROL,

VIABILIDADE, BROTAMENTO, CONTAMINAÇÃO
BACTERIANA, VELOCIDADE DA FERMENTAÇÃO
 RENDIMENTO (%)

94
92
90
88
86
84
82
80
78
76
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 CICLOS

PE-2 PE-2 MMS20

 CRESCIMENTO (g)

3,0

2,5

2,0

1,5

1,0

0,5

0,0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 CICLOS

PE-2 PE-2 MMS20

 GLICEROL (g/100mL de vinho)

1,5

1,0

0,5

0,0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 CICLOS

PE-2 PE-2 MMS20

 VIABILIDADE (%)

100

80

60

40

20

0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 CICLOS

PE-2 PE-2 MMS20

 BROTAMENTO (%)
25

20

15

10

0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 CICLOS

PE-2 PE-2 MMS20

 BACTERIAS (Cels x 107 /mL )
20

15

10

0
1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 CICLOS

PE-2 PE-2 MMS20

 VELOCIDADE DE FERMENTAÇÃO
(g de CO2 )

1,6

1,2

0,8

0,4

0,0
0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 HORAS

PE-2 PE-2 MMS20

 CONSIDERAÇÕES FINAIS

• A PE-2 foi eficientemente transformada;

• A linhagem transformada PE-2 MMS20 se mostrou estável

após reciclos;

• Não se evidenciou antagonismo frente ao

Lactobacillus
fermentum (CCT 1407) em fermentações com reciclos. Será
a melhor linhagem para este teste?
PRÓXIMA ETAPA: Testar com uma maior diversidade de
bactérias isoladas de fermentações
industriais
 BIOTECNOLOGIA

Luiz Carlos Basso

Silene Cristina de Lima Paulillo

EQUIPE TÉCNICA:
TÉCNICA

Luis Lucatti (Cometa)

Camila Cartes
Eder Silvestrini
Vanessa M. Costa