A Funo da protena CFTR e as alteraes produzidas pelas diferentes classes de mutaes do gene CFTR

Giselda MK Cabello Laboratrio de Gentica Humana IOC/Fiocruz

Funo da CFTR
N

Cl-

Cromossomo 7

ATP

ATP
C

CFTR+
CFTR+

ClA protena CFTR: 1480 aa, 5 domnios, canal de cloro, regulado por ATP

TM1

NBF

TM2

NBF

O gene CFTR: 230 Kb; mRNA 6,5 Kb; 27 exons.

A protena CFTR (Cystic Fibrosis Transmembrane Regulation) responsvel pela regulao de um canal de cloretos, regulados pelo cAMP. Tm sido descritas outras funes celulares da CFTR, como a regulao de outros canais inicos, funes de exocitose e de formao de complexos moleculares na membrana plasmtica.

A protena codificada pelo gene da fibrose cstica: Cystic Fibrosis Transmembrane Conductance Regulator (CFTR) Um canal de Cl2 sries de 6 domnios transmembranares 2 ATP-binding cassettes (ou ABC transport protein) Cl-

out

in

ATP

ATP

1 Domnio Regulador nico entre canais e entre transportadores ABC

R-domain

CFTR um canal de Cl- ativado pela fosforilao e pela quebra de ATP

out

in R-domain N
ATP
ATP

cAMP-activated protein kinase

A protena CFTR ajuda a controlar o fluxo de gua atravs do epitlio

Epitlio: camada de clulas intimamente ligadas umas as outras em forma de folha contnua.

lumen superfcie apical Cl-

Na+ gua
Cl-

Na+

1. Os canais de Na+ geralmente esto abertos, mas seu fluxo extensivo requer um fluxo de ons de carga oposta. 2. Se canal CFTR est aberto, o Cl- torna-se o contra-on e o NaCl flui atravs da membrana. 3. A gua ento flui entre as clulas para manter a presso osmtica. 4. Resultado: fluxo de soluo isotnica de NaCl do sangue para o lumen (ou vice-versa)

A superfcie dos vasos sanguneos geralmente permevel aos ons

As diversas mutaes no gene CFTR, atualmente cerca de 1700 descritas no Cystic Fibrosis Mutation Database (http://www.genet.sickkids.on.ca/), tm efeitos sobre a sntese da protena, sendo estas classificadas em seis grupos:

As classes de mutaes do gene CFTR

Existem 6 classes de mutaes que afetam o gene CFTR. - classe I (A e B): protena CFTR no sintetizada - classe II: protena CFTR no corretamente sintetizada - classe III: protena CFTR mal regulada - classe IV: a conduo inica atravs do canal alterada - classe V e VI: sntese da protena CFTR reduzida

As mutaes de classe I e classe II caracterizam-se pela inexistncia de molculas de CFTR, enquanto nas restantes est presente a atividade residual da molcula.

Classe I: (alterao da biossntese) Existe uma ausncia total da CFTR, devido a uma terminao precoce do RNA (inclui muitos alelos nulos e os fentipos mais graves, por exemplo, G542X).

Classe I-A: nenhuma protena expressa

Cromossomo 7

Classe I-A : Mutaes que afetam a produo da protena: CFTR no produzida. Por causa de mutaes sem sentido : cdon de terminao precoce.

CFTRCFTR-

Ex: G542X, W1282X

5 3

UGG Trp

UGA Stop

Classe I-B: nenhuma protena expressa

Classe I-B :
Cromossomo 7 CFTRCFTR-

Mutaes que afetam a produo da protena: CFTR no produzida. Por causa de mutaes que alteram a fase de leitura. Adio ou deleo de um ou dois pares de base.

A protena produzida ser truncada. Ex: 444delA

5 3

5 GGA AGA ATC ATA GCT TCC 3

Gly Arg Ile Ile Ala Ser

5 GGA AGA TCA TAG CTT CC 3

Gly Arg Ser stop

Classe II: (alterao na maturao) A CFTR sintetizada, mas no sofre o processo de maturao e migrao adequada at a membrana, ocorrendo degradao prematura. A mutao F508 a mais relevante, ocorre no primeiro domnio que liga ATP (NBF1) e

resultante de uma deleo de trs pares de bases que causa a perda de um resduo de fenilalanina na posio 508 da protena. Provavelmente uma protena parcialmente glicosilada produzida, mas reconhecida como anormal por um mecanismo de controle celular e conseqentemente degradada.

Classe II: protena mal sintetizada

Classe II: A protena no tem funo N porque ela no foi sintetizada corretamente. A protena no corretamente encaminhada at a membrana plamtica Ex: F508.

Cromossomo 7 CFTRCFTR-

ATC ATC TTT GGT

ATC ATT GGT

F508: A deleo de uma trinca CTT no xon 10 produz uma protena com um aminocido a menos: a fenilalanina.

Classe III: (alterao na regulao) a protena no responde a estimulao pelo cAMP, com diminuio da ligao do ATP CFTR e hidrlise. A consequncia a alterao da regulao do canal inico e diminuio de sua atividade, como o caso da mutao G551D.

Classe III: a protena mal regulada

N

Cromossomo 7 CFTRCFTR-

Classe III: mutao dos stios de fixao ATP do ATP. Sem sinal de abertura. Exemplo : na mutao de falso sentido (ou significado trocado) G551D a glicina na posio 551 trocada pelo cido asprtico. Cl-

ATP
C

GGU Gly

GAU Asp

Classe IV: (alterao da condutncia) identificam-se molculas de CFTR na superfcie celular, mas o fluxo dos eletrlitos atravs dos canais inicos menor (incluem numerosos alelos brandos, por exemplo, R117H).

Classe IV: a condutividade inica alterada

N

Cl-

Cromossomo 7 CFTRCFTR-

Classe IV: mutaes que alteram a ATP condutividade e a seletividade inica. Essas so as mutaes das regies transmembranares. Cl- ou outros

ATP
C

Exemplo : mutaes de falso sentido dentro das regies TM1 e TM2 - R117H (troca da Arginina por Histidina) e R334W (troca da Arginina por Triptofano) O fluxo de Cl- reduzido e a seletividade modificada.
5 3

Classe V: existe uma menor sntese de CFTR, mas a sua funo normal.

Classe V: menos protena produzida

N

Cl-

Cromossome 7 CFTRCFTR-

Classe V: Diminuio do nmero de canais de cloro por defeito na sntese da protena CFTR. Defeito de exciso-juno altera a estabilidade do RNA mensageiro CFTR.

ATP

ATP
C

Cl-

Exemplo: defeito da exciso-juno entre o ntron 8 e o xon 9, o mRNA torna-se instvel.

Mutaes que afetam a estabilidade da protena uma classe adicional (Classe VI) proposta por Haardt et al. (1999). Esta nova classe inclui protenas que perdem resduos da regio C terminal ou que so resultantes de delees de grandes resduos de aminocidos que s vezes no so essenciais, mas que levam a reduo drstica da estabilidade da protena e potencialmente levam a fentipos severos (exemplo, Q1412X) (Rowntree and Harris, 2003).

Classe VI: produo de CFTR normal, mas com remoo rpida da superfcie celular. Molcula com menor estabilidade, como tambm o caso da mutao Q1418X que leva a remoo de 50 resduos de aminocidos no C terminal.

Classe VI: menos protena produzida

N

Cl-

Cromossomo 7 CFTRCFTR-

Classe VI: Mutaes que afetam a estabilidade da protena.

ATP
C

ATP

ClExemplo: Deleo da poro C-terminal da protena que a torna instvel

Em sntese:

As seis classes de mutaes do gene CFTR

classes V e VI: menos protena Cl produzida

classe IV: a conduo inica alterada

Cl- ou outros

Cl-

Cl-

Cl- ou outro

classe II: protena CFTR mal sintetizada

Cromoss. 7 CFTRCFTR5 TM1

classe I: protena CFTR no expressa

classe III: a funo da protena CFTR mal regulada

gene CFTR
3 NBF R TM2 NBF

Referncias Bibliogrficas Haardt M, Benharouga M, Lechardeur D, Kartner N, Lukacs GL 1999. C-terminal truncations destabilize the cystic fibrosis transmembrane conductance regulator without impairing its biogenesis. A novel class of mutation. J Biol Chem 274:21873-77. Rowntree RK, Harris A 2003. The phenotypic consequences of CFTR mutations.

Ann Hum Genet 67:471-485.

Crditos de imagens: Philippe Rousseau - La Mucoviscidose et le gne cftr