cobas

cobas8 CMV

Teste quantitative de acidos nucleicos

para utiliza ao com os cobasR 6800 /8800 Systems
^ Para diagnostico in vitro

cobas * CMV P/ N: 07001029190

cobas * CMV Control Kit P/N: 07001037190

cobas * NHP Negative Control Kit P/N: 07002220190

I
 cobas * CMV

Utilizagao prevista
O cobas* CMV e um teste in vitro de amplificagao de acidos nudekos para a
qua „„,
^^*
« < .
00 «
* .
( CMV ) em plasma EDTA humano.
transplante de 6rgaos sohdos e em
O cobas* CMV destina -se a auxiliar no diagnostic e gestao de CM \ em pacientes
populates para availar a
pacientes de transplante de celulas estaminais hematopoieticas. O teste pode ser u
p0dem ser utilizadas
necessidade de iniciar um tratamento antiviral . Em pacientes que estao a reccbtr terap
medidas de ADN em serie para avaliar a resposta viral ao tratamento.
Os resultados do cobas* CMV devem ser interpretados no contexto de todas as conclusoes c
relevantes.

Resumo e explicagao do teste

Fundamentos
O citomegalovirus humano ( CMV ) e um patogeneo viral humano pertencente a famflia dos virus da herpes, omnif resente
em comunidades a nivel mundial.1,2 Em hospedeiros imunocompetentes, as integoes com CM \ sao muitas vezes
assintomaticas mas a infegao litica primaria pode estar presente como uma sindrome aguda semelhante a mononucleose.
Uma vez contraido, o CMV persiste normalmente como uma infegao vitalicia latente que pode ser reativada de forma
intermitente. As celulas mononucleares do sangue periferico ( mas nao linfocitos) e as celulas epiteliais sao os principals
locais de infegao de CMV.3 O CMV mantem - se numa fase latente nos monocitos / macrofagos em humanos. Os *

individuos com infegao latente poderao por vezes excretar o virus assintomaticamente pelos fluidos corporais ( per ex.,
urina, saliva ) e infectar terceiros. Individuos imuno-comprometidos, incluindo recem - nascidos,
recetores de transplantes
e pacientes com HIV correm um risco elevado de desenvolverem infegoes de CMV
primarias ou reativagoes de CM \ ’

latente que levam a uma elevada taxa de morbilidade e mortalidade.1 Manifestagoes

graves da doenga por CMV incluem
retinite, gastroenterite, hepatite, encefalite, esofagite, enterocolite, pancreatite,
nefrite, rejeigao do orgao do dador,
pneumonite e sindrome viral de CMV.5 7 '

Os nossos conhecimentos atuais relativos aos limites clinicamente relevantes

para o desenvolvimento da doenga por CMV
tern origem em varios estudos utilizando tecnologias, populagoes de
estudo e valores finais diferentes.8 15 Em
virais elevadas estao mais associadas ao risco de desenvolvimento de geral, as cargas
'

uma doenga por CMV. A relagao entre

doenga e sigmoide, ou seja , o risco de doenga por CMV aumenta a viremia e a
significativamente apos a carga viral de
"limite critico". Por exemplo, ao
utilizar um ensaio de ADN do CMV de sangue total CMV atingir um
recetores de transplantes de figado, o limite critico era > 5 log,
desenvol vido em laborato rio para test tr
0 copias / ml de ADN do
os niveis de ADN do CMV foram relacionados com o risco de
CMV ." pacientes com SIDA/ HIV
Em
doenga por CMV e mortalidade
geral 16 9 ,
No entanto, os metodos atuais desenvolvidos em laboratorio para
quantitica ao de ADN do
escassez de resultados padronizados, o que pode levar a uma
,
^ CMV t d 1
elevada variabilidade interlabnnunrioi ° imitados P°r uma
' .
^
'

,
Valida a reprodutibilidade da carga v ral de ADN do CMV
6 crucial para garantir a ' S " !T “ °
gestao de pacientes com doenga por CMV. As diretrizes consistencia de rc ul
altera oes nas medi oes de carga viral em serie devem ,
^ ^
atuais com base na precisao
ser no minimo, 3 vezes (0,5 log )
de testes PCR '• erem
8 que a:
* ^
biologicas importantes. Uma vez que a variabilidade e •.
ter de ser superiores a 5 vezes ( 0, 7 log10 ) quando
maior em concent
baixaslsd'u
rates igoes

ensaio para serem consideradas significativas.11 12*

os valores de tltulo sao proximos
T
*
do limit L interior de ^
quantificagao do
07190620001-01 PT
Doc Rev. 1.0

A
 Cob>iN ( MV /

Enquanto quo o limiteexato aindai tema de debate devido a variabilidadc do < vxsAio \w \ i\ <
critico « valido e tem side registado em estudos de historia natural que motlmm
•

que on
*n
valcuvs de un R v • a ’
|

^^ .
* .
tlevados estao relacionados com o aumento do risco de desenvolvimento iU doc ns as \ or C
desenvolvido com teste COBAS* AMPLICOR CMV MONITOR determinou um cuUdl paiapuvu
a < oi s - ;( )( ) ( ) c

5000 copias/ml em recetores de transplante de figado intetados com CM \ .

Fundamentos dos testes NAT

Os metodos laboratoriais utilizados no diagnostico de intecv'ao disseminada e doc ns a \ isc tial ativa cau /
1
humano incluem o isolamento do virus porcultura deleucocitos de sangue penU HI
I K O (1 ) a .
\ alias H « J .
todos dt
biopsias, metodos serologicos, medi ao do antigeneo pp65 e dete ao do ADN do c M \ pm nu
^ ^
polimeriza ao em cadeia (PCR).21 A serologia so e valida para determinar se um paciente lot pieviamentc
infeta o t o m
^
CMV e se corre risco de reativa ao. Os metodos de cultura apresentam um valor de previs&o baixo, requerem
urn tempo
de execu; ^
< ao superior a 48 horas e o seu uso em pacientes imuno- comprometidos e
limitado. O ensaio de antigenemi
\ ido a di mi nui ao da
Pp65 e trabalhoso e exige que o sangue seja processado no prazo de 6 horas apos a collu ita dt ^ .
^^
' ntigenemia durante o armazenamento.:: O ensaio pp65 e tambem diticil de realizar em doentes tom
A dete ao direta de ADN do CMV atraves de metodos de PCR em tempo real oterecem
^
uma vasta
neutropenia
gama dmamica,
precisao e elevada sensibilidade.

Explica ao do teste
^
O teste cobas* CMV e um teste quantitative que e executado no cobas* 6800 System e no cobas* 8800 System. O cobas
CMV permite a dete ao e quantifica ao de ADN do CMV em plasma EDTA de pacientes intetados. A carga viral e
^ ^
quantificada em compara ao com um padrao de quantifica ao de ADN sem CMV ( DN A QS) , que c' introduzido em cada
^ ^
amostra durante o processamento de amostras. O DNA - QS funciona tambem para monitorizar toda a prepara ao de
^
amostras e o processo de amplifica ao por PCR. Adicionalmente, o teste utiliza tres controlos externos: um positivo de
^
titulo elevado, um positivo de titulo baixo e um controlo negativo.

Principios do procedimento
O cobas * CMV baseia - se na prepara ao de amostras totalmente automatica (extra ao e purifica<;ao dos dcidos nucleicos)
^ ^
seguida de amplifica ao e dete ao por PCR. Os cobas* 6800/ 8800 Systems sao constituidos pelo modulo de abastecimento
^ ^
de amostras, o modulo de transference, o modulo de processamento e o modulo analitico. A gestao automatica de dados e
executada pelo software cobas * 6800/ 8800, que atribui resultados a todos os testes. As diferentes possibilidades de
resultados sao alvo nao detetado, ADN do CMV detetado < LLoQ (limite inferior de quantifica ao), ADN do CMV
^
detetado > ULoQ (limite superior de quantifica ao) ou um valor no intervalo linear LLoQ < x < ULoQ. Os resultados
^
podem ser examinados diretamente no ecra do sistema ou impressos como um relatbrio.
O acido nucleico de amostras de pacientes moleculas lambda DNA -QS adicionadas sao extraidas em simultaneo. Em
resumo, os acidos nucleicos virais sao libertados ao adicionar proteinase e reagente de lise it amostra. Os acidos nucleicos
libertados ligam-se a superficie de silica das particulas de vidro magneticas adicionadas. As substancias nao ligadas e
impurezas, tais como proteinas desnaturadas, detritos celulares e potenciais inibidores da PCR, sao removidas com os
posteriores passos com reagente de lavagem e os acidos nucleicos purificados sao eluidos das particulas de vidro com
tampao de elui ao a alta temperatura.
^

07190620001- 01PT
Doc Rev. 1.0
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^ JVM A *v\ AIWW \ \\ AI$ o \\\\ AO I>N A i}S

 cobas " CV\

Reagentes e materia ls
eagentes e controlos do cobas^ CMV
d Tabda 4
rT.cf recofTKn<i3iio M Irbela
Todos os reagentes e controlos nao abertos deverr. ser a 7 cor;
,
l

Tabela 1 cobas ' CMV

'

cobas ' CMV

Conservar entre 2 e 3 *C
Cassete de 96 testes (P/N 07001029190)
Components do kit Ingredients das reagentes Quantidade por kit
96 testes

Solucao de proteinase TampSoTns. < 0,05% re EDIK ctoreto re race acetato re

*
3 -i
CPAS E) c3 ic c 3% De proteinase
*
EUH2 ' 3: ficba re segjraoga Tr eora r rer or
^

-
EUH2CE ore desencadear
Contem: Subti ® na 9014-01- T
r 'eerer aercca

Padrao de quantrficacao Tamp§o Trts. < 0,05% EE A < 0.001% esrrrrra re ’

3 ml
’

de AON sem C / V corrtendo unta reg ac re irarer De rr ~er 'ar

CDNA -QS1 -
CMV e uma regtao re scree 2' ca ' E \ nao rriecbcsci
< 0.002% de ARN de Pol r £ (sr eticol < :’% re azda re
^
sodw
Tampao de Eluiipao .
Tamp £o Tns C 2% De 4-tedrodbenzoafeD re meti o 13 rr
CEB1
Reagente Master Mix 1 Acetato de manran es hrrrxor re potass a < £ 1% re azda 55 -
(MMX -Rl) sodica

Reagente Master Mix 2 Tampao de tncina. acetato re potass o. < 18% de su Udaooo re 5-
~
de CMV dfmetilo, g cere < 0 1% de ~ Aeer 23 EC A < 3 * 2% re
(CMV MMX -R2) dATP, dCTP, dGTP, dUTPs, < 3 01% de primers sense e ari-
senso do CMV pnmers < 3 3 ‘ % re r -ere sense e r:-
'

senso do padrao de q ^anrf»rag§3- < 3.01 % de sen res re

.
oUgoneciedt do marcares ccr- ^ D'esrerre esoecrcas rc
'
*

*
CMV e do padrao de quantjfica ao or GV < 0 31% er:i~~rc
^
oligonucleotfajco, < 0,1% re poi -erase DO AC \ Z35D
-
< 0,10% de enz: 13 A^ pErase [ „~5c ~\ -z cos ese'
(de ongem microbiana^ < 0.1% de azra re srcc

07190620001- 01PT
Doc Rev 1.0
 tollMn " * MV

PrecaiiQoes e rtxiiiisitos do mamisoanionto

^^ fte-ncias e prtx ^Vs
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K \*s piAtu AS lo UhotAUMni sAo ossoiu lAls |> A I A
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prcscrvi. oo r : »v Hv \
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A ' . ,o -.vs .V 5 U \ I HlWji , o antix'oqxvs xlo 1 UU Os loslos de plasma
~ _ jKxLro -'A .x' v .v . x x . V x \;o Ao vvx':v;a'. .', m muisquoi \ RN do Hl \ 1 ( grupos M o O ) , ARN do
HIV - '. AMNfeHA MDN 46 HDVX VX \ .V V \ VRN WNV ouADNd» CM \ dou t .nois Nenhum
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Nio coo o $MM(ix UXA ' : . A sq .AX amcotms *rm*» ctwnU$ cm tubos primarios.
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• Para ciTin: x - A s' ixs. x'\ x*\ . .AxV xV x x x'
-
QUA x - -xs v x. > A AW. v '. (Ocs s' x . VA. 'S INVOVAATS'tav o dosempenho ideal do toste.
;
- x X

'. to a mampul,ivio o procossamonto das amoslias , o

;

• Pijccw cvww o> . - AX - SN .WV . xv'- - > ' >

' \ x' v . '
X x x

carrw>v « xii> r.\\': :vk' -V oo ' UV\ AX\' adx\;Usi,imonto .

( maoezoK' -” ?"
Doc Rev
'
-
 * MV

Manuseamento de reagentes mosud ^ Jc acordocom

ou controlos, manipule todos os
reagentes, c
Para evitar carryover de amostras
, antes dos
as boas praticas de laboratorio. e ise c reagente de lavagem
, diluentes, reagente existir algum indicio
Inspecione visualmente todas as cassetes de reagente
mesmos serem utilizados, para se certificar de que nao existem
quaisquer sinais e g^
'

^
de fuga , nao utilize esse material para testes.
, um produto quimico
po tencialme
' nte perigoso.
• O cobas omni Lysis Reagent contem tiocianato de guanidina COntacto, lave
Evite o contacto dos reagentes com a pele, os olhos ou com membranas mucosas
, m ^
imediatamente a zona afetada com agua abundante para evitar queimadur
as. azida sodica
cobas omni Specimen Diluen
MGP Reagent e o
• Os kits de teste cobas CMV o cobas
" , omni
^ C 2LSO de
1

como conservante. Evite o contacto dos reagentes com a pele, os olhos

ou com membranas mu ^ rame
ca
evitar queimaduras. No
^

contacto , lave imediatame nte a zona afetada com agua abundante para
.
destes reagentes, dilua com agua antes de passar com um pano para secar solu ao
, entre em contacto com ^
• Nao permita que cobas omni Lysis Reagent, que contem tiocianato de guanidina
toxico.
de hipoclorito de sodio ( lixivia ). Esta mistura pode produzir um gas altamente
e reagentes, de acordo com
• Elimine todos os materiais que tenham entrado em contacto com amostras
regulamenta oes nacionais, estaduais e locais.
^
Boas praticas de laboratorio
• Nao efetue pipetagem com a boca.
• Nao coma, nao beba nem fume nas areas de trabalho.
. Para
• Use luvas de laboratorio, bata de laboratorio e prote ao ocular quando manusear amostras e reagentes
^
evitar contamina ao, as luvas devem ser trocadas entre o manuseamento de amostras e o manuseame
nto de kits
^
cobas* CMV e reagentes cobas omni . Evite contaminar as luvas quando manusear amostras e controlos.
• Lave muito bem as maos depois de manusear amostras e reagentes do kit, e depois de retirar as luvas.
Limpe e desinfete cuidadosamente todas as superficies de trabalho do laboratorio com uma solu ao preparada de
• ^
fresco de hipoclorito de sodio a 0,5% em agua desionizada ou destilada ( diluir lixivia domestica a 1:10 ). Em
seguida , esfregue a superficie com um pano com etanol a 70 %.
• Se ocorrer um derrame no equipamento cobas 6800/8800, siga as instates do Manual do Operador dos cobasJ
®

6800/8800 Systems, para limpar e descontaminar adequadamente as superficies do ( s ) instrumento ( s ) .

Colheita, transporte e armazenamento de amostras

Nota: Manuseie todas as amostras e controlos tendo em conta a possibilidade de transmitirem agentes infeccioso
Armazene todas as amostras as temperaturas especificadas.
A estabilidade das amostras 6 afetada por altas temperaturas.
Se forerri utilizadas amostras congeladas em tubos secundarios, coloque- as a temperatura ambiente (15 a 30 °n '
descongelarem completamente e, em seguida , centrifugue para recolher todo o volume das amostras no fundo do tubo

07190620001 -01 PI
Doc Rev. 1.0
14
 cob»*' CMV

Amostras
. . . molecuU HI '

—
dos de leste de diagnostic*
)

•
O sangue deve ser colhido em tubos de prepWO de P

O sangue total recolhido em tubos de prepara <;ao e P

'
^
Vacutainer* PPT’ ou em tubos esterilizados que uUhzem EDTA
fabricante dos tubos de amostra. Consulte a Figura ^^^ t coagulantc. S ga as mstrusoc

ra metodos de teste de diagnostico

anticoagulante pode ser
m
arma c /ou
Vacutainer* PPT ~ ou em tubos
transportado durante ate 24 horas entre e do p A **"
. Lpara . .
desempenhada de acordo com as instrugoes do ta ncan
,
.
•

asmazepadas durante ate 6 dias entre

os 2 e os 8 t
«

.
Apos
^- o as amoslras
12 semanas a < 18 "C.
.
d plasm

.
pcdem * r

As amostras de plasma sao snivels ale qaa ro ados de

Figura 1 Condigoes de armazenamento de amostras

- congelamen o/descongelamento a
wnnnelament
< - 18 C.

Sangue
total
O
co.
k
3
+*
CO
.
u
0)
Q
E
0)

Plasma

l 6
Dias
< - 18 Plasma congelado
( pode ser congelado/ descongelado ate 4 vezes)

0 Semanas 12

e rotuladas em conformidade com os

• Caso seja necessario expedir amostras, estas devem ser embaladas
e s.
regulamentos locais e/ ou internacionais aplicaveis ao transpose amostras agentes etiologico
de

de preparagao de plasma para metodos de teste de

Nota: Em alternative o sangue total recolhido em tubos
~
diagnostico molecular BD Vacutainer PPT ou em tubos esterilizados que utilizem EDTA como
*

anticoagulante pode ser armazenado e/ ou transportado durante ate 36 horas entre 2 ° C e 25 °C antes da
preparagao do plasma mas, nesse caso, o plasma separado nao pode ser armazenado por mais tempo e
deve ser analisado diretamente.

0719062000 M)] PT
15
Doc Rev. 1.0
 cobas " CMV

Resultados
de CM V das amostras c dos
8800 Systems determinam automaticamente a concentrate) de ADN
1Vs coba»* 6800 /
m ).
controlos. A conccntrato de ADN de CMV e indicada em Unidades Internacionais por mililitro Ul /
(

Controlo de qualidade e validade dos resultados

.i
• S3o processados com cada batch um controlo negativo [ (-) C] e dois controlos positivos, controlo po
|CMV L(+)C] e um controlo positivo alto de [ CMV H(+)CJ.
, para se
• No software cobas* 6800 / 8800 e/ou nos relatorios, verifique os alarmes e os resultados associados
certificar da validade do batch.
e dois contr
• O batch e valido se nao ocorrerem alarmes nos tres controlos, que incluem um controlo negativo
( ) C e os resultados do
positivos: CMV L( + )C, CMV H( +)C. O resultado do controlo negativo e exibido como -
( ) C.
controlo positivo baixo e do controlo positivo alto sao exibidos como CMV L( + ) C e CMV H +
A mvalidagao dos resultados e feita automaticamente pelo software cobas' 6800 / 8800, com base na lalha de algum
controlo positivo ou negativo.

Alarmes de controlos
Tabela 9 Alarmes de controlos negativos e positivos

Controlo negativo Alarme Resultado Interpretagao

C-) C Q02 Invalid Um resultado invalido ou o resultado de titulagao calculado do

(batch de controlo falhou] controlo negativo nao e negativo.

Controlo positivo Alarme Resultado Interpreta ao

^
CMV LO)C Q02 Invalid Um resultado invalido ou o resultado de titulagao calculado do
(batch de controlo falhou) controlo positivo baixo nao esta dentro do intervalo atribuido.

CMV H(+)C Q02 Invalid Um resultado invalido ou o resultado de titulagao calculado do

(batch de controlo falhou] controlo positivo alto nao esta dentro do intervalo atribuido.

Se o batch for invalido, repita os testes de todo o batch, incluindo todas as amostras e controlos.

07190620001-01PT
Doc Rev. 1.0
 cote*
a
cw

Interpretapao dos resultados * 6300 8S00 e/ ou

SOCDO^ cobas
^
Para um hatch vilido, ventique todas as amostras individuals
se 5«ac
nos relatonos. A lnterpretafao do resultado devera ser como
I'm hatch valido pode induir resultados validos e nnaiados
.
•
Tabela 10 Interpretafao dos resL 'tados De a ^ osras

Resuftados Interpretapao

Target Mot Detected

< Titer Min

ADN de CMV nac Dete3DD

—
0 tftuto calculado esca abwo do ir in= i g
-- - -
nesuftadas some ’ 3V * par pr gap:
ip
”

Dr pjarnnnaiar f
— 3“ sac
’ r.
Reportar nesuftadDs cone C7 » oerraDr irnsnor = /riuc
. nr.J
Tftuto min. = 34.5 Ul/mt
o a ac tituc _ in.
mir . e infer or
0 tftuto catoutado essa denrr or mtenoto iresr D: ersac - saeserar ***
5
Titer
ou igual ao tftuto n3v
resuftados oomo ' [TftutaD De CVi
da srsaic.
0 tftuto cateulaoc esta acma do inc? s-cenx Dr p-aitrcsisc .^ LrCT
> Titer Max 3
Reportar resuftados cone ' CMl DTCSCBDC s-Orro = :t ic
*
‘
_
Tftuto max- = 1.0E+07 Ul ml
j - .
Um resultado de amostra "> Titer Max refcrc se is aaoostns poanw de CXTV
( ULoQ). Caso se prelend a um resuludo quantiutrvo. a ainosm orspnL ctmrz.
o teste deve ser repeudo. Multiplique o resuludo reponado pejo laior de dikacaa.
dibhir OT ptr
— -E0TA
» 0
^yye
Limita oes do procedimento
•
^ cobas
O * CMY foi avaliado apenas para utiiizacao em comnnacao con o cobas * <3fV Control Kit. o cobas

NHP Negative Control Kit, o cobas omni MGP Reagent, c cobas omni Evas Reagent, c cobas omni Specimen
Diluent e o cobas omni Wash Reagent para unlizack) nos cobas* 6$00 SS.'. Systems. >

• A obtengao de resultados fiaveis esta dependente de procedinenos corretos de orfbdta, annazenamento e

manuseamento da amostra.
• Este teste foi validado apenas para unliza o com plasma EE TA_ Testar outras nrocs de amostras com o cobas*
^
•
CMY pode onginar resultados impreasos. As medicoes de carga viral de plasma rao sio diretamente
comparaveis com as de outros tipos de amostra.
A quantiticavao de ADN do CMY pode ser aietada pelos metodos de recolha de amostras. fatores de paciente
-
3
( ou seja, idade, present de sintomas ) e bu rase de infe aa
• ^
Embora raras, as muta oes dentro de regibes altamente consexvadas de um gene de poltmerase de
^
( UL54 ) abrangidas pelo cobas* CMY , podem atetar a liga ao de primerc e ou sonda
ADN do CMV
.
subquantificagao do virus ou msucesso na detecao da presence do virus ^ resultando na

• Devido a diferen as basicas entre tecnologias, recomenda-se que. antes de mudar de

^ uma tecnolo ia para outra
os utilizadores realizem estudos de correlayao de metodos nos sens laboratories. para
tecnologicas. Os utilizadores deverao seguir os seus propnos pnvedunentos espeaficots
qualifiear diteren 'as al^
e politicos es ~ifi
• O cobas* CMY nao se destina a utiliza o como teste de rastrao da presenci -
^
sanguineos e nao foi avaliado como teste de diagnostico para confirmar a
de CMY em
present de mte aocmnCx
1 Pr dUt
°S " °
^
'

07190620001 - 01 PT
Doc Rev. 1.0
18
 cobaft " ( - MV

Avaliapao nao clinica do desempenho

Caractensticas principals de desempenho
Limite de dete So CLoD)
^
Padrso intemacional da OMS
v .inurede do cohos' CMY toi determinado pda andist de dilutees em serie do 1
padiao inti i IUK I ‘
,

1 padi ao int
P*** APN de otomeiraJovirus humane para ensoios de tecmcas de amplificayao de audo nuckico
(
CMV . Foram testades pamus ^
.
da OMS jura HCMY) obtido a purtir de NIBSC era plasma EDTA humane negative para o
multiplas , dias .
de 01*0 mvets de concentntV'io e amda urn brance com ties letes de reagentes cobas CMV, corridas
*

operadores e equipamentos.
do c M \
^ radas do plasma EDTA sao exibidos na Tabeia l I , O estudo demonstra que o cobas CM \ detetou AON
r.urr.a concentracao de 23 UI ml ou superior com unia taxa de positividade de > 95%.

Tabeia 1 1 L?nr»te Oe deb So em plasma EOT A

Concentraqao de trtuio
^ N.* de replicas Numero de Taxa de positividade
c*e entrada validas positives em %
( ADN do CMV Ul/ ml)
920 1 S9 189 100 ,00
4-6.0 189 188 99, 47
343 188 187 99 , 47
230 189 181 95,77
113 189 158 83,60
38 189 117 61,60
29 189 66 34,92
1A 189 28 14,81
0,0 189 0 0 ,00
Limite de dete ao por PR06 IT 20.6 Ul /ml
7 com ^
ta\3 de positr\ id3de de 95> Intervalo de confian a de 95 : 17.9 - 24.3 Ul/ ml
^ ^

190620001-01 PT
z Rev. 1.0
19
I w1

cobns " CMV

Intervalo linear
dade do cobas CM \ toi avaliada
utilizando
uma serie de dilui ao composta por 10 membros do paincl com
1 34E +07 ^ d
mI) Cada °
de genotipo gB- 1 ^
DNA abrangendo o intervalo linear do ensaio ( 2,45E 01 Ul
e os . /
membr do painel foi
*

°
resultados do estudo sao apresentados testado em 48 replicas em tres
+ / ml a
lotes de reagentcs de teste cobas* CM V
na Figura 3.
O cobas* CMV
demonstrou ser linear de 2.45E +01
Figura 3 Determinagao
do intervalo linear
Ul/ ml a I 34E+07 Ul/ml. .
em plasma EDTA
8
o
'S Observagoes
2 7 •• • No intervalo espedficado
c Reta de regressao
8
c 6 Limite superior de desvio i
l
o
(J Limite inferior de desvio
0)
O
co
5 I
0)
D
TO
D 4 i
C
3 i
0 3
o
1<u «
iI
CO 2
-O
o
05
o 1
<v
o
o 0
£
- 1
0 1 2 3 4 5 6 7
Trtulo de Log atribu /do [ 8
unidades de concentragao
]

07190620001-01PT
Doc Rev. 1.0

20
 cohns * CMV

Jov « UurtJcM » utoclo -ado ^lcrhn.

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** ***** *5 Intervals de conccntras 4o d
,
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Todos os lotos
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N , „v C< ** A
Of
C<*G 2
Of
Lot* 3
DP DP em pool
0.04
V A &«6 (C02

004 0,03 0.04

vS 03 0,06 0.05
V >

0,05 0,03 0.05

s' . 04 0,05 0.05

^. vV A
0 03 0,04 0.04
\ x‘ MJ -VV
*4* 0.11 0.12
Vs**i 0,10
'

^ \ P - vAT
4 A
** on 0.09 0.12
4* .H
^ a<< *
9S *5T * 20 0,33 0.17 0.20

0.20 0,23 0.22

> SS Vx '
**
.
u#s - fvApV /*f
^ -vvkws
' v. - v ' V s' vsH#s . v •' ,'•• •
vws „v.' , V. x xic glix-oprotcma B toi avaludo por
&* .• v v v ,v v ,vfs\ X'
••• • «, genet , pos 2 A 4 da ghcoproteina B
,

%
*
-
X O ' X 'V V , v " V V» V' Ws xi,\s genet aVvs 2 4
*
» v. siv •v ^v ,v limijif / if , -*r**c*o <i» s oenetijK»s pB-2. gB-3 e gB-4 da glicoproteina B
'

vx „• - .- , . R uB- 2.
s' xs sS v '* • > ' AS V ,-«!; I a ,v ms vs OM \ para ti\S tipes ditcrentes de genotipos do glicoproteina
-
'

,»v * S '
«
^ '; v , , -
'vvc a AS i forx'ntcs cm plasm* EDTA negatno ds> CMV . A determinajao da
taxa de
*s s, . ,
SAV « > V-*! -Si» x%w ,N reps a par* v*sia nivcl . O teste tbi etetuado com tr s lotes de reagentes de cobas
*
^
x

x
•

- <S . S ', V
'
-
x ^ vv -.x ^v , \ Ss'> '. Xo ^ . s 5 X\> resuitadosdememstram que o cobas CMV detetoii ADN do CMV
*
.

,v s-exv - SKVVS ,v :s ' V! ml com « ma tax de positixidade de 95%.

- *

Xv <Vx 21
 cobas * CMj
^
de detegSo
Tabela 13 VerificacSo do gendtipo do ADN do CMV do limite 51,75 Ul/ml
34,5 Ul / ml Taxa de
17,25 Ul / ml
Taxa de Numero positividade
Taxa de N .° de em %
N.° de Numero positividade de
N.° de Numero positividade em % replicas (95% 1C*)
replicas de em % replicas de
validas positivos
( 95% 1C*) 100,0
validas jositivos (95Q/0 1C*) validas ositivos 63
Gendti 63
63 63 100 ,0 Cl 00.0)
gB-2 63 61 96,8
(99, 6 %) noo. o) 100 , 0
53 63
63 100 ,0 (100.0)
flB - 3 63 57 90,5 63
(100 ,0)
(96, 40/o) 100 , 0
63 53
63 63 100, 0 (100,0)
gB - 4 63 55 87,3
(94, 40/Q) (100 ,0)

* Intervalo de confian a superior unilateral de 95%

^
Verifica 9ao do intervalo linear para genotipos gB-2, gB -3 e gB- 4 Ft

As series de dilui ao utilizadas na verifica ao do estudo de linearidade de genotipos do

cobas CM \ consistiram
^ ^
membros de painel abrangendo o intervalo linear do ensaio. Os testes foram efetuados com
dois lotes de reagentes co
^

CMV; foram testadas 16 replicas por nivel em plasma EDTA.

O intervalo linear do cobas* CMV foi verificado para todos os tres genotipos ( gB - 2, gB - 3 e gB - 4 ).

Verifica 9ao de amostras do CMV resistentes a farmacos

O desempenho do cobas* CMV em amostras de CMV resistentes a farmacos foi avaliado por;

Verifica ao do limite de dete ao para amostras de CMV resistentes a farmacos ( resistentes a Ganciclovir,
^ ^
Valganciclovir, Cidofovir ou Foscarnet )
Verifica ao do intervalo linear para amostras de CMV resistentes a farmacos ( resistentes a Ganciclovir,
^
Valganciclovir, Cidofovir ou Foscarnet )

Verificado do limite de dete9ao para as amostras de CMV resistentes a farmacos (resistentes a

Foscarnet ou Ganciclovir, Valganciclovir e Cidofovir)
Sobrenadantes de cultura celulares de duas amostras diferentes de CMV resistentes a farmacos (resistentes a Foscarnet ou
Ganciclovir, Valganciclovir e Cidofovir ) foram diluidas em tres diferentes niveis de concentra ao em plasma EDTA
negativo do CMV. A determina ao da taxa de positividade foi realizada com 63 replicas para cada nivel . O teste ^
^
efetuado com tres lotes de reagentes de cobas " CMV . Os resultados sao exibidos na Tabela 14 . Estes
foi
resultados
demonstram que o cobas * CMV detetou ADN do CMV para duas amostras diferentes resistentes a
Foscarnet ou
Ganciclovir, Valganciclovir e Cidofovir em concentrates de 34 ,5 Ul / ml com uma taxa de positividade
de > 95%

07190620001-01 PT
Doc Rev . 1.0
22
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* * *
xwsw 'ix .xx .Vx' xV ; xV! vV pxviuxtdxkx xx p> ,tx 4 l x xj\ vv \ xvlx' vvtxv ii » udttUvox on t 11 ml unit M > N dvU 'MV posiUvo c ADN
. .
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IVx !V\ t V
' 23
M

cobas * CMV

Tabela 15 Microrganismos testados relativamente a reatividade cruzada

Virus Bacterias Leveduras

Adenovirus tipo 5 Propionibacterium acnes Aspergillus niger

Poliomavfrus BK Staphylococcus aureus Candida albicans

Virus de Epstein Barr Chlamydia trachomatis Cryptococcus neoformans

Vfrus da hepatite B Clostridium perfringens

Vi'rus da hepatite C Enterococcus faecalis
Vfrus do herpes simples tipo 1 Escherichia coli
Vfrus do herpes simples do tipo 2 Klebsiella pneumoniae
Virus do herpes humano tipo 6 Listeria monocytogenes
Vfrus do herpes humano tipo 7 Mycobacterium avium
Vfrus do herpes humano tipo 8 Neisseria gonorrhoeae
Vfrus da imunodeficiencia humana 1 Staphylococcus epidermidis
Vfrus da imunodeficiencia humana 2 Streptococcus pyogenes
Vfrus do papiloma humano Mycoplasma pneumoniae
Vfrus JC Salmonella typhimurium
Parvovfrus B19 Streptococcus pneumoniae
Vfrus Varicella -Zoster

Especificidade analitica - substancias interferentes

Nfveis elevados de trigliceridos ( 34,5 g/1), de bilirrubina conjugada (0,25 g/1), de bilirrubina nao conjugada (0,25 g/1), de
albumina (58,7 g/1), de hemoglobina (2,9 g/1) e de ADN humano ( 2 mg/1) nas amostras foram testados na presen a e
ausencia de ADN do CMV. Foi demonstrado que as substancias endogenas testadas nao interferem com o desempenho do
^
teste cobas* CMV.

O impacto da presen a de doen as autoimunes como lupus eritematoso sistemico (LES), artrite reumatoide ( AR) e
^ ^
anticorpos antinucleares tambem foi avaliado na presen a e ausencia de ADN do CMV. Alem disso, os farmacos listados
^
na Tabela 16 foram testados com o triplo da Cmax na presen a e ausencia de ADN de CMV.
^
Foi demonstrado que todas substancias potencialmente interferentes nao interferem com o desempenho do
teste

07190620001- 01PT
Doc Rev. 1.0
24
 El

cobas* CMV

®
do CMV pelo cobas CMV
a quantificagao de ADN
Tabela 16 Farmacos testados relativamente a
potencial interference com
farmaco
Classe do farmaco Nome generico do
Sulfametoxazol
Cefotetano
Antimicrobiano Ticarcilina dissddica
Clavulanato de pot ssio
^ Trimetoprim
Fluconazol Vancomicina
Piperacilina
Tazobactam sddico
Cidofovir
Compostos para o tratamento do Ganciclovir
Foscamet
vfrus Herpes Valganciclovir
Prednisona
Azatioprina
Imunossupressores Sirolimus
Ciclosporina
Tacrolimus
Everolimus
Micofenolato de mofetil
Acido micofendlico

-
—
CMV
, AmpliPrep/COBAS TaqMan
Oesempenho comparado con o teste COBAS

vaHdas e a
^ *>
de Demi g.
realizada uma analise de regressao
de quantifica «;ao de ambos os testes. Foi
estao indicados na Figura 4.
Os resultados da regressao de Deming

ZD
*

071906200Q ] -0‘\ PT 25
Doc Rev. 1.0
 cobas " CMV

Informagoes adicionais
Caracteristicas principals do teste
Plasma EDTA
Tipo de amostra
500 pL
Quantidade de amostra minima necessaria
350 pL
Volume de processamento de amostras
34,5 Ul /ml

—
Sensibilidade analitica

—
/ ml
34,5 Ul /ml a lE+07 Ul
Intervalo linear

-
100%
Especificidade
Genotipos detetados
Detetadas amostras do CMV resistentes a
farmacos
« »
” *T
Amostras do CMV resistentes
e Foscamet
.
a Ganc dc . •*- **«
D

21
0719062000 V£1PI
Doc Rev. 1-0
 1 I
o

HIV-1 HCV HBV

Tipo de amostra
Plasma EDTA Plasma EDTA. soro 5 lasma EDTA, soro
Quantidade de amostra minima 650ul 650ul 650pl
350pl 350pl 350ul
500|_il 500ul 500ul
Volume de processamento de amostra
200|il 200ul 200pl

13,2 cp / ml ( 500pl) 15 Ul / ml ( 500pl) 2,7 Ul / ml ( 500pl)

Sensibilidade analitica
35,5 cp/ ml ( 200pl) 40 Ul/ ml ( 200ul) 15,5 Ul / ml ( 200pl)

500pl: 20 cp /ml-l,0 E +07 cp /ml 500ul: 15 UI/ ml-l,0E +08 Ul/ ml 500ul: 10 UI / ml-l,0E+09 Ul / ml
ntervalo Linear
200pl: 50 cp 7 ml-l,0E +07 cp /ml 200ul: 40 UI/ ml-l,0E +08 Ul /ml 200ul: 25 UI / ml-l,0E+09 Ul/ ml

Genotipos detetados M, O, N 1a 6 A -H e mutante pre - core predominante

CMV
Tipo de amostra Plasma EDTA

Quantidade de amostra minima 500pl

Volume de processamento de amostra 350|il

34,5 Ul/ ml
Sensibilidade analitica

34,5 UI/ml-l,0E+07 Ul/ ml

ntervalo Linear

Genotipos detetados 1 a 4 de elicoproteina B do CMV