Procedimento nº

PT.MB.
PROCEDIMENTO TÉCNICO

Determinação de Coliformes Fecais e Revisão Página

Totais nº 1 de 3
Palavra-chave: Coliformes
SOMENTE PARA USO DIDÁTICO
1. OBJETIVO

Estabelecer condições para a determinação de coliformes fecais e totais.

2. INTRODUÇÃO

As bactérias do grupo coliforme são mundialmente utilizadas como indicadores

de contaminação fecal. Ocorrem naturalmente na microbiota do intestino humano e de
demais animais de sangue quente (APHA, 2005). São indicadores de contaminação
fecal recente e, segundo McCAMBRIGDE & MCMEEKIN (1981), estão sujeitos a
decréscimo populacional, devido aos efeitos das radiações solares e altas
temperaturas de verão.
Os coliformes são determinados rotineiramente em avaliações da qualidade
sanitária de águas superficiais e de distribuição pública. O método de detecção
tradicional de coliformes (NMP por tubos múltiplos) é simples, comparado com os
métodos disponíveis para detecção de patógenos. No entanto, é muito trabalhoso e o
resultado só pode ser obtido após 72 horas de análise. Com o objetivo de facilitar a
determinação deste grupo foram desenvolvidos métodos analíticos rápidos, mais
eficientes e precisos. O método do substrato cromogênico foi testado por
COLQUHOUN et al. (1995) e TIMMS et al. (1996), e aprovado por APHA (1998).

3. CAMPO DE APLICAÇÃO

Este procedimento é aplicável ao Laboratório de Microbiologia.

4. COLETA E ESTOCAGEM

Conforme procedimento PT.MB 001.

5. MATERIAIS NECESSÁRIOS

- Substrato cromogênico (1 ampola);

- Seladora para cartelas;
- Capela de fluxo laminar vertical;
- Lâmpada ultravioleta (366 nm);
- Estufa de cultivo;
- Frasco para coleta (graduado em 100 mL);
- Cartela para selagem;
- Tabela que acompanha o lote de substrato cromogênico.

6. PROCEDIMENTOInoculação

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- Aos 100 mL de amostra, coletada com o frasco apropriado, diluída ou não,
adicionar uma ampola do substrato enzimático Colilert ®.
Nota: Se for necessária a diluição da amostra, verificar procedimento
PT.MB.002.
- Agitar 25 vezes o frasco com inclinação de 45.
- Dispensar o conteúdo do frasco na cartela.
- Encaixar a cartela no molde de borracha da bandeja da seladora e selar,
conforme procedimento PT.MB.006.
- Cultivar o inóculo selado em estufa de cultivo (35 +/-0,5C) por 24 horas.

6.2. Leitura

- Contar o número de células positivas (cor amarela) grandes e pequenas;

- Incidir luz ultravioleta (nm) sobre a cartela e contar as células fluorescentes (cor
lilás) grandes e pequenas.

7. EXPRESSÃO DOS RESULTADOS

7.1. Verificar o NMP/100 mL de coliformes totais correspondentes ao número

de células positivas (amarelas) grandes e pequenas na tabela.

7.2. Verificar o NMP/100 mL de Escherichia coli correspondentes ao número

de células positivas (fluorescência) grandes e pequenas na tabela.
Nota: A tabela para a leitura dos coliformes deve ser trocada todas as vezes que
chegar novas cartelas.

8. DOCUMENTOS DE REFERÊNCIAS

8.1. STANDARD Methods for the Examination of Water and Wastewater. 21.
ed. Washington, D. C.: American Public Health Association, 2005.

8.2. Manual de instruções do fabricante (Colilert® – IDEXX).

8.3. COLQUHOUN, K. O.; TIMMS, S. & FRICKER, C. R. 1995. Detection of

Escherichia coli in potable water using direct impedance technology. Journal of
Applied Bacteriology 79: 635-639.

8.4. TIMMS, S.; COLQUHOUN, K. O. & FRICKER, C. R. 1996. Detection of

Escherichia coli in potable water using direct impedance technology. Journal of
Applied Bacteriology 26: 125-132.

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