07/04/2021 e 14/04/2021

Biologia Molecular e
Biotecnologia
Introdução a Biotecnologia
Meio Ambiente: Recuperação de petróleo,
O que é Biotecnologia? biorremediação, tratamento do lixo,
Biotecnologia é a utilização de agentes purificação da água;
biológicos para prover bens e assegurar Pecuária: Embriões;
serviços, ou seja, é a área que a partir de
métodos científicos utiliza organismos para Saúde: Antibióticos, hormônios e outros,
produzir novos produtos ou formas de vacinas, reagentes e testes de diagnóstico.
organismos e gerar novos serviços.
Alquimia: química da Idade Média (tempos
modernos) que combina a ciência, magia e
arte;
Objetivos: transmutação (metais não preciosos
em ouro), elixir da vida/cura (prolongamento
da vida) de todas as doenças, vida humana Uso de Microorganismos
artificial, enriquecimento rápido da realeza.
Bactérias: maioria dos processos
biotecnológicos
farmacêuticos;
Vírus: produção de vacinas, estudos genéticos
(mapeamento da posição de genes e
construção de novas cepas por recombinação
gênica);

* Cultura de células animais e vegetais:

Busca sempre uma melhor qualidade de vida. comumente utilizado em inúmeros
procedimentos em biotecnologia.
Produtos de Origem Por ser
uma área
Biotecnológico
Agricultura: Adubo compostos, pesticidas,
silagem, mudas de plantas, plantas resistentes
ou com propriedades novas;
Alimentação: Pães, queijos. picles, cerveja,
vinho, proteínas unicelulares, aditivos;
Indústria Química: Butanol, acetona,
glicerol, ácidos orgânicos, enzimas; multidisciplinar, é comum encontrarmos
agrônomos, biólogos, farmacêuticos,
Eletrônica: Biossensores; engenheiros químicos, biomédicos, entre
Energia: Etanol, biogás; outros profissionais. A biotecnologia no Brasil

passou a ser dividida em quatro áreas setoriais:
saúde humana, agropecuária, industrial e
ambiental, sendo cada uma dessas áreas
responsáveis pelo desenvolvimento de
produtos de interesse.
Biotecnologia e
Clonagem Gênica
Com o avanço da biotecnologia, surgiram
importantes técnicas de engenharia
genética que possibilitaram a modificação de
materiais genéticos. A engenharia genética,
então, consiste na manipulação direta dos
genes de um organismo, geralmente através de
técnicas artificiais.
Biotecnologia – PCR
PCR (Reação da Polimerase em Cadeia), é
uma técnica da biologia molecular baseada na
capacidade da enzima DNA
polimerase sintetizar uma nova fita de DNA
complementar a uma fita molde. Com essa
técnica, uma pequena quantidade de fragmento
de DNA pode ser clonada em milhões de
cópias, facilitando a sua detecção, que pode
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ocorrer através da utilização de corantes e
outras técnicas de visualização.
Com esta técnica, cientistas são capazes de:
Identificar potenciais
suspeitos, os quais o DNA
pode combinar com
evidências deixadas
em locais de crimes;
Identificar vítimas de catástrofes;
Estabelecer paternidade ou outras relações
parentais;
Detectar bactérias e outros organismos capazes
de poluir o ar, água, solo e alimentos;
Combinar doadores de órgãos com receptores
em programas de transplantes.
Os princípios por trás da PCR são os mesmos
independentemente da amostra de DNA. São
necessários cinco “ingredientes principais “,
sendo eles:
A amostra do DNA a ser copiado;
Primers (iniciadores): Pequenos trechos de
DNA que iniciam a reação de PCR;
Bases nucleotídicas (A, C, G e T);
Enzima polimerase: Para adicionar as novas
bases de DNA;
Solução tampão: Para garantir as condições
adequadas para a reação.

Diagnóstico Molecular –
Bases da Análise
Molecular
A biologia molecular é uma área da
biotecnologia que surgiu a partir da dedução
da estrutura tridimensional de ácidos nucleicos
e que envolve diversos princípios e técnicas
que permitem analisar o material genético de
organismos. O desenvolvimento desta área
permite diversas aplicações, como o
diagnóstico de doenças genéticas e patologias,
o melhoramento genético animal e vegetal, e a
genética forense.
* Auxilia na descoberta, no diagnóstico e
prognóstico de doenças genética, detectando
alterações genética.
* Detecta agentes causadores de doenças
infecciosas, ex: o PCR em tempo real pode
identificar a presença viral da influenza em
amostras respiratórias com sensibilidade e
especificidade muito mais alta do que as
técnicas comuns.
Diagnóstico Molecular –
Medicina Legal
O diagnostico molecular na medicina legal ou
forense é o esclarecimento com interesse da
justiça, como por exemplo identificação de
pessoas (criminosos, paternidade,
cadáveres, ...).
Ao usar técnicas moleculares que ajudam a
reconhecer sítios com pedaços de DNA com
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vários números de copias em série, podemos
distinguir pessoas.
* Existem sequências que se repetem no nosso
genoma, e o numero de repetições pode variar
de pessoa para pessoa (são herdadas).
A detecção pelo gene, se dá pela avaliação de
sucessibilidade a doenças, e o gene com sua
estrutura alterada pode alterar a função,
podendo promover o aparecimento de doenças,
como por exemplo a anemia falciforme.
Indicação para testes moleculares: doenças
infecciosas, doenças genéticas, cânceres e
identificação de indivíduos.
Vantagens dos
Diagnósticos
Moleculares
Baixa Concentração do Agente: Identifica,
caracteriza e quantifica concentrações
extremamente pequenas de DNA/RNA de
organismos patogênicos;
Versatilidade de Amostra: Sangue periférico,
fluidos corporais (Líquor, pleural, etc) e
tecidos frescos;
Viabilidade do Microorganismo (Momento
da
Coleta): Início da infecção/Fase crônica;
Tempo Curto de Crescimetno do
Organismo para Análise: Genotipagem,
diagnostico rápido e verificação de resistência
a drogas;
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Alta Especificidade;
Extração de Ácidos
Diagnóstico Rápido, Qualificado e
Confiável;
Diagnóstico com Melhor Reprodutibilidade
e Resultados.

Desvantagens dos Nucleicos

Diagnósticos A extração do DNA é um procedimento de
Moleculares rotina para isolar e coletar o DNA, podendo
ser extraído do sangue, sêmen, raiz do dente,
Contaminação da amostra, presença de bulbo piloso, mucosa oral, muco cervical,
inibidores e padronização. ossos e tecidos vegetais (tecidos, células e
fluídos).
Técnicas Moleculares Existem
vários
PCRs: Reação em Cadeia da Polimerase protocolos
(detecção de
de DNA e RNA); extração
FISH: Hibridação in situ por Fluorescência de DNA e
(detecção de anomalias cromossômicas por RNA
sondas fluorescentes de DNA); descritos
na
CLONAGEM: Cópia da informação genética literatura,
de um gene, célula ou mesmo indivíduo e a escolha do mais adequado deve levar em
(ovelha Dolly: primeiro mamífero clonado a consideração a molécula desejada (DNA e/ou
partir de uma célula somática, em 1997). RNA), o tipo de amostra, o grau de pureza e o
rendimento desejado e a disponibilidade de
recursos para a sua realização.

Coleta de Materiais
Biológicos
Na hora de fazer a coleta, precisamos fazer um
preparo diferenciado e sempre usar EPI’s
laboratoriais. Importante:
Coleta Imediata: Quanto mais fresco melhor;
Etapas da Extração do
DNA
Os detalhes vão depender do tipo de amostra e
de qualquer substância que pode interferir com
a extração e análise.
Lise das Células: A lise celular é o processo
de ruptura ou dissolução da membrana celular
que leva à morte da célula e liberação de seu
conteúdo;

Quantidade: Deve ser aceitável dependendo Precipitação de Proteínas e do DNA: Essa é

do foco analítico; uma etapa que o DNA é separado do restante
dos componentes celulares, com o uso de
Conservação: Métodos para manter a fenol/clorofórmio para remover as proteínas
viabilidade das amostras (integridade dos do DNA,
ácidos nucleicos). com a
adição
de sais

que vão interromper as ligações de hidrogênio
entre a água e a molécula de DNA
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A eletroforese em gel de agarose, que permite
a resolução de ácidos nucléicos, um método
comparativo;
A utilização do fluorímetro, um equipamento
que trabalha com alterações nas características
de fluorescência na presença de DNA, um
método quantitativo.

Depois de tudo isso o DNA é precipitado,

separando-o das proteínas, utilizando
isopropanol ou etanol, e depois, com o uso da
centrifuga, o DNA forma um pellet no fundo
do

Técnicas de Biologia
Molecular e Aplicações
PCR convencional; Genética forense;
PCR em Tempo Real; Teste de
paternidade;
recipiente.
Nested PCR; Expressão gênica;
Etapas da Extração do PCR array; Transgênicos;

RNA Microarray; Doenças genética;

Hibridização; Exames genético;
A extração do RNA é similar a extração do
DNA, só que com um protocolo bem mais Multiplex; Pesquisa;
cuidadoso, pois o RNA é muito mais instável.
Eletroforese; Diagnóstico clínico.

Quantificação e Pureza
do DNA/RNA
A quantificação envolve a estimativa da
concentração do DNA/RNA obtida, que
depende do tipo e quantidade de amostra
disponível. Dentre os métodos disponíveis
para quantificação, há:
A espectrofotometria, realizada por medição
da quantidade de luz absorvida pelo DNA;