31/03/2020
Genética Humana
Citogenética
Introdução
Os cromossomos são estruturas filamentosas
localizadas no interior do núcleo das células. Os
cromossomos contêm os genes que são os
transmissores das características hereditárias, sendo
formados de DNA e proteínas.
O conhecimento da estrutura dos cromossomos foi
possível pelo uso do microscópio, por meio de
técnicas de coloração especial, que coram
seletivamente o DNA, cada cromossomo é
individualmente identificado. Os cromossomos
podem ser visualizados de forma melhor durante a
divisão celular, que é quando se apresentam
condensados ao máximo, devido ao
superenrolamento (ou empacotamento) do DNA.
Nesse período, os genes não podem ser transcritos,
onde os cromossomos não se apresentam uniformes
ao longo de seu comprimento; cada cromossomo
apresenta uma constrição primária, também
denominada centrômero.
O centrômero divide o cromossomo em dois braços:
o braço curto, designado por p e o braço longo q. A
ponta ou a extremidade terminal de cada
cromossomo denomina-se telômero. Os telômeros
desempenham um papel essencial, lacrando as
pontas dos cromossomos e mantendo sua
estabilidade e integridade.
Núcleo Interfásico
O núcleo interfásico recebe esta denominação, pois,
só pode ser observado durante a interfase, sendo
composto por:
●Carioplasma ou nucleoplasma: liquido do núcleo,
constituída principalmente de água, proteínas e
outras subs;
●Carioteca: ou membrana plasmática, possuindo
duas membranas nucleares, sendo porosa e
apresentando ribossomos aderidos;
●Poro Nuclear: é o espaço entre a carioteca,
permitindo o transporte de moléculas através do
envoltório nuclear;
●Nucléolo: são organelas presentes em células
eucarióticas, com função de coordenação do
processo reprodutivo das células e do controle de
processos celulares básicos, sendo eles +
condensado.
Em relação ao grau de condensação, a cromatina é
classificada em:
●Eucromatina: menos condensada, tendo genes
transcricionalmente ativos;

●Heterocromatina: mais condensada, tendo genes
transcricionalmente inativos.
Classificação Morfológica dos
Cromossomos
Morfologicamente, os cromossomos são
classificados de acordo com a posição do
centrômero. Se este estiver localizado
centralmente, o cromossomo é denominado
metacêntrico; se próximo à extremidade, é
acrocêntrico; se o centrômero estiver em uma
posição intermediária, o cromossomo é
submetacêntrico.
Há um quarto tipo, cromossomo telocêntrico,
quando posição do centrômero é terminal. Esse tipo
de cromossomo não é encontrado na espécie
humana.
Os cromossomos acrocêntricos do conjunto
cromossômico humano apresentam, nas
extremidades dos seus braços curtos, apêndices de
forma pedunculada, denominados satélites,
responsáveis pela formação dos nucléolos no
período de interfase celular, contendo múltiplas
cópias repetidas dos genes para RNA ribossômico.
Os cromossomos individuais diferem não somente
na posição dos centrômeros, mas também no seu
comprimento total. Os cromossomos humanos são
classificados com base em três parâmetros:
↪Comprimento ou tamanho do cromossomo;
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↪Posição do centrômero e presença;
↪Ausência de satélites.
Cariótipo Humano
Um cariótipo é uma imagem da composição
cromossômica. Substâncias químicas se ligam a ela,
e desmontam, pelos microtúbulos do fuso. Sem um
fuso funcional, a divisão celular é interrompida em
pró-metáfase e metáfase.
Suas formas condensadas mostram claramente os
tamanhos relativos dos cromossomos e a localização
do centrômero. Essas características podem então ser
usadas para arranjar pares de cromossomos
homólogos em um
modelo
padronizado
denominado
canot1po.
Técnica Clássica para o Estudo dos
Cromossomos Humanos
A técnica clássica mais usada é a microtécnica ou
microcultura, que é a cultura de leucócitos in vitro,
desenvolvendo-se da seguinte maneira:
↪Uma pequena amostra de sangue (5 mL) é colhida
e misturada a um anticoagulante.
↪Duas a cinco gotas do sangue total são colocadas
em um frasco contendo um meio de cultura
apropriado, constituído por soro proteico (soro com
um mínimo de 10% de proteínas, soro fetal bovino
e/ou soro humano), antibióticos e fitoemoaglutinina
(que estimula a divisão dos linfócitos T).
↪Esse meio de cultura é incubado em estufa a 37 ºC,
durante 72 h, tempo no qual a taxa mitótica dos
leucócitos atinge o seu máximo e um número
razoável de células está em metáfase.
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↪Após esse tempo, acrescenta-se uma solução de
colchicina à cultura, que é deixada na estufa por
mais 2 h.
*A colchicina interfere na formação do fuso
acromático, ligando-se especificamente à tubulina
dos seus microtúbulos e impedindo a divisão dos
centrômeros. Assim, a colchicina interrompe o
processo mitótico na metáfase. A separação das
cromátides-irmãs, sem divisão dos centrômeros,
ocorre mesmo na presença da colchicina, o que pode
ser visualizado em microscópio óptico, onde os
cromossomos se apresentam em forma de X com
braços de tamanhos iguais ou diferentes.
↪Após a colchicinização, o material do frasco é
submetido à centrifugação por alguns minutos. O
sobrenadante é desprezado e ao sedimento adiciona-
se água destilada ou uma solução hipotônica de
cloreto de potássio, a qual penetra nas células,
inchando-as e possibilitando uma dispersão maior
dos cromossomos.
↪Cerca de seis minutos depois, o material é
submetido novamente à centrifugação, para
sedimentação das células, desprezando-se o
sobrenadante.
↪As células são, então, fixadas (mortas) com uma
solução de metanol e ácido acético, na proporção de
3:1.
Técnicas de Bandeamento
Cromossômico
↪Esse material é distribuído sobre lâminas e corado
adequadamente, para análise Os cromossomos do genoma humano podem ser
identificados citologicamente por vários
procedimentos de coloração. Os principais
procedimentos utilizados em laboratórios clínicos e
de pesquisa são as técnicas de bandeamento
cromossômico são:
●Bandas G: Essa técnica é mais utilizada por ser
mais
simples e
por
dispensar
o uso de

microscópio de fluorescência. Os cromossomos são

submetidos à digestão pela tripsina, que desnatura as
proteínas cromossômicas, sendo corados com
Giemsa (daí o nome de bandas G). Os cromossomos

mostram um padrão de bandas claras e escuras, no
qual as faixas escuras correspondem às bandas Q
brilhantes.
●Bandas R.: Na obtenção dessas bandas, os
cromossomos são pré-tratados com calor para
obtenção de desnaturação controlada e, depois,
corados com Giemsa. O resultado de bandas claras e
escuras representa o inverso daquele produzido
pelos bandeamentos Q e G, daí a sua designação de
bandas reversas (R).
●Bandas Q.: As primeiras bandas foram observadas
quando as lâminas, contendo o material com os
cromossomos, foram tratadas com quinacrina-
mostarda, uma subs. fluorescente (microscopia
fluorescência). Os cromossomos submetidos a esse
tratamento apresentam faixas ou bandas com
diferentes intensidades de fluorescência (bandas
brilhantes e opacas), sendo tal padrão característico
e constante para cada par cromossômico.
*Essa técnica apresenta uma vantagem específica na
identificação do cromossomo Y, que se cora
intensamente com quinacrina, mesmo quando a
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especificamente as regiões organizadoras dos
nucléolos, ou seja, as constrições secundárias dos
cromossomos com satélites, como é o caso dos
cromossomos dos grupos D e G (acrocêntricos -
exceto o Y). Essas regiões constituem o centro de
processamento para a produção de ribossomos e de
RNA ribossômico
●Ban
deam
ento
G ou
R de
alta resolução: Também chamado de padrão de
bandas de prometáfase, é obtido por meio do

padrão de bandas G ou R, que cora cromossomos em

célula está em interfase.
estágio inicial da mitose, quando os cromossomos se
●Bandas C: Nessa técnica, a coloração também é encontram na prófase ou pró-metáfase (maior
feita com Giemsa, após o pré-tratamento com número de bandas).
hidróxido de sódio (NaOH – pH básico). Com esse
método, são coradas regiões específicas, isto é,
aquelas em que o cromossomo apresenta DNA
altamente repetitivo, como nas regiões dos
centrômeros, correspondendo à heterocromatina
constitutiva, motivo de sua denominação banda C
●Band as NOR.:
Essas bandas
coram
●Síti
o
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Frágil: É a cultura pobre em timidina e ácido fólico,
onde no sítio frágil do cromossomo X para
diagnóstico da Síndrome do X frágil (retardo mental
comum em homens).

Técnicas de Citogenética
Molecular
Um dos mais importantes avanços tecnológicos em
citogenética molecular dos últimos anos foi o
desenvolvimento da tecnologia da múltipla
hibridação in situ por fluorescência (FISH). Essa
tecnologia é usada para detectar a presença ou
ausência, o número de cópias e a localização
cromossômica de uma determinada sequência de
DNA nos cromossomos de um indivíduo e
discrimina em 27 diferentes tons (filtos/softmare),
caracterizando também os cariótipos complexos.
↪A - Núcleo interfásico de vilosidade coriônica -
TRISSOMIA 21 (em vermelho os 3 cromossomos
21, e em verde os 2 cromossomos 13);
↪B - Núcleo interfásico de líquido amniótico -
NORMAL (em vermelho os 2 cromossomos 21 e em
verde os 2 cromossomos 13);
↪C - Núcleo metafásico mostrando TRISSOMIA X
(em vermelho os 3 cromossomos X);