AULAS PRÁTICAS – DOSAGENS BIOQUÍMICAS

PROF. DRA VANESSA LEIRIA CAMPO

vanessa.campo@baraodemaua.br
 DOSAGEM DE GLICOSE

INDICAÇÃO DO EXAME: A determinação da glicose em amostras de sangue é

útil na avaliação do metabolismo de carboidratos.
 Materiais para a dosagem

Soro do paciente Kit de reagentes Tubos de ensaio

para o teste

Pipetas
Banho-maria Espectrofotômetro
Roteiro
B P T
 Soro do paciente
Dosagem de glicose= ?

Valores de absorbância detectados:

Padrão: 0,507
Amostra: 0,700

Glicose mg/dL= 0,7/ 0,507 x 100 mg/dL= 138,06

- Qto mais intensa a coloração, maior

é o valor de Abs e maior é a concentração de glicose.
 Teste de Detecção de Glicose no Sangue (Plasma)
- Método colorimétrico
PRINCÍPIO

A glicose existente na amostra é oxidada pela enzima glicose oxidase formando

ácido glucônico e peróxido de hidrogênio. Este oxida o reagente fenólico na
presença da 4-aminoantipirina, sob ação catalítica da peroxidase, produzindo um
composto rosa (quinonimina), que apresenta um máximo de absorção em 505 nm.
A intensidade de cor é proporcional à concentração de glicose na amostra.
Mecanismo de reação com a enzima Glicose Oxidase (GOD)

Glicose oxidase

GLICOSE Ácido glicônico

peroxidase

4-aminoantipirina fenol quinonimina

FAD é o cofator da reação

Flavina- par-radical
hidroperóxido
 2° Etapa

N O
OH H3C N
N O 2H2O2 Peroxidase 4H2O
H3C N + + +
Peróxido
de Hidrogênio
H3C N
H3C NH2
Fenol

4-Aminoantipirina
O
Antipirilquinonimina

Composto
Rosa
O ESPECTRO ELETROMAGNÉTICO
 ESPECTROSCOPIA NO UV-VIS
Absorção no UV: 200 nm-380 nm; Vis: 380 nm- 780 nm

Absorbância

I0 = Intensidade da energia radiante que incide na amostra

I = Intensidade da luz transmitida da amostra
• Região de absorbância: entre A=0 e A=2.
 Absorção UV-VIS
Substância contendo insaturações (grupos cromóforos) – maior absorção
 Como ocorre a absorção de radiação UV/ Vis?
 TRANSIÇÃO ELETRÔNICA

- Absorção de radiação eletromagnética (energia do fóton) por uma molécula induz à transições
eletrônicas um elétron pode absorver um fóton e ser excitado para um nível de energia
mais alto, geralmente um orbital antiligante.

Transições eletrônicas mais comuns

Orbitais antiligantes

Orbital não ligante

Orbitais ligantes
 LEI DE LAMBERT-BEER

 Absorbância é diretamente
proporcional à concentração
da espécie absorvedora
de luz.
Quanto maior a concentração da amostra, maior é a Absorbância
 SIGNIFICADO CLÍNICO

 Valores elevados de glicose ocorrem nos vários tipos de diabetes

primárias, nos estados de intolerância à glicose e nas diabetes
secundárias a várias doenças (hipertireoidismo, hiperpituitarismo e
hiperadrenocorticismo, entre outras).

 Valores diminuídos de glicose ocorrem nas hipoglicemias devido

a várias causas. Quando a ocorrência de sintomas de hipoglicemia
é relacionada à alimentação, duas formas de hipoglicemia podem
ser definidas: hipoglicemia do jejum e pós-prandial.
DOSAGEM DE TRIGLICERÍDEOS E COLESTEROL

INDICAÇÃO DO EXAMES:
 A determinação dos triacilglicerídeos em amostras de sangue é empregada na
abordagem laboratorial das hiperlipidemias.
 A determinação do colesterol em amostras de sangue é útil na investigação das
dislipidemias e faz parte da avaliação do risco de doença coronariana isquêmica.
DOSAGEM DE TRIGLICERÍDEOS: Materiais para a dosagem

Kit de reagentes
Soro do paciente para o teste Tubos de ensaio

Pipetas
Banho-maria Espectrofotômetro
Roteiro
B P T
 Soro do paciente
Dosagem de triglicerídeos= ?

Valores de absorbância detectados:

Padrão: 0,420
Amostra: 0,480

Triglicerídeos mg/dL= 0,480/0,420 x 200 mg/dL= 228,5

- Qto mais intensa a coloração, maior

é o valor de Abs e maior é a concentração de triglicerídeos.
 1. DOSAGEM DE TRIGLICÉRIDEOS

- Método colorimétrico
PRINCÍPIO

Os triglicérides são hidrolisados pela lipoproteína lipase produzindo glicerol livre, o

qual é transformado em glicerol-fosfato pela ação da glicerolcinase. O glicerol
fosfato é oxidado à dihidroxiacetona e peróxido de hidrogênio pela glicerol-P-
oxidase. O peróxido de hidrogênio reage com a 4-aminoantipirina e 4-clorofenol.
sob a ação catalítica da peroxidase, produzindo um composto rosa (quinonimina),
que apresenta um máximo de absorção em 505 nm.
A intensidade de cor é proporcional à concentração de triglicérides na
amostra.
Reações envolvidas no ensaio colorimétrico:

H2O2
 Mecanismos de Reações

Lipoproteína
lipase

Glicerol
Triglicerídeo

1,3-dihidróxiacetona Glicerol-3-fosfato

Quinonimina
Quanto maior a concentração da amostra, maior é a Absorbância
 SIGNIFICADO CLÍNICO

- A determinação dos triacilglicerídeos ocupa lugar de destaque no

laboratório clínico moderno porque é dado importante e necessário
para a classificação e fenotipagem das hiperlipoproteinemias. É
também de importância a íntima correlação que se observa entre a
hipertrigliceridemia e o aumento do risco coronariano nas mulheres.
As causas de elevação dos triacilglicerídeos são as várias doenças
de lípides chamadas hiperlipidemias ou hiperlipoproteinemias.
Nestas, sejam de causa primária ou secundária, ocorre elevação dos
triacilglicerídeos nos tipos I, IIb, III, IV e V.

- As hiperlipidemias podem estar associadas a doença

cardiovascular e ocorre comumente no diabetes, alcoolismo,
pancreatite, doença do armazenamento do glicogênio, síndrome
nefrótica, hipotireoidismo, gravidez, uso de anticoncepcionais e
mieloma múltiplo, entre outras doenças.
DOSAGEM DE COLESTEROL: Materiais para a dosagem

Kit de reagentes
para o teste Tubos de ensaio
Soro do paciente

Pipetas
Banho-maria Espectrofotômetro
Roteiro
B P T
 Soro do paciente
Dosagem de colesterol= ?

Valores de absorbância detectados:

Padrão: 0,405
Amostra: 0,390

Triglicerídeos mg/dL= 0,390/0,405 x 200 mg/dL= 192,5

- Qto mais intensa a coloração, maior

é o valor de Abs e maior é a concentração de colesterol total.
2. DOSAGEM DE COLESTEROL TOTAL
- Método colorimétrico
PRINCÍPIO
Os ésteres de colesterol existentes na amostra são
hidrolisados pela enzima esterase produzindo o
colesterol livre. A enzima colesterol oxidase, em
presença de oxigênio, catalisa a oxidação do
colesterol livre, produzindo o peróxido de hidrogênio.
A enzima peroxidase catalisa a oxidação do reagente
fenólico pelo peróxido de hidrogênio formado, em
presença de 4-aminoantipirina, produzindo um
composto rosa (4-p-benzoquinona-monoimino-
fenazona) com máximo de absorção em 505 nm.
A intensidade de cor é proporcional à
concentração de colesterol na amostra.
Reações envolvidas no ensaio colorimétrico:
 Mecanismos de Reações

Éster de colesterol Colesterol

Colest-5-en-3-ona

Quinonimina
 SIGNIFICADO CLÍNICO

- O grande dilema da aterosclerose é que ela é um processo silente. Está

ativa em todos os indivíduos e permanece sem qualquer manifestação por
décadas e, subitamente se manifesta através de dor toráxica, infarto agudo
do miocárdio ou morte súbita. Estudos demonstraram uma correlação
positiva entre os níveis do colesterol, mais precisamente do colesterol LDL e
o risco de doença coronariana isquêmica (DCI). Ao mesmo tempo foi
evidenciado que os níveis de colesterol HDL, são inversamente proporcionais
ao risco de DCI.
- Valores aumentados de colesterol são encontrados na nefrose,
hipotireoidismo, doenças colestáticas do fígado e nas hiperlipoproteinemias
dos tipos IIa, IIb e III.
- Níveis diminuídos são encontrados no hipertireoidismo, doenças
consuptivas, desnutrição crônica, anemia sideroblástica e talassemia.
Doenças hepáticas graves podem reduzir drasticamente os níveis de
colesterol.
- Os níveis do colesterol sérico, juntamente com a hipertensão e o fumo,
constituem fatores de risco de aterosclerose e DCI.
 Estrutura de uma lipoproteína típica

Lipoproteínas
Plasmáticas
Valores de referência