I INTRODUO

Os efeitos benficos de fibras dietticas tm atrado bastante ateno. Estes benefcios so reconhecidos no s por promover uma reduo energtica na dieta, com aumento no bolo fecal ou na freqncia de defecao, mas tambm como uma medida preventiva contra doenas que ocorrem no trato digestivo inferior, como por exemplo, diverticulite ou cncer de clon. Os efeitos das fibras dietticas no metabolismo de lipdios sricos e hepticos tambm tem sido extensivamente estudados.

Uma destas fibras, a Quitosana, que uma fibra natural de origem animal, apresenta propriedades benficas superiores a outras fibras dietticas, tanto sintticas quanto naturais.

A Quitosana um polmero constitudo de unidades repetidas de Glicosamina, que pode ser obtido pela desacetilao da quitina, que encontrada naturalmente nas paredes celulares de fungos e forma a maior proporo dos exoesqueletos de insetos e crustceos. A Quitosana apresenta a propriedade de ser solvel em cidos orgnicos e minerais diludos, mas precipita a um valor de pH superior a 6.0, funcionando assim como uma resina trocadora de ons. Esta propriedade difere a Quitosana das outras fibras at ento conhecidas, como por exemplo, a celulose, Guar, Pectina, Alginato de sdio, Colestiramina, etc. Duas das propriedades farmacolgicas da Quitosana que vem sendo bastante explorada tanto pela comunidade cientfica mundial a sua capacidade de auxiliar na reduo de peso corporal atravs da captura de gordura ingerida e a sua capacidade de reduo dos nveis de colesterol LDL, sem que a mesma afete significamente os teores de colesterol HDL e outros nutrientes essenciais. Tais propriedades sero descritas, a seguir, em uma reviso bibliogrfica de revistas internacionais e livros especializados.

II - PROPRIEDADES ANTIOBESIDADE E ANTICOLESTEROLMICA DA QUITOSANA - RESUMOS DO CHEMICAL ABSTRACT

Para entender o mecanismo pelo qual a quitosana atua no organismo, essencial uma apreciao sobre os lipdios, incluindo as suas funes no corpo, como so digeridos e absorvidos e sua distribuio no sangue. Apesar de serem uma excelente fonte de calorias, eles apresentam diversas funes no organismo. Os lipdeos so tambm componentes estruturais das membranas celulares e dos sistemas nervoso e circulatrio e esto envolvidos em uma grande variedade de funes hormonais e imunolgicas em todos os animais. As gorduras dietticas so compostas por triglicerdeos (triacilgliceris) de vrios cidos graxos, o qual devem ser quimicamente modificados antes da absoro pelo organismo. O processo de digesto representa a forma pela qual as gorduras dietticas so quebradas em molculas menores. Quando essas gorduras esto presentes no trato gastrintestinal, so expostas as lpases (enzimas) gstricas e intestinais. Apesar do estomago atuar para iniciar o processo de digesto das gorduras, o mesmo ocorre principalmente no intestino delgado. As lpases (pancreticas intestinais quebram sucessivamente os triglicerdeos em cidos graxos livres e monoacilgliceris, deixando o cido graxo central do triglicerdeo original ligado a cadeia de glicerol). A maior parte da gordura ingerida na dieta absorvida; menos de 5% das gorduras ingeridas no so absorvidas. A digesto e absoro ocorrem atravs da ao das lpases, que so enzimas que quebram as ligaes qumicas dos triglicerdeos. Essas enzimas consistem principalmente de lpase pancretica, enquanto as lpases gstrica e lingual possuem um papel secundrio. As lpases pancreticas quebram um cido graxo de cada vez. A ao dessas enzimas produz principalmente cidos graxos, 2-monoacilgliceris e diacilgliceris. Os sais biliares, os quais so produzidos a partir de colesterol, pigmentos biliares e eletrlitos so secretados pelo duto biliar. Esses sais atuam, como agentes

2 emulsificantes que ajudam a dispersar as gotas de gorduras, permitindo as lpases a atuarem sobre as gorduras. Os sais biliares atuam com um detergente, dispersando os lipdeos (gorduras), ou seja, so essenciais para a emulsificao das gorduras dietticas. Aps a digesto das gorduras, os sais biliares so reabsorvidos na poro baixa do intestino para a circulao enteroheptica, retornando para o fgado para reciclagem na bile. Esse ciclo, denominado circulao enteroheptica, fornece um sistema eficiente para manter um suprimento adequado de sais biliares. No curso de 24 horas, de 11 a 40 gramas de sais biliares podem ser secretados no bolo digestivo pela circulao enteroheptica, que o fator mais importante para o controle da secreo da bile heptica. Esse processo ocorre de 6 a 15 vezes por dia. Em resposta a presena de gorduras dietticas no duodeno, ocorre a liberao de colecistoquinina (CCK) que contrai a vescula biliar resultando na secreo de sais biliares no duodeno, enquanto estimula tambm a liberao de enzimas pancreticas, resultando em aproximadamente 3 ciclos de secreo de sais biliares por refeio. Apesar da sntese de cidos biliares normalmente compensar a perda desses cidos nas fezes, a taxa de produo de cidos biliares s pode aumentar 2 a 3 vezes. Desta forma, quando ocorre um aumento na quantidade de cidos biliares excretados, pela ligao com a quitosana por exemplo, a quantidade de cidos biliares disponvel diminui, resultando em uma reduo na taxa de secreo biliar. Aps a interao da lpase com os sais biliares, os produtos da digesto lipdica se apresentam para a absoro na forma de micelas, formadas pela ao detergente dos sais biliares, auxiliados pelo fosfolipdeos. Essas micelas se quebram na mucosa intestinal, liberando os produtos da digesto dentro das clulas intestinais. Aps absoro, os cidos graxos livres e os monoglicerdeos so recombinados para formarem triglicerdeos, os quais so subseqentemente incorporados nos quilomicrons, que consistem em triglicerdeos e steres de colesterol envoltos por uma cobertura de protenas. Apesar de existirem evidncias cientficas abundantes da ao da quitosana sobre as gorduras dietticas e sais biliares, ainda no se sabe o mecanismo exato pelo qual a quitosana age no organismo. Entretanto, diversos

3 modelos foram propostos, com bastante semelhana entre alguns e praticamente um consenso entre os resultados obtidos, com os pesquisadores seguindo uma mesma linha de raciocnio para explicar a ao da quitosana no organismo. Estudos recentes sobre a reduo do colesterol em animais sugerem que uma forte atrao inica entre a quitosana e os sais biliares podem ser os principais fatores para a reduo do colesterol nos experimentos. Devido necessidade de sais biliares e colesterol para a absoro de gorduras, pesquisadores sugerem que a ligao inica da quitosana com esses compostos pode inibir a formao das micelas no intestino. Diversos estudos baseados nessa hiptese sugerem que as cargas catinicas dos grupamentos amino da quitosana se ligam s cargas negativas dos cidos biliares e dos cidos graxos, resultando em um efeito hipocolesterolmico. Alm de aumentar a excreo de colesterol, essa ligao inica resulta na excreo de micelas, juntamente com fosfolipdeos,

monoglicerdeos e cidos graxos associados. O aumento de excreo de cidos biliares acarretar em um aumento da oxidao de colesterol no fgado, para compensar a perda dos cidos que no foram reabsorvidos atravs da circulao enteroheptica. Essa oxidao resultar em uma reduo efetiva dos nveis de colesterol. Uma das hipteses sugere que no ambiente altamente cido do estmago (pH 1 e 3) a quitosana dissolve-se, tornando-se altamente protonada e podendo teoricamente se ligar aos cidos graxos livres produzidos pela lipase gstrica. Entretanto, a baixa atividade da lpase gstrica no estmago evita a liberao significativa de cidos graxos dos triglicerdeos. Outra hiptese postula que a ligao ou captura dos cidos biliares, colesterol e cidos graxos ocorre principalmente no intestino delgado,

especificamente no duodeno e possivelmente no jejuno. Diversos estudos sugerem que, no intestino delgado, com um aumento gradual do pH, os grupos amino da quitosana, carregados positivamente, podem se ligar aos cidos graxos e biliares em micelas mistas. Esse processo pode resultar, numa ligao da micela inteira quitosana, ou a ruptura da micela pela remoo dos cidos biliares ou graxos. Nesse ambiente de elevao progressiva do pH, os cidos biliares podem

4 se ligar mais do que os cidos graxos, devido ao alto grau de ionizao em pH neutro. Entretanto, quando a quitosana se liga s micelas ou rompe-as, pode levar a uma reduo na captura de lipdeos no intestino delgado, acarretando um aumento da excreo de lipdeos, sais biliares e colesterol. Um mecanismo mais compreensivo foi proposto recentemente por um grupo de pesquisadores em um encontro cientfico (EUCHIS) no final da dcada de 90. Essa nova proposta mecanstica sugerem que a ligao da quitosana consiste na emulsificao dos lipdeos no estmago, com atrao inica dos lipdeos para a quitosana no duodeno, e/ou hidrlise enzimtica e formao de micelas que so capturadas pela quitosana no intestino delgado.

CAPTURA DE GORDURAS

Estudos recentes revelam ainda a capacidade nica da quitosana de capturar gorduras dietticas em experimentos in vitro e in vivo, prevenindo a absoro pelo sistema digestivo. Alguns ensaios clnicos revelam a capacidade da quitosana de se ligar a outras misturas de sais biliares, dodecil sulfato, bile bovina e outras microemulses mistas. Os efeitos da quitosana sobre o peso corporal, excreo de lipdeos e presso arterial tem sido observados em diversos ensaios com animais. De acordo com os resultados obtidos, alguns pesquisadores sugerem que os efeitos anti-obesidade obsevados em ratos se devem principalmente a inibio da

absoro intestinal das gorduras dietticas. Outros estudos revelam que os animais alimentados com quitosana de baixa viscosidade apresentam redues nos nveis de triglicerdeos plasmticos e nas concentraes do colesterol total em relao ao controle, enquanto que as dietas com quitosanas de mdia e alta viscosidade reduzem o colesterol total e elevam o colesterol HDL, embora em pequena quantidade. Desta forma, parece que junto com a reduo da ingesto de alimentos e reduo do peso corporal, a dieta com quitosana geralmente melhora a relao do colesterol HDL/coleterol total em relao ao controle. Esse ltimo efeito se deve mais a uma reduo do colesterol total do que a uma

5 elevao do colesterol HDL. Outro aspecto de destaque foi a reduo da digestibilidade das gorduras dietticas observado em experimentos com frangos que foi de 8% em mdia comparado com o controle e uma reduo significativa do peso corporal e da ingesto de alimentos. Alguns pesquisadores ressaltam que esses achados exaltam a utilidade da quitosana como suplemento para controle de peso corporal, uma vez que o excesso de peso e a obesidade j so questes de sade pblica com altos custos e que est tomando propores epidmicas. Ensaios clnicos recentes utilizando a quitosana na dieta de pacientes obesos mostraram uma significativa reduo do peso corporal, da presso arterial, do colesterol e dos triglicerdeos em relao ao controle. A reduo mdia foi de 7,19kg no peso corporal e de 23,3% no colesterol total. De acordo com os dados obtidos, os pesquisadores alertam que os resultados podem ser comprometidos pela ocorrncia de uma dieta no supervisionada ou altamente calrica ou rica em gorduras acompanhada por uma baixa dosagem de quitosana que pode comprometer a restrio calrica provocada pela ao da quitosana. Os melhores resultados podem ser obtidos com uma associao de uma dosagem adequada de quitosana com uma dieta balanceada.

PRINCIPAIS ESTUDOS CLNICOS

Em 1980, Sugano e colaboradores (M. Sugano, T. Fujikawa, Y. Hiratsuji, K. Nakashima, N. Fukuda and Y. Hasegawa, Um Novo Uso de Quitosana como um Agente Hipoclolesterolmico em Ratos, Am. J. Clin. Nutri., 33, 787-793, 1980), relataram que quando a Quitosana administrada na forma de uma mistura de oligossacardeos de cadeia polimrica maior do que 6 unidades de glucosamina, em ratos alimentados com uma dietas ricas em gorduras, previne-se o aumento de colesterol e de triglicerdeos no plasma. No entanto, oligossacardeos de cadeia polimrica menor do que 5 unidades de glucosamina no apresentam atividade. O efeito na reduo de colesterol foi

6 avaliado pela observao de que a suplementao de Quitosana (2 5 %) em ratos alimentados com uma dieta rica em gorduras durante 20 dias resulta em uma reduo significativa (de 25 a 30%) do colesterol plasmtico, sem influenciar a quantidade de ingesto de alimento ou crescimento das cobaias. Observou-se ainda a preveno do aumento de colesterol e triglicerideos no fgado. A suplementao de Quitosana em doses maiores do que 10% reduz efetivamente a concentrao de colesterol no plasma, no entanto o crescimento das cobaias retardado.

Em 1983 Nauss e colaboradores (Nauss, J.L., Thompson, J.L. and Nagyvary, J., Ligao de lipdios micelares a Quitosana, Lipids, Vol. 18(10), 1983) realizaram um estudo para determinar a capacidade ligante da Quitosana (quitina parcialmente desacetilada) utilizando solues micelares de sais biliares, sulfato de dodecila, bile bovina natural e microemulses artificiais. A

estequiometria foi determinada atravs de separao da fase slida por filtrao ou centrifugao. As maiores variveis que exerceram influencia na capacidade ligante foram o pH e a ligao inica, sugerindo que as interaes so de natureza inica. Observou-se neste trabalho, que sobre condies otimizadas, a Quitosana pode se ligar formando um co-precipitado com 4-5 vezes o seu peso com todos os agregados de lipdios testados. Esses resultados demonstram que a Quitosana pode ser utilizada em aplicaes nutricionais e farmacuticas. A anlise dos componentes a partir dos precipitados obtidos com micro-emulso e bile bovina mostraram uma seletividade significativa causada por interaes hidrofbicas.

Em 1988 Jennings e colaboradores (Jennings, C.D., Boleyn, K., Bridges, S.R., Wood, P.J. and Anderson, J.W., Uma comparao da Reduo Lipdica e os Efeitos na Morfologia Intestinal em Ratos da Colestiramina, Quitosana e Aveia, Proceedings of The Society for Experimental Biology and Medicine 189, 13-20 (1988) realizaram um estudo comparativo da capacidade de reduo de lipdios entre a colestiramina, a Quitosana e aveia. A colestiramina usada em

7 humanos pode contribuir para formao de adeno carcinoma de clon; Quitosana e goma de aveia foram estudadas em ratos para determinar o seu potencial para uso em humanos. A comparao desses compostos foi feita alimentando-se 3 grupos de 10 ratos (Sprage-Dawley) com 5% do composto a ser testado, 1% de colesterol e 0,2% de cido clico; outros dois grupos foram alimentados com celulose, e um deles com 1% de colestrol e 0,2% de cido clico. Todos os grupos ingeriram quantidades similares de alimentos e apresentaram ganho de peso similar. A ingesto de colesterol causou um aumento de 3 vezes na quantidade de lipdios e de 10 vezes na concentrao de colesterol. Colestiramina, goma de aveia e Quitosana apresentaram reduo significativa do colesterol no fgado, com a colestiramina promovendo nveis idnticos ao do grupo no alimentado com colesterol. A Quitosana e a goma de aveia reduziram significativamente o colesterol srico em comparao com o grupo alimentado com celulose. Das substncias testadas, a goma de aveia foi a menos efetiva. Os nveis de hemoglobina e ferro sricos apresentaram resultados similares em todos os grupos, exceto para o grupo que ingeriu aveia, o qual apresentou uma reduo de ferro srico. Nenhuma das fibras (Quitosana e Aveia) produziram mudanas na mucosa alm do aumento distal do intestino delgado produzido pela ingesto de aveia. Como concluso, os autores confirmam que a Quitosana apresentou efeitos de reduo de lipdios similares a colestiramina sem no entanto exibir mudanas malficas na mucosa intestinal.

No mesmo ano, Sugano e colaboradores (M. Sugano, S. Watanabe, A. Kishi, M. Izume and A. Ohtakara, Ao Hipocolesterolmica da Quitosana com Diferentes Viscosidades em Ratos, Lipids 23, 187-191, 1988) estudaram a relao entre a eficcia hipocolesterolmica e o peso molecular mdio da quitosana em ratos alimentados com uma dieta enriquecida com 0,5% de colesterol. Vrias preparaes de Quitosana, a uma concentrao de 5%, com o mesmo grau de desacetilao, mas com diferentes pesos moleculares mdios, preveniram completamente o aumento dos nveis de colesterol srico. Da mesma

8 maneira, a uma concentrao de 2%, Quitosanas com viscosidades extremas (alta e baixas) exercerem a mesma atividade redutora de colesterol. No entanto, oligmeros de 3 a 5 unidades de aminoacares no mostraram eficincia, indicando que cadeias polimricas maior do que 6 resduos so essenciais para a atividade redutora de colesterol. Estes resultados indicam que a ao hipocolesterolmica da Quitosana independente do seu peso molecular dentro da faixa de viscosidade testada.

No ano seguinte, K. Ebihara e colaboradores (Ebihara, K. and Schneeman, B.O., Interrelao entre Fibra Diettica e Gordura sobre o Colesterol Liftico e a Absoro de Triglicerdeos em Ratos, Journal of Nutrition 119, 1383-1387, 1989) administraram, intra-gastricamente, uma emulso teste em ratos contendo 25mg de colesterol, 50mg de goma guar, celulose ou Quitosana e 200mg de leo de girassol, leo de girassol rico em cido olico ou leo de palma, e em seguida mediram a absoro de colesterol e cidos graxos. O tipo de fibra e gordura administrada influenciaram de forma significativa a absoro do colesterol. Observou-se tambm uma interao significativa entre as gorduras e as fibras na absoro do colesterol (P<0,05). A Quitosana reduziu efetivamente a absoro do colesterol, mostrando assim uma maior atividade do que a goma guar e a celulose, e seu efeito foi maior quando associado ao leo de girasol ou ao leo de girassol rico em cido olico. Os resultados mostraram que o tipo de gordura diettica influencia significativamente o efeito que a fibra exerce sobre a absoro de lipdios.

Ikeda e colaboradores, em 1989 (I. Ikeda, Y. Tomari and M. Sugano, Efeitos Interrelacionados de Fibras Dieteticas e Gorduras no Colesterol Linftico e na absoro de lipdios, Lipids, 119, 1383-87, 1989) estudaram os efeitos relacionados de fibras dietticas e gordura sobre o colesterol linftico e absoro de triglicerdeos em ratos. Entre as fibras examinadas, a Quitosana mostrou ser mais efetiva na reduo da absoro do colesterol quando comparada com a goma guar ou celulose. Neste trabalho, os autores relatam

9 que as fibras dietticas influenciaram significativamente na absoro linftica de triglicerdeos e a Quitosana reduziu de forma mais efetiva a absoro de triglicerdeos.

Em 1991, Fukada e colaboradores estudaram o efeito da ingesto de Quitosana, durante 21 dias sobre os cidos biliares em ratos machos (Fukada, Y., Kimura, Koji and Ayaki, Y., Efeito da Ingesto de Quitosana no Metaboismo dos cidos Biliares em Ratos, Lipids 26(5), 395-399, 1991). Neste trabalho, observou-se a reduo dos nveis de colesterol srico em ratos pela suplementao com Quitosana, quando associada a uma dieta comercial com baixo teor de colesterol. De acordo com o experimento, a Quitosana inibiu a transformao do colesterol em coprostanol sem causar uma mudana qualitativa na excreo fecal desses esteris neutros. O aumento de consumo de fibras no aumentou a excreo fecal de cidos biliares, mas causou uma mudana marcante na composio dos cidos biliares fecais. Observou-se um aumento de cido litoclico, de cido deoxiclico em uma menor extenso. Por outro lado, observou-se uma reduo do cido hiodeoxicolico, do ismero 6 beta e do cido-3-alfa-hidroxi-6-ceto-colanico. O pH do ceco e do clon elevou-se pela ingesto de Quitosana, que afetou a converso dos cidos biliares primrios em secundrios no intestino grosso. No ceco a ingesto de quitosana aumentou a concentrao de cidos alfa, beta e mega muriclico e cido litoclico. Entretanto, os nveis de cido hidrodeoxiclico e do seu ismero 6-beta, os cidos monohidrxi-monoceto-colanicos, e o cido 3-alfa, 6-gama, 7-gama-trihidroxicolanico reduziram. Os dados indicam que a ingesto de Quitosana afeta o metabolismo dos cidos biliares intestinais em ratos.

Estudo semelhante ao realizado por Ikeda e colaboradores em 1989 foi realizado por J G LeHoux e F Grondin em 1993 (J. G. LeHoux e F. Grondin, Alguns Efeitos da Quitosana na Funo Heptica em Ratos, Endocrinology, 132(3), 1078-1084, 1993). Neste experimento, os pesquisadores analisaram a resposta da enzima heptica HMG-CoA (3-Hidroxi-3-Metilglutaril Coenzima A),

10 reguladora da sntese do colesterol, em ratos alimentados com uma dieta contendo 1% de colesterol, 0,2% de acido clico e Quitosana em vrias concentraes, alm de elaborarem uma frmula que possa manter uma homeotase satisfatria do colesterol. Os ratos foram escolhidos para o estudo devido ao fato de apresentarem similariedades com a hipercolesterolemia humana do tipo IIb, uma combinao de hipercolesterolemia e hipergliceridemia, e tambm com hipercolesterolemia polignica, que envolve 5% da populao mundial e 95% daqueles indivduos cuja concentrao de colesterol est acima de 50%. Foram realizados experimentos comparativos entre a Quitosana e a colestiramina, no colesterol ingerido e na HMG-CoA redutase no fgado, alm de experimentos para determinar os efeitos de vrios pesos moleculares, concentraes e tempos de ingesto da Quitosana. Os resultados mostraram de forma clara que os animais alimentados com uma dieta rica em esteris mostraram um aumento no colesterol no plasma e no fgado, no qual foi reduzido em 54% no plasma e 65% no fgado pela adio de 5% de Quitosana na dieta, enquanto que a colestiramina somente bloqueou tal aumento. A atividade da HMG-CoA redutase foi consideravelmente aumentada no grupo esterol-colestiramina, mas foi

grandemente reduzida em ambos os grupos esterol e esterol-Quitosana. Nenhum efeito adverso foi evidenciado por analise anatmica superficial quando o experimento foi conduzido por mais de 6 semanas. No entanto, uma colorao amarelada e um decrscimo no tamanho do fgado foi observado nos ratos tratados com colestiramina com apenas uma semana de tratamento, indicando que tal dieta apresenta efeitos colaterais indesejados. Os melhores resultados foram obtidos com uma Quitosana 84% desacetilada e 70 Kda de peso molecular mdio e a uma concentrao de 7,5% na dieta. Nestas condies, a Quitosana foi capaz de reverter, aps trs semanas, praticamente todas as mudanas adversas provocadas por uma dieta rica em colesterol, incluindo aquelas no colesterol do fgado onde seu teor foi reduzido pelo uso da Quitosana de 18,2+/- 0,8 mg/g para 8,8 +/- 1,3 mg/g de tecido.

11 A administrao de esteris reduziu bastante a atividade da HMG-CoA redutase em 33 ve\es e os nveis da HMG-CoA redutase mRNA em 3 vezes no fgado, mas no grupo esterol-Quitosana a atividade da HMG-CoA redutase foi 7,7 vezes mais elevada do que o grupo sem Quitosana. O colesterol HDL normalmente reduzido quando animais so alimentados com esteris, no entanto o efeito da Quitosana no colesterol HDL um fator muito positivo, visto que em humanos o grau de aterosclerose tem sido reportado estar relacionado inversamente com os nveis de HDL no plasma. Em meados de 1993 foi realizado o primeiro trabalho relatando o efeito hipocolesterolmico da Quitosana em humanos. Neste trabalho Maezaki e colaboradores (Y. Maezaki, K. Tsuji, Y. Nakagawa, Y. Kawai, M. Akimoto, T. Tsugita, W. Takekawa, A. Terada, H. Hara and T. Mitsuoka, O Efeito Hipocolesterolmico da Quitosana em Adultos do Sexo Masculino, Biosci. Biotech. Biochem. 57(9), 1439-1444, 1993) administraram a Quitosana na dieta de 8 homens saudveis por duas semanas, na forma de biscoitos, na dose de 3 a 6g/dia e observaram uma significativa reduo do colesterol total de 188 mg/dl para 177 mg/dl e um aumento do colesterol srico HDL de 51 mg/dl para 56 mg/dl. Quando a ingesto de Quitosana foi suspensa, os nveis voltaram a se elevar para os valores observados antes da ingesto. Os autores observaram tambm que os nveis sricos de colesterol HDL aumentaram significativamente com a ingesto de Quitosana e que as quantidades de cidos biliares excretados e cido clico aumentaram significativamente nas fezes pela ingesto de Quitosana, no entanto, a quantidade de cido clico excretado diminui aps a interrupo da ingesto de Quitosana. A quantidade de coprostanol, metablito reduzido de colesterol nas fezes, formada pela ao de bactrias, foi significamente reduzida em todo o perodo de ingesto, o que pode ser atribuda uma troca na flora bacteriana do trato intestinal devido atividade anti-microbiana da Quitosana (Y. Uchida, Propriedade Antibacteriana da Quitosana, Food Chemical, 2, 22-29, 1988). Segundo os autores esses fatos sugerem que a Quitosana se combina com os cidos biliares no trato digestivo e o produto

12 combinado ento excretado nas fezes, reduzindo assim a reabsoro de cidos biliares e consequentemente diminuindo os nveis de colesterol sricos.

A atividade da Quitosana na reduo do colesterol no plasma e na inibio de absoro de colesterol a partir dos intestinos tambm foi observado em frangos recm-nascidos, como foi relatado em trs trabalhos distintos de A. Razdam e O. Petterson (A. Razdam and O. Petterson, Efeito da Quitina e Quitosana na Digestibilidade Nutricional e a Concentrao em Frangos, Brit. J. Nutri., 72, 277-288, 1994; A. Razdam and O. Petterson, Respostas Hipolipidemica, Gastrointestinal em Frangos com Quitosanas de Diferentes Viscosidades, Brit. J. Nutri., 76, 387-397, 1996 e A. Razdam, D. Petterson and J. Petterson, Peso Corporal de Frangos, Ingesto de Alimentos, Concentraes de Lipeos no Plasma e cidos Biliares no Intestino Prximo em Resposta a Alimentao com Quitisana e Pectina, Brit. J. Nutri., 78, 283-291, 1997). O efeito adverso no peso corporal foi tambm observado neste ltimo experimento (1997). Frangos alimentados com uma dieta composta de 3 g/Kg de Quitosana (89% desacetilada) tiveram uma reduo significativa do peso corporal comparado com o controle.

Em 1994, Deuchi e colaboradores (O Efeito Redutor da Quitosana sobre a Digestibilidade Aparente de Gorduras em Ratos Alimentados com uma Dieta Rica em Gorduras, Biosci. Biotech. Biochem., 58(9), 1613-1616) investigaram os efeitos de vrias fibras dietticas ou similares (solveis e no solveis) na digestibilidade aparente de gorduras e protenas em ratos alimentados com uma dieta rica em gorduras. Foram estudadas as seguintes fibras: Quitina, Quitosana, Colestiramina, Carboxi-metil-celulose, Celulose,

Polipropileno, Agar, Carragen, Guar, etc. Cada uma das diferentes fibras foi adicionada a uma concentrao de 5% em peso a uma mistura contendo 20% de leo de milho e 1% em peso de uma mistura de proteinas. Os ratos foram

13 alimentados com esta dieta por duas semanas, e as fezes foram coletadas dos animais durante os 3 ltimos dias. Quando comparadas com a celulose (controle), a maioria das fibras testadas aumentaram de forma significativa a excreo fecal de lipdios. No entanto, ficou claro neste estudo que a Quitosana apresenta uma maior habilidade de eliminar lipdios em relao as outras fibras dietticas, visto que 77,8% dos principais cidos graxos contidos no leo de milho foram excretados nas fezes. A digestibilidade aparente de protenas no foi afetada significamente pela Quitosana. Os resultados deste estudo sugerem que a Quitosana possui um elevado potencial para interferir com a digesto e absoro de gorduras no trato intestinal, facilitando assim sua excreo pelas fezes. Os autores concluem que a administrao de Quitosana pode ser til para o controle da alimentao excessiva de gorduras prevenindo desta forma a ocorrncia de doenas relacionadas em adultos.

Em 1995, Deuchi e colaboradores, observaram em dois trabalhos distintos (K. Deuchi, O. Kanauchi, M. Shizukuishi and E. Kobayashi, Ingesto macia e continua de quitosana afeta o status de minerais e vitaminas em ratos alimentados com uma dieta rica em gorduras, Biosci. Biotech Biochem., 59, 1211-1216, 1995 e K. Deuchi, O. Kanauchi, Y. Imasato and E. Kobayashi, Efeito da Viscosidade ou Grau de Desacetilao da Quitosana na Excreo Fecal das Gorduras de Ratos Alimentados com uma Dieta Rica em Gorduras, Biosci. Biotech Biochem., 59, 781-785, 1995 ), que Quitosanas contendo seis ou mais unidades monomricas de glucosamina com graus de desacetilao moderados mostram-se efetivas para bloquear a absoro de colesterol e lipdios no trato intestinal. Quitosanas com altos ndices de viscosidade (peso molecular) com cadeias maiores do que oito unidades monomricas de glucosamina apresentam efeito equivalente. A base para a reduo observada na absoro de colesterol se deve a sua propriedade de formar gis no trato intestinal na qual se liga a lipdios e colesterol. Uma observao importante nestes trabalhos o fato da presena de cido ascrbico facilitar a formao de

14 gis, aumentando desta maneira, a capacidade da Quitosana de se ligar a lipdios, potencializando assim a atividade de reduo de colesterol no plasma. Quando Quitosanas com diferentes viscosidades foram

administradas s galinhas, ocorreu uma reduo nos nveis de colesterol no plasma e um aumento nos nveis de HDL, resultando numa melhora na relao HDL/Colesterol total. Adicionalmente, a suplementao com

Quitosana reduz em 26% da digestabilidade de gordura nos intestinos quando comparada com o controle. Os autores finalmente concluram que a influncia hipolipidmica da Quitosana se deve provavelmente a interrupo da circulao de cidos biliares enteropticos. Aps a alimentao de camundongos albinos com Quitosana, semipurificada, a uma concentrao de 5% por 31 dias, a quantidade de comida ingerida e o ganho de peso corporal foram menores do que no grupo controle e em outros grupos suplementados com outras fibras dietticas, incluindo a quitina, como reportado no trabalho de H. Kondo e A. Osada (H. Kondo and A. Osada, Influncia de Fibras Dietticas na Biodisponibilidade de Zinco em Ratos, Biomed. Environ. Sci., 9, 204-208, 1996). Estes resultados indicam que das fibras dietticas testadas, a Quitosana tem o mais pronunciado efeito no status nutricional dos animais.

Em 1995, Miura e colaboradores (Miura, T., Usami, M., Tsuura, Y., Ishida, H. and Seino, Y., Efeito Hipoglicemico e Hipolipidemico da Quitosana em Camundongos Normais e Neonatais Diabticos Induzidos por

Estreptozotocina, Biol. Pharm. Bull. 18(11), 1623-1625, 1995) investigaram o efeito hipoglicemico e hipolipidemico sobre camundongos normais e dois tipos de camundongos com diabete mellitus no dependente de insulina (NIDDM), obesos com hiperinsulinemia (KK-Ay) e outros com hipoinsulinemia (camundongos neonatais com diabetes induzidas-NSZ). Os camundongos NSZ foram produzidos pela ingesto subcutnea 90 mg/Kg de peso corporal de estreptozocina e aps 5

15 semanas os nveis de glicose sangnea de todos os camundongos foram determinados. Os animais foram alimentados com uma dieta contento 5% de Quitosana por 4 semanas. Os resultados mostraram claramente que a Quitosana mostrou um consistente efeito hipoglicemico e hipolipidemico nos camundongos normais e em um dos modelos NIDDN com hipoinsulinaemia (NSZ) como mostrado na tabela a seguir.

Glicose (mg/dL)

Colesterol (mg/dL)

Triglicrideos (mg/dL)

Controle Normal Quitosana Controle NSZ Quitosana Controle KK-Ay Quitosana

202 +/- 8 168 +/- 6 345 +/- 23 268 +/- 23 456 +/- 88 429 +/- 65

178 +/- 4 122 +/- 4 217 +/- 8 190 +/- 9 160 +/- 23 176 +/- 13

166 +/- 8 115 +/- 5 198 +/- 45 165 +/- 26 442 +/- 66 429 +/- 85

Entretanto, os camundongos diabticos do tipo KK-Ay no apresentaram mudanas nos teores de glicose, colesterol e triglicerdeos, indicando que a Quitosana pode ser usada com um agente teraputico de acordo com o tipo de diabete. Alm disso, a Quitosana proporcionou melhorias no metabolismo de lipdios, indicando que pode ser til em complicaes dibticas, visto que pacientes diabticos apresentam elevados nveis de colesterol e

triglicerdeos devido ao metabolismo desorganizado. Ainda em 1995, em um ensaio clnico utilizando quitosana em indivduos obesos, Sciutto e Colombo (Sciutto AM, Colombo P. Lipid-lowering effect of Chitosan dietary integrator and hypocaloric diet in obese subjects. Acta Toxicol Ther 16;4:215-229, 1995.), examinaram como a quitosana pode auxiliar na perda de peso. Durante um perodo de quatro semanas, 90 indivduos obesos foram selecionados de forma aleatria e controlada por placebo, consistindo de

16 uma dieta hipocalrica mais quatro comprimidos de quitosana ou placebo. Os pesquisadores relataram que uma reduo significativa do peso corporal, presso sangunea (sistlica e diastlica), colesterol total e LDL, triglicerdeos e um aumento do colesterol HDL nos dois grupos. Entretanto, no grupo que ingeriu a quitosana mostrou resultados estatisticamente melhores do que o do grupo placebo. O grupo da quitosana perdeu em mdia 7,19Kg enquanto que o grupo placebo perdeu em mdia apenas 3,36Kg. O colesterol total foi reduzido em

23,3% no grupo da quitosana, enquanto que no grupo placebo a reduo foi de apenas 11,1%, com resultados similares para o colesterol LDL e triglicerdeos. Um segundo estudo conduzido por Colombo e colaboradores no ano seguinte (Colombo P, Sciutto AM. Nutritional aspects of chitosan employment in hypocaloric diet. Acta Toxicol Therap 17:287-302, 1996.) apresentou resultados similares aos descritos no primeiro estudo. Outro estudo clnico realizado em 1995 por Giustina e colaboradores (Giustina A, Ventura P. Weight-reducing regimens in obese subjects: Effects of a new dietary fiber integrator. Acta Toxicol Ther 16;4:199-214, 1995.) foi conduzido com 100 pessoas com sobrepeso de 10 a 25%. Ao final do estudo (4 semanas), as pessoas que receberam quitosana demonstraram perda de peso significativa (7,3kg contra 3,0Kg nos grupos controle). As pessoas que tomaram quitosana tambm demonstraram reduo na presso sangunea sistlica (de 145 para 135mm Hg) e diastlica (92.6 para 84.2 mm Hg), assim como uma reduo na taxa respiratria (27.6/min a 21.2/min). Posteriormente, Nakae e colaboradores, (Nakae, Seitaro; Sato, Siro; Kira, Shohei; Maezaki, Yuji; Mita, Noriko; Mizuochi, Kazuo; Tsukioka, tokio; Ono, Yoshie; Sakamoto, Kozi; Tabuchi, Michiyuki; Nakagawa, Yasue; Tsuji, Keisuke Kichin, Kitosan Kenkyu, 1(3), 175-182 (Japanese) 1995) realizaram um experimento considerando o efeito hipocolesterolmico e a quantidade efetiva de quitosana em alimentos. Foram preparados e testados biscoitos e macarro instantneo com Quitosana adicionada. No teste 1, 13 adultos do sexo masculino ingeriram os biscoitos por 4 semanas, no teste 2, 11 adultos do sexo feminino ingeriram o macarro instantaneo por 2 semanas. Foram adicionados 0,5 g de

17 quitosana aos biscoitos e 1,0 g de quitosana ao macarro instantaneo. Foram feitas medidas do colesterol total, HDL e triglicerdeos antes e depois da ingesto de quitosana e o ndice aterognico foi continuamente comparado. Nos indivduos do sexo masculino com nveis de colesterol srico acima de 200mg/dl antes da ingesto de quitosana, apresentaram uma reduo significativa dos nveis de colesterol srico e do ndice aterognico (p<0,05) aps 2 semanas de ingesto dos biscoitos com quitosana (0,5g/dia), entretanto, no teste 1, os valores e os ndices no reduziram nos indivduos com nveis de colesterol srico menores do que 200mg/dl. Nos indivduos do sexo feminino que apresentavam valores de colesterol srico maior do que 180 mg/dl antes da ingesto de Quitosana, observou-se uma reduo

significativa dos valores de colesterol srico (p<0,05) pela ingesto de macarro instantneo com quitosana incorporada (1,0g/dia) por 2 semanas e o ndice aterognico mostrou uma tendncia ao decrescimento no teste 2

Em 1996, Ventura (P. Ventura, Atividade Redutora de Lipdios da Quitosana, um Novo Integrador Diettico, Chitin Enzymol., Proc. Int. Symp., 2nd, 55-62, 1996) observou a reduo do peso corporal, presso sistlica e diastlica, pulso e velocidade respiratria em 100 pacientes obesos aps a administrao de uma dieta associada a ingesto de Quitosana por 4 semanas. Enquanto os dois grupos demonstraram uma perda de peso significativa durante o estudo, o grupo tratado com quitosana apresentou uma perda significativamente maior do que o grupo placebo. Todos os pacientes relataram uma melhor condio fsica, sendo a Quitosana bem tolerada. No mesmo ano, Veneroni e colaboradores (G. Veneroni, F. Veneroni, S. Contos, S. Tripodi, M. De Bernardi, C. Guarino and M. Marletta, Efeitos de um Novo Integrador Baseado em Quitosana e uma Dieta Hipocalorica na Hiperlipidemia e Excesso de Peso em Pacientes Obesos, Acta Toxicol. Ther, 17(1), 53-70, 1996) estudaram atravs de um experimento aleatrio, duplo-cego, controlado por placebo, o efeito da perda de peso corporal e os efeitos de reduo de lipdios obtidos por uma dieta hipocalrica e uma nova dieta associada com

18 fibras (uma mistura de Quitosana, Goma Guar, Acido ascrbico e outros nutrientes) em 80 pacientes adultos obesos com hiperlipidemia. Aos pacientes foi administrada uma dieta hipocalrica associada a ingesto de 4 comprimidos/dia de Quitosana ou com uma dieta hipocalrica associada a 4 comprimidos/dia de placebo por 4 semanas. Ao final do perodo de estudo observou-se uma reduo estatsticamente significativa do peso corporal e do excedente, triglicerdeos e do colesterol total e LDL, adicionalmente observou-se um aumento nos nveis do colesterol HDL nos dois grupos. Entretanto, no grupo tratado com quitosana as diferenas obtidas foram estatisticamente maiores do que o grupo placebo. A reduo mdia do peso foi de 7,9 Kg no grupo da quitosana e 3,4 Kg no grupo placebo, a reduo do excesso de peso foi de 11,2% no grupo da quitosana e 4,2% no grupo placebo, a reduo do colesterol total foi de 23,9% no grupo da quitosana e 10,4% no grupo placebo, a reduo do colesterol LDL foi de 33,4% no grupo da quitosana e 12,1% no grupo placebo, a reduo dos triglicerdeos foi de 23,5% no grupo da quitosana e 9,3% no grupo placebo, o aumento do colesterol HDL foi de 10,2% no grupo da quitosana e 3,5% no grupo placebo. Efeitos adversos foram reportados em 2,6% dos pacientes tratados com quitosana (enjo e nuseas transitrias) e em 5,4% nos pacientes do grupo placebo (constipao), sem nenhuma diferena estatstica entre os dois grupos. No foi observada nenhuma mudana clnica ou patolgica na qumica e hematologia do sangue. A partir dos resultados obtidos no estudo, uma dieta associada com a fibra diettica quitosana mostra-se como um tratamento til (mais ativo do que a dieta isolada) em pacientes com sobrepeso e hiperlipidemia. Em outro ensaio, publicado em 1996, Kondo e colaboradores, (Kondo H, Osada A. Influence of dietary fiber on the bioavailability of zinc in rats. Biomed Environ Sci 9:204-8, 1996.) examinaram a influencia da quitina e da quitosana sobre a biodisponibilidade do zinco em ratos alimentados com uma dieta suplementada com 5% ou sem fibra diettica (quitina, quitosana, celulose, pectina e Agar-agar) durante 31 dias. Nos ratos alimentados com dietas contendo 5% de fibras, exceto quitosana, o consumo de alimento foi maior do que o

19 controle. O ganho de peso em todos os grupos alimentados com fibra foi maior do que o controle, exceto para o grupo suplementado com quitosana (5%) onde a ingesto de alimento e o ganho de peso foram definitivamente menores do que os grupos controle e das demais fibras. A absoro do Zinco no foi afetada em grau considervel. Os dados obtidos apresentam dois efeitos interessantes. Primeiro, a reduo do peso corporal associada a ingesto de quitosana. Segundo, a menor ingesto de alimento em ratos que ingeriram quitosana, sugerindo um efeito anortico (supressor de apetite). Em 1996, Razdan e colaboradores, examinaram em dois estudos (Razdan A, Pettersson D. Hypolipidaemic, gastrointestinal and related responses of broiler chickens to chitosans of different viscosity. Br J Nutr 76:387-97, 1996. Razdan A, Pettersson D, Pettersson J. Broiler chicken body weights, feed intakes, plasma lipid and small- intestinal bile acid concentrations in response to feeding of chitosan and pectin. Br J Nutr 78:283-91, 1997.) o peso corporal, ingesto de alimentos, lipdeos plasmticos e concentraes biliares no intestino delgado de frangos em resposta a ingesto de quitosana e pectina. Durante essa interveno, os frangos foram alimentados com uma dieta controle de amido e amido contendo 3% de quitosana ou pectina. Como resultado, a dieta com quitosana reduziu de forma significativa o peso corporal e a ingesto de alimentos quando comparada com os animais do controle ou alimentados com pectina. Observou-se ainda uma reduo significativa do colesterol total e LDL nos animais alimentados com quitosana. Observou-se ainda um aumento na proporo de colesterol HDL em relao ao controle. Esse efeito atribudo mais a uma reduo nos nveis de colesterol total do que uma elevao do colesterol HDL em valores absolutos. Os pesquisadores relataram ainda que a quitosana diminui a digestibilidade das protenas e das gorduras dos alimentos. De uma forma geral, as dietas com quitosana reduziram a digestibilidade das gorduras em 8% em relao ao grupo controle. Em 1997, Okamoto e colaboradores (Y. Okamoto, M. Nose, H. Sashiwa, M. Morimoto, H. Saimoto, Y. Shigemasa and S. Minami, Estudo Fundamental na Administracao Oral de Quitina e Quitosana em Cachorros, Adv. Chitin

20 Sci., 2, 625-632, 1997) realizaram um estudo em cobaias a fim de avaliar as mudanas no trato gastrintestinal e seus efeitos sistmicos. A Quitina e a Quitosana foram empacotadas em sacos nylon e administradas oralmente. Posteriormente, foi feita uma comparao dos pesos da Quitina e Quitosana nos sacos recuperados das fezes com os pesos iniciais. Observou-se que no caso da Quitosana ocorreu uma diminuio de 10% em peso, enquanto que com a quitina no foi observada nenhuma mudana. A implantao cirrgica no intestino grosso e delgado dos sacos de nylon contendo Quitosana causou uma reduo de cerca de 40% do peso total. Quando sacos de Quitosana foram colocados nas alas intestinais por 24 horas, cerca de 26% do peso foi perdido na presena das fezes. Alm disso, foi observado um decrscimo significativo nos nveis do colesterol total no plasma quando a Quitosana foi administrada por via oral diariamente por um perodo de duas semanas, isto , 6 g/dia por um perodo de uma semana ou 3 g/dia por um perodo de 2 semanas. Com a quitina e a celulose no se observou nenhuma alterao. Em 1997, Tanaka e colaboradores (Tanaka, Yoshinori; Tanioka, Shinichiro; Tanaka, Miyoko; Tanigawa, Takahiko; Kitamura, Yukisato; Minami, Saburo; Okamoto, Yoshiharu; Miyashita, Mariko; Nanno, Masanobu, Efeito das Partculas de Quitina e Quitosana em Camundongos BALB/c por Administracao oral e Parenteral, Biomaterials, 18(8), 591-595, 1997) investigaram a toxicidade da Quitina e Quitosana quando administradas oralmente e parentalmente em camundongos. Quando 5 mg de Quitina foi injetada intraperitoneamente a cada 2 semanas por um periodo de 12 semanas, os camundongos estavam aparentemente normais, entretanto o exame histologico mostrou a presenca de muitos macrfagos com hiperplasia. Policaricitos foram tambm observados no bao dos camundongos injetados sub-cutneamente com 5 mg de Quitina, porm nenhuma outra mudana foi observada. Quando administrou-se Quitosana aos camundongos intraperitoneamente a uma dose de 5 mg, induziu um significativo decrscimo nos seus pesos corporais. A administrao subcutnea de 5 mg de Quitosana no evocou nenhuma anomalia

21 celular de uma maneira geral. Exame histolgico dos rgos abdominais mostrou muitos macrfagos com hiperplasia no mesentrio. A administrao de uma dieta de casena com um suplemento de 5% de Quitosana causa um decrscimo significativo no peso corporal das cobaias e tambm um decrescimo no nmero de de Bifidobactrias e Lactobacillus na flora normal do trato intestinal. Estes resultados sugerem um cuidado na administrao clnica, a longo prazo de Quitosana, especialmente em grandes quantidades. Em 1998, Okuda e colaboradores (H. Okuda, L. Han, J. Li, M. Sumiyoshi, T. Tsujita, T. Takeda, H. Chihara and T. Nishikiori, Mecanismos da Ao Antiobesidade da Quitosana, Lactosucrose e Sulfato de Condroitina, Kichin, Kitosan Kenkyu, 4(2), 166-167) realizaram um estudo para determinar o mecanismo de ao antiobesidade da Quitosana, da lactosucrose e do Sulfato de Condroitina. Neste trabalho, os autores concluram que a Quitosana reduz a absoro intestinal de gorduras dietticas atravs da inibio de hidrlise de gorduras pela lpase pancretica. A Lactosucrose atua atravs da inibio de absoro do 2-monoacil-glucerol, um dos hidrolisatos das gorduras, enquanto que o Sulfato de Condroitina sua ao atravs da inibio da hidrlise e absoro de cido graxos, que tambm so hidrolisados obtidos de gorduras. Desta forma, os autores, concluram que estas substancias funcionais apresentam aes antiobesidade em cobais com obesidade induzida por uma alimentao rica em gorduras. Em 1998 Ebihara e Schneeman (Ebihara, K. e Schneeman, B., American Institute of Nutrition) estudaram a interao dos cidos biliares, fosfolipdios, colesterol e triglicerdeos com fibras dietticas no intestino delgado de camundongos. Neste trabalho, a interao de cidos biliares com goma guar, Konjac mannan e Quitosana foram determinadas. As cobaias foram alimentadas durante por um perodo com dietas contendo 5% celulose, goma guar, Konjac mannan ou Quitosana e tambm contendo Triolen marcado com C14 e Colesterol marcado com H3. O grupo alimentado com celulose serviu como controle, j que a celulose no se liga aos cidos biliares ou fosfolipdios in vivo. Somente a Quitosana apresentou ligao com os fosfolipdios, reduzindo sua proporo em

22 fase aquosa comparada com aquela do grupo alimentado com celulose. Os resultados deste estudo indicaram que goma guar, Konjac monnan e Quitosana se ligam ou removem cidos biliares, e que a Quitosana liga-se aos fosfolipdios, quando comparados com a celulose. Ainda em 1998, Struszczyk e colaboradores (Struszczyk, Henryk; Makinen, Elina; Kivekas, Olli; Hakli, Harri, Substncia e Mtodo para Reduo de Lipdios e Colesterol, H. Struszczyk , E. Makinen, O. Kivekas and H. Hakli, PCT Int. Appl. WO 9834625, 1998) desenvolveram um estudo para determinar a capacidade de reduo de lipdios e colesterol srico com Quitosana microcristalina. O estudo mostrou a reduo de cerca de 66%, aps 15 minutos, utilizando undecilenato de sdio como substrato referncia. A Quitosana micro-cristalina foi preparada pelo processo spray-dry e obtida com um teor de 91,6%, peso molecular mdio de 123,000 e tamanho mdio das partculas de 48m. A Quitosana pode ser administrada por via oral atravs de Produtos Alimentcios ou em doses unitrias contendo quantidades pr-determinadas. No mesmo ano (1998) Ormrodo e colaboradores (D. J. Ormrodo, C. C. Holmes and E. T. Miller, Quitosana Diettica Inibe hipercolesterolemia e aterogenese na apolipoproteina de camundongos E-deficientes de

aterosclerosis, Atherosclerosis, 138(2), 329-334, 1998) avaliaram a inibio da hipercolesterolemia em ratos com base nos conhecimentos de que a Quitosana, quando administrada oralmente, se liga s gorduras bloqueando sua absoro, alm de reduzir os nveis de colesterol de baixa densidade (LDL) em animais e humanos. Realizou-se ainda um experimento em camundongos com deficincia de apolipoprotena E como modelo, para observar a capacidade da Quitosana de inibir a formao de placas aterosclerticas. Estas cobaias hipercolestolemicas desenvolvem aterosclerose sem a necessidade de uma dieta especfica ou alguma interveno cirrgica. Desta maneira, as cobaias deficientes em apolipotena E proporcionaram um modelo ideal para estudar os efeitos da Quitosana na reduo de colesterol e aterosclerose.

23 As cobaias foram alimentadas por 20 semanas com uma dieta contendo 5% de Quitosana e comparadas com o controle. Os nveis de colesterol no sangue foram significativamente inferiores no grupo alimentado com Quitosana, chegando a 64% ao final de 20 semanas de tratamento. Aps comparao da rea da placa artica em ambos os grupos, foi observado uma inibio significativa da aterosclerose, tanto em toda a extenso da aorta quanto no arco artico, na ordem de 42 e 50% respectivamente. Este estudo foi o primeiro que mostrou a direta correlao entre a reduo do colesterol srico com Quitosana e a inibio da aterosclerose, sugerido que a mesma pode ser usada como inibidora do desenvolvimento de aterosclerose em indivduos com hipercolesterolemia. Ainda em 1998, Matsunaga e colaboradores (S. Matsunaga and A. Usumi, Dietas Antiobesidade contendo extratos de milt, quitosana, e cido ascorbico, Jpn. Kokai Tokkyo Kono JP 10212239, 1998) patentearam formulaes anti-obesidade contendo extratos de MILT, Quitosana e cido ascrbico e/ou seus sais na forma de tabletes. Tabletes contendo 30% de MILT extrato de salmo, 40% de Quitosana, 10% de cido ascrbico e 20% de lactose foram administrados em um grupo de mulheres sendo observado uma reduo de 8,86% do peso mdio do grupo em estudo. No ano seguinte, Wuolijoki e colaboradores (E. Wuolijoki, T. Hirvela. and P. Ylitalo, Decrescimo no Colesterol LDL Srico com Quitosana microcristalina, Methods Find Exp. Clin. Pharmacol., 21(5), 357-61, 1999), reportaram um estudo sobre a reduo de colesterol LDL serico com Quitosana microcristalina. Neste estudo, a Quitosana e uma substancia placebo foram administradas por via oral durante 8 semanas a um grupo de 51 pacientes obesos do sexo feminino, antes da rotina hospitalar e das alimentaes. Os dados de peso, lipdios sericos (colesterol total, LDL e HDL e triglicerdeos) foram monitorados na 4a, 6a e 8a semana de tratamento. A Quitosana microcristalina no alterou significamente o colesterol toral srico e colesterol HDL, mas aumentou levemente os triglicerdeos sricos comparados ao placebo. Nenhuma reduo de peso foI observada em qualquer

24 grupo de tratamento. Os resultados mostram que a Quitosana foi bem tolerada e nenhum efeito colateral ou mudana nos parametros labarotoriais foram notados incluindo as vitaminas sricas liposolveis A e E, e Ferro(II) srico e transferina. Em 1999, Han e colaboradores (Han LK, Kimura Y, Okuda H. Reduction in fat storage during chitin-chitosan treatment in mice fed a high-fat diet. Int J Obes Relat Metab Disord 123:174-9, 1999) examinaram os efeitos da quitosana sobre a atividade da lpase pancretica in vitro e sobre o grau de armazenamento de gorduras induzido em ratos pe la administrao oral de uma dieta rica em gorduras por nove semanas. Como resultado, observou-se que os animais alimentados com quitosana, reduziram o peso corporal, a hiperlipidemia e a gordura heptica. Como concluso, os autores propem que os efeitos antiobesidade da quitosana em ratos alimentados com alto teor de gordura se devem parcialmente a inibio da absoro intestinal das gorduras dietticas. Em 2002, Zahorska e colaboradores (Effect of chitosan in complex management of obesity., Zahorska-Markiewicz B, Krotkiewski M, OlszaneckaGlinianowicz M, Zurakowski A. Pol Merkuriusz Lek 2002 Aug;13(74):129-32 Katedra Patofizjologii Sl. AM w Katowicach.) realizaram um estudo para avaliar o efeito da quitosana no tratamento da obesidade. Em 2003, foi publicado o estudo: O EFEITO DA QUITOSANA NO COMPLEXO TRATAMENTO DA OBESIDADE. (Zahorska-Markiewicz B, Krotkiewski M, Olszanecka-Glinianowicz M, Zurakowski A. Pol Merkuriusz Lek 2002 Aug;13(74):129-32 Katedra Patofizjologii Sl. AM w Katowicach). O objetivo do presente estudo foi verificar o efeito da quitosana como um possvel adjuvante no tratamento complexo da obesidade. Participaram desse estudo, cinqenta mulheres obesas (22-59 anos, BMI > 30). Foi adotado um programa de encontros de 2 horas com mdicos, psiclogos e nutricionistas, por cada grupo de 20 pessoas, a cada duas semanas. Foi recomendado dieta hipocalrica (1.000Kcal/dia), atividade fsica e modificao dos hbitos. A suplementao com quitosana foi avaliada em estudo duplo-cego, aleatrio, controlado por placebo. No grupo da quitosana, os participantes tomaram

25 Chitinin N (Primex Ingredientes AS, Avaldsnes, Noruega) 750mg de quitosana pura por comprimido, dois comprimidos trs vezes por dia antes de cada refeio. O grupo placebo recebeu comprimidos placebos idnticos. Uma perda de peso significativa foi observada no grupo suplementado com quitosana (15,9 Kg), bem maior do que a observada no grupo placebo (10,9 Kg). Observou-se ainda, uma reduo significativa na presso arterila sistlica e diastlica no grupo da quitosana. No observou-se diferena entre os grupos na reduo do colesterol total e LDL. Nenhum efeito colateral foi observado, mas o nmero de abandonos foi maior no grupo placebo do que no grupo da quitosana. CONCLUSO: Segundo os autores do estudo, a quitosana pode ser usada como um valioso e seguro coadjuvante em tratamentos para a obesidade a longo prazo. A quitosana parece acentuar a reduo da presso arterial, juntamente com a perda de peso.

26 Reduo de peso corporal, gorduras e presso arterial (Novos Estudos com animais)

Os efeitos da quitosana sobre o peso corporal, excreo de lipdeos e presso arterial tem sido relatados em diversos estudos com animais. Han e colaboradores examinaram os efeitos da quitosana sobre a atividade da lpase pancretica in vitro e sobre o grau de armazenamento de gorduras induzido em ratos pela administrao oral de uma dieta rica em gorduras por nove semanas. Como resultado, observou-se que os animais alimentados com quitosana, reduziram o peso corporal, a hiperlipidemia e a gordura heptica. Como concluso, os autores propem que os efeitos anti-obesidade da quitosana em ratos alimentados com alto teor de gordura se devem parcialmente a inibio da absoro intestinal das gorduras dietticas.

Han LK, Kimura Y, Okuda H. Reduction in fat storage during chitin-chitosan treatment in mice fed a high-fat diet. Int J Obes Relat Metab Disord 123:174-9, 1999.

Em outro ensaio, Kondo e colaboradores, examinaram a influencia da quitina e da quitosana sobre a biodisponibilidade do zinco em ratos alimentados com uma dieta suplementada com 5% ou sem fibra diettica (quitina, quitosana, celulose, pectina e Agar-agar) durante 31 dias. Nos ratos alimentados com dietas contendo 5% de fibras, exceto quitosana, o consumo de alimento foi maior do que o controle. O ganho de peso em todos os grupos alimentados com fibra foi maior do que o controle, exceto para o grupo suplementado com quitosana (5%) onde a ingesto de alimento e o ganho de peso foram definitivamente menores do que os grupos controle e das demais fibras. A absoro do Zinco no foi afetada em grau considervel. Os dados apresentam duas observaes interessantes. Primeiro, a reduo do peso corporal associada a ingesto de quitosana. Segundo, a menor ingesto de alimento em ratos que ingeriram quitosana, sugerindo um efeito anortico (supressor de apetite).

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Kondo H, Osada A. Influence of dietary fiber on the bioavailability of zinc in rats. Biomed Environ Sci 9:204-8, 1996.

Razdan e colaboradores realizaram dois estudos com frangos mostrando achados similares. Os pesquisadores examinaram o peso corporal, ingesto de alimentos, lipdeos plasmticos e concentraes biliares no intestino delgado de frangos em resposta a ingesto de quitosana e pectina. Durante essa interveno, os frangos foram alimentados com uma dieta controle de amido e amido contendo 3% de quitosana ou pectina. Como resultado, a dieta com quitosana reduziu de forma significativa o peso corporal e a ingesto de alimentos quando comparada com os animais do controle ou alimentados com pectina. Observou-se ainda uma reduo significativa do colesterol total e LDL nos animais alimentados com quitosana. Observou-se ainda um aumento na proporo de colesterol HDL em relao ao controle. Esse efeito atribudo mais a uma reduo nos nveis de colesterol total do que uma elevao do colesterol HDL em valores absolutos. Os pesquisadores relataram ainda que a quitosana dimunui a digestibilidade das protenas e das gorduras dos alimentos. De uma forma geral, as dietas com quitosana reduziram a digestibilidade das gorduras em 8% em relao ao grupo controle.

Razdan A, Pettersson D. Hypolipidaemic, gastrointestinal and related responses of broiler chickens to chitosans of different viscosity. Br J Nutr 76:387-97, 1996. Razdan A, Pettersson D, Pettersson J. Broiler chicken body weights, feed intakes, plasma lipid and small- intestinal bile acid concentrations in response to feeding of chitosan and pectin. Br J Nutr 78:283-91, 1997.

Em estudo anterior, investigando o efeito da quitosana sobre a digestibilidade aparente de gorduras em ratos, Deutchi e colaboradores relataram que uma alimentao com quitosana resultou em um menor ganho de peso do que nos grupos controle. Neste caso, a capacidade de auxiliar a perda de peso

28 est refletida no menor ganho de peso, pois foram utilizadas dietas hipercalricas no referido estudo. Esses achados enfatizam a capacidade potencial de se utilizar a quitosana com auxiliar na perda de peso corporal.

Deuchi K, Kanauchi O, Imasato Y, Kobayashi E. Decreasing effect of chitosan on the apparent digestibility bh rats fed on a high-fat diet. Biosci Biotech Biochem 58:(9)1613-6, 1994. Reduo de peso corporal, gorduras e presso arterial (Novos Estudos Clnicos com humanos) Em um ensaio clnico recente, utilizando quitosana em indivduos obesos, Sciutto e Colombo, examinaram como a quitosana pode auxiliar na perda de peso. Durante um perodo de quatro semanas, 90 indivduos obesos foram selecionados de forma aleatria e controlada por placebo, consistindo de uma dieta hipocalrica mais quatro comprimidos de quitosana ou placebo. Os pesquisadores relataram que uma reduo significativa do peso corporal, presso sangunea (sistlica e diastlica), colesterol total e LDL, triglicerdeos e um aumento do colesterol HDL nos dois grupos. Entretanto, no grupo que ingeriu a quitosana mostrou resultados estatisticamente melhores do que o do grupo placebo. O grupo da quitosana perdeu em mdia 7,19Kg enquanto que o grupo placebo perdeu em mdia apenas 3,36Kg. O colesterol total foi reduzido em 23,3% no grupo da quitosana, enquanto que no grupo placebo a reduo foi de apenas 11,1%, com resultados similares para o colesterol LDL e triglicerdeos. Um segundo estudo conduzido por Colombo e colaboradores apresentou resultados similares aos descritos no primeiro estudo.

Sciutto AM, Colombo P. Lipid-lowering effect of Chitosan dietary integrator and hypocaloric diet in obese subjects. Acta Toxicol Ther 16;4:215-229, 1995. Colombo P, Sciutto AM. Nutritional aspects of chitosan employment in hypocaloric diet. Acta Toxicol Therap 17:287-302, 1996.

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Outro estudo clnico foi conduzido com 100 pessoas com sobrepeso de 10 a 25%. Ao final do estudo (4 semanas), as pessoas que receberam quitosana demonstraram perda de peso significativa (7,3kg contra 3,0Kg nos grupos controle). As pessoas que tomaram quitosana tambm demonstraram reduo na presso sangunea sistlica (de 145 para 135mm Hg) e diastlica (92.6 para 84.2 mm Hg), assim como uma reduo na taxa respiratria (27.6/min a 21.2/min). Giustina A, Ventura P. Weight-reducing regimens in obese subjects: Effects of a new dietary fiber integrator. Acta Toxicol Ther 16;4:199-214, 1995.