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art=4282&bd=1&pg=1&lg=

Neurnios em marcha lenta

Hipotireoidismo protege o crebro de agresses como o derrame
Marcos Pivetta

Quando agredido, o crebro humano consegue s vezes reagir de forma fascinante. Em certos casos ainda no muito bem compreendidos capaz de deslocar o controle de funes vitais, que eram comandadas por reas agora lesionadas, para regies com conexes neuronais ainda preservadas. Esse no o nico esforo de autopreservao do rgo diante de uma ameaa. Estudos coordenados nos ltimos dois anos pelo brasileiro Antonio Bianco, chefe da Diviso de Endocrinologia, Diabetes e Metabolismo da Escola de Medicina da Universidade de Miami, enfocam outro tipo de plasticidade do crebro, bem menos conhecida, mas igualmente manifestada em situaes de perigo: a capacidade de regular a quantidade do hormnio da tireide que atua localmente em suas clulas e, dessa forma, acelerar ou brecar o ritmo de funcionamento de acordo com suas necessidades. Outros rgos, como o corao, os msculos e os nervos, tambm exibem essa faculdade, mas nenhum deles de forma to refinada como o crebro. Num trabalho recente com clulas do crebro humano cultivadas in vitro, publicado em junho no Journal of Clinical Investigation (JCI), Bianco descreve o complexo mecanismo celular que permite ao crebro diminuir a taxa de funcionamento desses hormnios quando ocorre um problema de sade como um derrame. Na interpretao do pesquisador, a reduo faz parte de um esforo adaptativo do rgo para frear seu metabolismo e, assim, tentar minimizar os efeitos nocivos da condio clnica. O crebro aumenta ou diminui o nvel do hormnio da tireoide em razo de estar exposto a situaes de doena ou de sade, diz o endocrinologista. O derrame causa um hipotireoidismo no tecido cerebral, localizado, que, ao que tudo indica, benfico ao organismo. O acidente vascular cerebral, nome tcnico do derrame, causa hipxia. Faltam sangue e oxignio para o bom funcionamento dos neurnios. Se for privado por muito tempo desses elementos, o tecido cerebral morre. Confrontado com essa ameaa, o crebro diminui os nveis locais dos hormnios da tireoide, passa a usar menos energia e os neurnios demandam menos oxignio. Adotar um metabolismo no modo slow-motion uma forma de lutar contra os efeitos nocivos do derrame. Outros dois brasileiros tambm participaram do estudo do JCI, Rui Maciel, da Universidade Federal de So Paulo, e a aluna de doutorado Beatriz Freitas. Transformao Entender como o crebro modula o impacto local do hormnio da tireoide envolve um conhecimento de todo o processo de metabolizao dessa substncia. Localizada na base frontal do pescoo, a glndula tireoide utiliza iodo dos alimentos para fabricar no um, mas dois hormnios: a tiroxina (T4) e a tri-iodotironina (T3). Numa pessoa normal, cerca de 80% do hormnio secretado T4 e o restante, T3. A tireoide produz essas duas formas de hormnio e as despeja no sangue, que as distribui aos tecidos do corpo. Tecnicamente, o T4 um pr-hormnio, uma forma menos ativa do hormnio da tireoide que, para influenciar o

metabolismo, precisa ser convertida por uma enzima para T3, sua verso ativa. Ento, o que conta, em termos prticos, a quantidade de T3 presente em um rgo especfico. Efeito duplo Bianco um dos maiores especialistas do mundo nas desiodases, um conjunto de trs enzimas (D1, D2 e D3) que ativam ou desativam os hormnios da tireoide, e encontrou no crebro um padro de expresso muito particular dessas protenas. Segundo o modelo proposto no JCI, a enzima D2 atua nas abundantes clulas gliais do crebro, que do suporte aos neurnios e os nutrem. Essa enzima converte o T4 em T3, elevando a taxa da forma ativa do hormnio da tireoide no rgo. O T3 resultante da ao da D2 transportado para as clulas neuronais adjacentes s gliais. Num derrame, a falta de oxignio reduz a produo de T3 nas clulas gliais ao mesmo tempo que os neurnios aumentam a expresso de outra desiodase, a D3, que inativa o T3. Um quadro de hipxia faz a expresso da enzima D3 aumentar cerca de sete vezes nos neurnios, explica Bianco. Em outras palavras, coloca isoladamente o crebro numa condio anloga de um indivduo com hipotireoidismo. O rgo passa a funcionar em marcha lenta, consumindo menos energia e minorando os estragos da escassez de oxignio. H indcios ainda de que o hipotireoidismo instalado em certos tecidos estimule a proliferao de clulas e, assim, ajude na regenerao e cura de doenas. Na prtica mdica, os endocrinologistas esto preocupados com a concentrao que circula no sangue de hormnio ativo da tireoide. ela que diz se uma pessoa tem hipo ou hipertireoidismo, duas condies anormais que podem causar problemas de sade se no forem tratadas. Mas olhar para os nveis desse hormnio em tecidos especficos, tanto em quadros associados a doenas como em situaes de plena sade, tambm pode fornecer informaes importantes. Alguns estudos j mostraram que, em indivduos beira da morte, reaparece uma quantidade aumentada da enzima D3 em tecidos como o fgado, os msculos e o corao, afirma Bianco. Como se viu, a maior produo da D3 num tecido reduz drasticamente a presena da forma ativa do hormnio da tireoide. Nesses casos terminais, o hipotireoidismo aparentemente a derradeira cartada do organismo para desacelerar ao mnimo possvel o gasto energtico e, talvez, permanecer vivo. A estratgia parece fazer sentido. Afinal, as clulas de pacientes com hipotireoidismo podem consumir cerca da metade da energia das clulas de indivduos normais e um quarto das de pessoas com hipertireoidismo. > Artigo cientfico FREITAS, B. C. et al. Paracrine signaling by glial cell-derived triiodothyronine activates neuronal gene expression in the rodent brain and human cells. Journal of Clinical Investigation. v. 120, p. 2.206-17. jun. 2010.

Astrcitos e hormnio da tireide (T3): desenvolvimento neuronal e neuroproteo (2008)

Abstract O hormnio da tireide (T3) exerce uma importante influncia no desenvolvimento e maturao do SNC de mamferos. Os efeitos do T3 no desenvolvimento neuronal so mediados pelos astrcitos, que secretam fatores solveis e outras molculas, como protenas de MEC, modulando o crescimento de neuritos, proliferao e migrao neuronal. Os astrcitos tambm participam ativamente do metabolismo neuronal. Por exemplo, os transportadores de glutamato astrocitrios, GLAST e GLT-1, tm papel essencial na retirada de glutamato do espao extracellular e na manuteno deste neurotransmissor em nveis fisiolgicos no crebro. No presente estudo, demonstramos que o T3 aumentou significativamente a captao de glutamato por astrcitos cerebelares, quando comparados s culturas sem o tratamento. A adio de LPDC e DL-TBOA, inibidores da captao de glutamato, aboliu a captao de glutamato tanto nos astrcitos tratados com T3 como nos controles. Alm disto, os nveis de RNA mensageiro e de protena para GLAST e GLT-1 em astrcitos foram aumentados aps o tratamento com T3, embora no tenhamos observado diferenas significativas na distribuio destes transportadores. O efeito gliotxico do glutamato nas culturas de astrcitos cerebelares foi abolido pelo tratamento com T3. Alm disto, neurnios cerebelares cultivados sobre monocamadas de astrcitos tratados com T3 permaneceram viveis em uma maior proporo aps a adio de glutamato do que os cultivados sobre monocamadas astrocitrias controle, demonstrando um efeito neuroprotetor do T3. A expresso de sindecanas (1-4) em culturas de astrcitos de cerebelo, crtex cerebral e hipocampo de ratos neonatos foi analisada por RT-PCR. Nossos resultados demonstraram que as sindecanas 1-4 so expressas em astrcitos de cerebelo e crtex cerebral, enquanto que astrcitos de hipocampo expressam apenas as sindecanas 2 e 4. A anlise por RT-PCR semiquantitativa demonstrou que a expresso das sindecanas 1, 2 e 4 foi reduzida e a expresso da sindecana 3 foi aumentada em cerebelos de ratos hipotireoideos, comparados aos tecidos normais. Observamos tambm reduo na expresso das sindecanas 2 e 3 em astrcitos cerebelares tratados com T3, quando comparados s culturas no tratadas. Este balano de PGs pode estar envolvido na ao do T3, mediada pela sinalizao por FGF2. Demonstramos tambm, neste trabalho, que astrcitos hipotireoideos apresentam alteraes na expresso e organizao de fibronectina e laminina. Monocamadas de astrcitos hipotireoideos corresponderam a um microambiente pobre para o desenvolvimento neuronal do que astrcitos normais. O tratamento de astrcitos hipotireoideos com T3, recuperou o microambiente hipotireoideo, aumentando a rea de cobertura por fibronectina e laminina. Em co-culturas de neurnios hipotireoideos sobre astrcitos hipotireoideos tratados com T3 foi observado maior nmero de neurnios e estes apresentando maior neuritognese do que quando cultivados sobre astrcitos hipotireoideos no tratados. O meio condicionado de astrcitos hipotireoideos tratados com T3 tambm promoveu sobrevivncia e neuritognese em neurnios hipotireoideos. Nossos resultados demonstram que os efeitos do T3 na morfognese astrocitria podem modular o desenvolvimento neuronal por diferentes mecanismos, como regulao dos nveis extracelulares de glutamato, e modulando contatos diretos clula-clula e clula-MEC. http://www.jci.org/articles/view/41977

http://translate.google.com.br/translate?hl=ptBR&sl=en&u=http://www.jci.org/articles/view/41977&ei=eWKOTf_jIsvPgAfL8CsDQ&sa=X&oi=translate&ct=result&resnum=1&ved=0CB0Q7gEwAA&prev=/search%3Fq%3DFREITAS,% 2BB.%2BC.%2Bet%2Bal.%2BParacrine%2Bsignaling%2Bby%2Bglial%2Bcellderived%2Btriiodothyronine%2Bactivates%2Bneuronal%2Bgene%2Bexpression%2Bin%2Bthe%2Brodent% 2Bbrain%2Band%2Bhuman%2Bcells%26hl%3Dpt-BR%26prmd%3Divns

Sinalizao parcrina por triiodotironina em clulas gliais derivadas ativa a expresso gnica neuronal no crebro do roedor e clulas humanas
CG Freitas Beatriz 1, Balzs Gereben 2, Melany Castillo 3, Imre Kallo 2, Anik Zeld Egri 2Pedro, 2, Liposits Zsolt 2, Ann Marie

Zavacki 4, Maciel Rui MB 1, Sungro Jo 3, Singru Praful 5,Edith Sanchez 5 , Lechan Ronald M. 5, 6 e Antonio C. Bianco 3
1

Laboratrio de Endocrinologia Molecular, Disciplina de Endocrinologia, Departamento de Medicina da Federal de de So Cincias Miami, Boston, Centro Mdico Tufts, em Paulo, de Paulo SP, Budapeste, Flrida, Massachusetts, Boston, Massachusetts, Brasil, So. Hungria. EUA. EUA. EUA. Laboratrio de Neurobiologia da glndula endcrina, Instituto de Medicina Experimental da Academia Diviso, Diabetes Endocrinologia e Metabolismo da Universidade de Miami Miller School of Medicine, Seco da tiride, da Diviso de Endocrinologia, Diabetes e Hipertenso, Brigham and Women's Instituto de Pesquisa Tupper, Departamento de Medicina, Diviso de, Diabetes Endocrinologia e Departamento de Neurocincia, da Tufts University School of Medicine, de Boston, Massachusetts,

Universidade
2

Hngara
3

em
4

Hospital,
5

Metabolismo,
6

EUA. Endereo para correspondncia: Antonio C. Bianco, da Universidade de Miami Miller School of Medicine, 1400 NW 10 Avenue, Suite 816, Miami, Florida 33136, EUA. Telefone: 305.243.5631; Fax: 305.243.7268; E-mail: abianco@med.miami.edu

Hipotireoidismo em humanos caracterizada por graves seqelas neurolgicas, que muitas vezes irreversveis, destacando o importante papel do hormnio tireoideano (HT) no crebro. Apesar disso, no se sabe muito sobre as vias de sinalizao que controlam TH ao no crebro. O que se sabe que o hormnio tiroxina (T4) convertido para o hormnio triiodotironina (T3) pela desiodase tipo 2 (D2) e que isso ocorre nos astrcitos, enquanto receptores de TH e desiodase tipo 3 (D3), que inativa, T3 so encontrados nos neurnios adjacentes. Aqui, ns modelamos a ao do TH no crebro usando um sistema in vitro de cocultura que expressam D2 H4 clulas de glioma humano e D3-expressando SK-N-AS clulas de neuroblastoma humano. Descobrimos que a atividade das clulas da glia D2 resultou em aumento da produo de T3, que agiu de forma parcrina para induzir genes responsivos T3, incluindo pirofosfatase ectonucleotide / fosfodiesterase 2 (ENPP2), nos neurnios cocultured. D3 atividade nos neurnios modulada esses efeitos. Alm disso, esta via parcrina foi regulamentada atravs de sinais, tais como hipxia, a sinalizao do hedgehog, LPS e inflamao induzida, como evidenciado, tanto no sistema de coculture vitro e in vivo em modelos de ratos de isquemia cerebral e os modelos do rato da inflamao. Este estudo apresenta, pois, o que acreditamos ser a primeira evidncia direta para um lao que liga a atividade parcrina D2 glial ao HT nos neurnios doena. INTRODUO receptores, identificando desiodases como pontos de controle em potencial para a regulamentao dos TH sinalizao no crebro durante sade e

Um dos aspectos mais devastadores do hipotireoidismo neonatal leso neurolgica grave e retardo mental, freqentemente associadas com fcies anormais, surdo-mutismo, e espasticidade ( 1 , 2 ). Esses recursos so em grande parte irreversveis, e uma rede mundial de triagem neonatal foi posto em prtica h vrias dcadas, para identificar e tratar os recmnascidos com esta condio. O crebro adulto tambm sensvel ao hormnio tireoidiano (HT). Pacientes com hipotiroidismo so freqentemente letrgicos, tm fraca coordenao motora, diminuio da memria, e uma tendncia depresso e transtornos de humor. Por sua vez, hipertireoidismo est associado com irritabilidade, ansiedade e alteraes do humor ( 3 ), e da eficcia dos antidepressivos potencializado quando associado TH administrao. Embora essas sndromes ilustrar um papel crtico desempenhado pela TH no crebro, no se sabe muito sobre as vias de sinalizao que controlam TH ao neste rgo. Em contraste com a maioria dos tecidos, a maioria dos TH no crebro produzido localmente por meio da ativao da tiroxina (T4) em 3,5,3 '-triiodotironina (T3), atravs da ao da desiodase tipo 2 (D2) ( 4 ).Este tem sido estudada diretamente atravs de rotulagem tcnicas duplas e foi recentemente confirmado com a observao de que os ratos com rompimento alvejado do gene apresentam meia DIO2 com muito T3 em seus crebros como littermates WT ( 5). Assim, amplamente aceito que a expresso da D2 em reas distintas do crebro aumenta TH sinalizao, um mecanismo que tem sido ligada a funes cerebrais importantes como o desenvolvimento da cclea, o hormnio liberador de tirotropina / hormnio estimulante da tireide (TRH / TSH) feedback mecanismo, e reprodutores sazonais em aves ( 6 , 7 ). Ao mesmo tempo, o TH-inativadora desiodase tipo 3 via (D3) tambm atua em reas distintas do crebro, amortecendo TH ao. No surpreendentemente, a D2 e D3 so inversamente vias sincronizados em uma forma espacial e temporal. Assim, presume-se que o equilbrio destas duas vias, ou seja, D2, D3 versus, e os de menor contribuio significativa de T3 no plasma, crebro determinam os processos crticos, tais como mielinizao, a migrao neuronal, diferenciao glial e neurognese ( 1 , 8 , 9 ). Neurnios expressam receptores tireoideano (TRs) e so, presumivelmente, o principal alvo de T3 no crebro, mas D2 expressa em astrcitos, no os neurnios. Isso levanta uma questo anatmica: o T3 gerada em astrcitos chega TRs nos neurnios ( 2 ,10 , 11 )? Alm disso, a expresso da D3 nos neurnios limita esta via parcrina? Tal mecanismo parcrino tornou-se mais plausvel com a descoberta de transporte TH ativo em neurnios atravs de transportadores como monocarboxilatos TH (MCT8)transportador-8: mutaes no MCT8 explicar a base molecular para o-Herndon, Dudley sndrome Allan (dispositivos antimanipulao), uma rara desordem X-lig caracterizada por anormalidades neurolgicas, incluindo atraso global do desenvolvimento, hipotonia central, nistagmo rotatrio, deficientes auditivos e espasticidade ( 12 , 13 ). Outra linha de evidncias que apiam o conceito de transporte parcrina de TH no crebro deriva de estudos de metabolismo de TH no hipotlamo, quando D2 se expressa em clulas gliais especializadas, localizado no piso e parede infralateral do terceiro ventrculo do hipotlamo mediobasal (MBH) chamadas tanicitos ( 14 , 15 ). Tem sido sugerido que a produo de T3 via D2 em tanicitos poderia afetar a expresso gnica em neurnios TRH, localizado no ncleo paraventricular (PVN), explicando assim por que T4 fundamental para o feedback negativo da TRH ( 16 ). Ao mesmo tempo, upregulation de D2

em tanicitos tem sido demonstrado em um modelo do roedor para a doena no tireoidiana e jejum, sugerindo que um aumento relativo no local TH ao mediadora do hipotiroidismo central freqentemente observadas nestas circunstncias ( 17 - 19 ). Em codornas japonesas, a expresso da D2 na MBH induzida pela luz. Intracerebroventricular administrao de T3 imita a resposta ao fotoperodo, enquanto o cido inibidor D2 iopanoic impede o crescimento gonadal, indicando que a luz induzida expresso do D2 no hipotlamo medial basal (MBH) podem estar envolvidos na resposta fotoperidica das gnadas em codornas japonesas ( 7 ). Se essa conexo TR glial-D2/neuronal realmente existe, poderia ter a vantagem de permitir uma regulao muito mais sofisticado do TH ao no crebro, com controle de deiodinao neuronal ou glial ser um ponto de controle. Um nmero de vias de sinalizao que tm sido recentemente criada para ser relevante para desiodases poderia ser operante no crebro, por exemplo, a ativao de HIF-1 da D3 em tecidos hipxicos ( 20 ) ea famlia de protenas mediada inativao ourio de D2 e ativao de D3 ( 21 , 22 ). Evidncias diretas de um deiodinase mediada pegada transcricional T3 em neurnios no esteve disponvel. Aqui ns modelamos esta via in vitro por coculturing clulas que expressam D2 glioma H4 com clulas neuronais que expressam D3, SK-N-AS. Usando este sistema, verificou-se que a clula glial gerada por T3(atravs da atividade D2) foi capaz de agir de forma parcrina para induzir a expresso de genes responsivos T3 em neurnios coculturados, apesar da presena de atividade da D3. Alm disso, descobrimos que o sistema regulado por sinais incluindo hipxia, ourio protenas e LPS-induo de uma inflamao. Em estudos in vivo, utilizando a isquemia e LPS validar ainda mais a relevncia destes resultados. Para nosso conhecimento, estes dados representam a primeira evidncia direta para um lao que liga parcrina D2 em clulas gliais de TRs nos neurnios, identificando desiodases como pontos de controle para a regulao do TH de sinalizao no crebro durante sade e doena. e SK-N-AS clulas H4 imitar padro de expresso deiodinase encontrados in vivo no crebro. A fim de desenvolver um modelo in vitro de TH metabolismo e da ao no crebro, que primeiro buscou identificar linhas adequadas de clulas que imitam o padro deiodinase de expresso no crebro, ou seja, expresso de D2 em clulas gliais ( 14 ) e D3 em neurnios ( 23 ). Para esse efeito, as clulas precursoras da glia de restrio foram diferenciadas na presena de T3, PDGF-el, bFGF, ou FCS ( 24 ), mas a expresso de D2 no poderia ser induzido nessas clulas (dados no mostrados). Ao mesmo tempo, a seleo de glioma e vrias linhas de clulas da microglia identificou a clulas de glioma humano H4 (Figura 1 A), que exibem atividade D2 substancial, mas no desiodase tipo 1 (D1) ou D3 (Figura 1 B). Assim como em astrcitos primrios (dados no mostrados), as clulas tambm expressam H4 outros componentes-chave da TH transporte (transportador de cidos monocarboxlicos 8 [MCT8], MCT10 e solutos transportadora transportador de nions orgnicos 1c1 [SLCO1C1, tambm conhecido como OATP14]) e ao (TR , TR,neurogranina [NRGN, tambm conhecido como RC3], e pirofosfatase ectonucleotide / fosfodiesterase 2 [ENPP2]) no crebro (Figura1 C). Como parte deste modelo, optou-se por usar o SK-N-AS linha celular de neuroblastoma, que tem como atividade D3 anteriormente caracterizados (Figura 1 , A e B) ( 20 ). O TH MCT8 transportadores e MCT10 foram

encontrados para ser expressa de forma semelhante em ambas as linhagens celulares, enquanto a expresso do transportador OATP14 tendeu a ser maior nas clulas do neuroblastoma (Figura 1 C). Posteriormente, foram testados para determinar se estas linhas de clulas so sensveis a T3 pela incubao de ambas as linhas em meios contendo soro despojado, carvo ou 100 nM de T3 (Figura 1 D). Olhamos 2 anteriormente caracterizado responsivos T3 genes no crebro, ou seja, RC3 e ENPP2 ( 2 ), tendo constatado que a SK-N-AS clulas apenas responder de forma consistente em um T3 e tempo-dependente da forma de concentrao, aumento da expresso ENPP2 a um mximo de cerca de 5 vezes (Figura 1 , D-F). Em contraste, as clulas gliais no respondeu a T3 em todos os quando estes mesmos genes foram testados (Figura 1 , DF). Como a protena desacopladora 2 (UCP2) a expresso do gene no se alterou com a adio de T3 nos meios de comunicao de qualquer tipo de clula (Figura 1 D), este gene foi posteriormente utilizado como controle. Coculture de clulas neuronais e gliais necessria para a sensibilidade ao T4. Para testar a hiptese de que gliais derivadas atos T3 em clulas neuronais, que se aproveitou de uma na configurao projetada para coculture vitro de clulas em dois compartimentos adjacentes, que so banhados com a mesma meios de cultura (Transwell System; Figura 1 E). Usando esta configurao, primeiro os dois tipos de clulas incubadas com T3, tendo constatado que a expresso do gene ENPP2 estimulada em N-NO clulas SK, independentemente de estas clulas so cultivadas sozinho ou com H4 clulas, como sempre, o ltimo no respondeu a exposio ao T3 (Figura 1 , F e G). No prximo conjunto de experimentos, optou-se incubar todas as clulas com T4 em meios contendo 0,1% de BSA (em vez de FBS), de modo que a concentrao de T4 livre pode ser definido como descrito anteriormente ( 25 ). Sob essas condies, H4 e / ou clulas SK-N-NO foram expostos a 20 pM T4 livre (similar concentrao de T4 livre no soro humano) por 48 horas. Enquanto duas vezes a induo da expresso gnica de aproximadamente ENPP2 foi observada em-N-AS clulas SK cresceu sozinho, coincubao com clulas H4 ampliado o T4-ENPP2 expresso gnica induzida por cerca de 7 vezes (Figura 2 A). O efeito do T4 sobre a expresso gnica ENPP2 seguiu um padro de resposta de dose, com incrementos proporcionais observada no intervalo entre 0 e 48 horas (dados no mostrados). Em contraste, coincubao celular no afetou a expresso gnica em ENPP2-N-AS clulas T4 SK quando no foi adicionado aos meios de comunicao e expresso do gene UCP2 permaneceu estvel durante todo o experimento (Figura 2 A). Para determinar se coincubao celular pode estar afetando a converso fracionria do T4 em T3, e, consequentemente, a produo de T3, o ltimo foi monitorada pela amostragem peridica dos meios de comunicao seguido por separao e quantificao de iodotironinas por UPLC como descrito ( 26 ). A converso de T4 para T3 aumentou de forma constante somente quando as clulas foram usadas H4, e esta no foi afetada pela coincubao com SK-N-AS clulas (Figura 2 B). A anlise completa do TH metabolismo utilizando diferentes substratos radioactivos confirmou que as clulas metabolizam H4 T4 em T3 e iodeto atravs de D2 (Figura 2 C), AS-N-clulas SK ainda metabolizar T3 para T2 e T1 atravs D3 (Figura 2 D), e o coculture de H4 e SK-N-SA produz T3 e seus metablitos esperado (Figura 2 E).

http://www.tede.ufsc.br/tedesimplificado//tde_busca/arquivo.php?codArquivo=322
ASTRCITOS E HORMNIO DA TIREIDE (T3): DESENVOLVIMENTO NEURONAL E

NEUROPROTEO CLUDIA BEATRIZ NEDEL MENDES DE AGUIAR Departamento de Biologia Celular, Embriologia e Gentica CCB/UFSC Florianpolis, abril de 2008 1 - INTRODUO 1.1 ASTRCITOS Astrcitos so as clulas gliais mais numerosas e de maior tamanho no sistema nervoso central (SNC), que se encontram muito prximas aos neurnios, por cerca de 20 nm. Os astrcitos protoplasmticos possuem amplo citoplasma, podem apresentar prolongamentos curtos e so localizados apenas na substncia cinzenta. Os astrcitos fibrosos so caracterizados pela presena de prolongamentos mais longos e esto presentes na substncia branca. Muitos dos prolongamentos astrocitrios se espessam nas regies terminais, formando dilataes chamadas de ps vasculares e envolvendo a parede endotelial dos vasos sangneos. Os astrcitos tambm formam uma interface com o plexo coride, estando em ntimo contato com o lquido cefalorraquidiano. Desta forma, podem regular trocas inicas entre o plasma, lquido cefalorraquidiano e o tecido nervoso (LAMING et al., 2000). Alguns astrcitos podem apresentar formas especializadas, o que inclui a glia de Bergmann no crtex cerebelar, as clulas de Muller na retina, pituicitos na neurohipfise e tanicitos no terceiro ventrculo (GARCIASEGURA et al., 1996; FIELDS; STEVENS-GRAHAM, 2002). A astroglia tambm implicada na fisiologia dos ndulos de Ranvier, devido a seus processos perinodais que esto em contato ntimo com a membrana dos axnios (WAXMAN; BLACK, 1984). As membranas dos processos perinodais apresentam uma alta densidade de canais de sdio, sugerindo uma importante funo dos astrcitos na regulao do ambiente nodal e na propagao do potencial de ao (VERNADAKIS, 1996). O metabolismo da glicose outro exemplo do importante papel dos astrcitos sobre a atividade neuronal. Nos astrcitos, atravs da gliclise, a glicose convertida em lactato, que quando liberado no espao extracelular utilizado como substrato metablico pelos neurnios (TSACOPOULOS; MAGESTRETI, 1999). Os astrcitos podem tambm regular a concentrao extracelular de ons como potssio e clcio, sendo um mecanismo sinalizador entre as clulas, atravs do qual astrcitos podem modular a atividade neuronal (Figura 1) (LAMING et al., 2000). As mltiplas atribuies dos astrcitos no SNC esto relacionadas outra importante funo destas clulas: a de produo e secreo de diversas molculas trficas e sinalizadoras. Os astrcitos sintetizam e liberam diversos fatores de crescimento, como fator de crescimento de nervo (NGF), fator de crescimento de fibroblastos (FGF), fator neurotrfico ciliar (CNTF); molculas adesivas como molcula de adeso de clula neural (N-CAM) e N-caderinas;

protenas de matriz extracelular (MEC) como lamininas, fibronectinas e proteoglicanos (revisado em DOW; WANG, 1998). Embora o papel de defesa do SNC seja atribudo principalmente microglia, os astrcitos podem tambm realizar esta funo, atuando em vias inflamatrias e de regenerao de tecido, secretando mediadores solveis como ligante 10 de quimiocina cistena-X-cistena (CXCL10), ligante 2 de quimiocina cistenacistena (CCL2), fator ativador de clula B (BAFF) e interleucina-6. Estas quimiocinas tm impacto tanto na atividade imunolgica inata como na adaptativa. Alm disto, os astrcitos expressam molculas envolvidas na imunologia inata, como receptores do tipo toll-like, protena cinase dependente da ligao de RNA de dupla-fita e tambm componentes do sistema complemento (revisado em FARINA et al., 2007). Recentemente, o papel dos astrcitos como clulas tronco tem sido bastante discutido. Diversos trabalhos, in vitro e in vivo, demonstraram que a glia radial e astrcitos podem gerar uma prognie neuronal e tambm glial. Estas clulas tronco multipotentes astrocitrias exibem reatividade para protena fibrilar acdica glial (GFAP), um clssico marcador astrocitrio, e expressam uma densa marcao de MEC, outra caracterstica dos astrcitos durante o desenvolvimento do SNC. Alm disto, a formao da gliose reativa aps injria do SNC acompanhada pelo reaparecimento desta densa marcao para MEC, sugerindo uma possvel tentativa dos astrcitos de recapitular certos eventos ontogenticos, como repopulao celular, o que considerado 17uma caracterstica da linhagem de clulas multipotentes (revisado em STEINDLER; LAYWELL, 2003). Atualmente bastante evidente que as funes cerebrais dependem de uma ntima sinalizao entre neurnio e clulas da glia, que se influenciam mutuamente durante a diferenciao celular, desenvolvimento e metabolismo. Desta forma, os astrcitos guiam a migrao neuronal e o crescimento axonal alm de modularem a

diferenciao neuronal. Essas interaes neurnio-glia, particularmente neurnioastrcitos, exercem um importante papel na manuteno da homeostase energtica e plasticidade no crebro, envolvendo receptores para diversos neurotransmissores e participando ativamente do ciclo glutamato-glutamina (LAMING et al., 2000; CARMIGNOTO, 2000; DANBOLT, 2001). 1.2 - ASTRCITOS E TRANSMISSO GLUTAMATRGICA O glutamato o principal neurotransmissor excitatrio no SNC de mamferos e diretamente envolvido em processos que incluem plasticidade, aprendizado e memria e desenvolvimento neural. As respostas fisiolgicas do glutamato so dadas por receptores que podem ser do tipo ionotrpicos, que modulam o fluxo de ons atravs da membrana plasmtica, ou do tipo metabotrpicos, que interagem com protenas-G e assim modulam a atividade das clulas. No terminal pr-sinptico, o glutamato fica estocado dentro de vesculas e liberado na fenda sinptica aps despolarizao da clula, promovida por processos dependentes de clcio (MELDRUM, 2000). Alm do seu papel fisiolgico, o glutamato tambm envolvido em condies patolgicas como epilepsia, isquemia cerebral, esclerose amiotrfica lateral, mal de Alzheimer, doena de Parkinson e esquizofrenia. Alm disto, altas concentraes de glutamato na fenda sinptica causam a ativao excessiva de seus receptores, produzindo processos 18excitotxicos que culminam na morte das clulas neurais. Desta forma, a concentrao de glutamato na fenda sinptica deve ser mantida abaixo dos nveis excitotxicos, regulao realizada por transportadores de aminocidos excitatrios EAATs (transportadores de aminocidos excitatrios) (LIPTON; ROSENBERG, 1994; DANBOLT, 2001). Os astrcitos tm um papel crucial na manuteno dos nveis de glutamato em concentraes fisiolgicas no meio extracelular, apesar da captao de glutamato no ser uma funo exclusiva destas clulas. Os transportadores de glutamato astrocitrios,

GLAST (transportador de glutamato-aspartato) e GLT-1 (transportador de glutamato), so os principais responsveis pela rpida retirada do glutamato na fenda sinptica, sendo responsveis por mais de 80% de toda a captao de glutamato no crebro, evitando os eventos txicos para neurnios e consequentemente sua morte (GUILLET et al., 2005; MARAGAKIS; ROTHSTEIN, 2006) (Figura 2). Nos astrcitos o glutamato convertido glutamina, por ao de uma enzima exclusiva de astrcitos, a glutamina sintase, em um processo dependente de ATP. A glutamina captada pelos neurnios e ento transformada em glutamato, que ser novamente liberado na fenda sinptica (NORENBERG; MARTINEZ-HERNANDEZ, 1979; DANBOLT, 2001). A toxicidade do glutamato em neurnios bem documentada, entretanto, este neurotransmissor pode tambm ser txico para astrcitos, quando em concentraes muito altas. Astrcitos provenientes de crtex cerebral de rato demonstram inchao e morte celular aps incubao com 1-10 mM de glutamato. Alm disto, o tratamento dos astrcitos com glutamato promove o acmulo da enzima lactato desidrogenase no meio de cultura destas clulas, acompanhado de reduo nos nveis intracelulares de glutationa, sugerindo que a perda de clulas nestas culturas ocorre via estresse oxidativo (CHEN et al., 2000). 20 So conhecidas cinco famlias de transportadores de glutamato, trs delas so

transportadores neuronais (EAAT3 ou EAAC1 (carreador de aminocidos excitatrios), EAAT4 e EAAT5) e duas delas correspondem a transportadores astrocitrios (EAAT1 ou GLAST e EAAT2 ou GLT-1). EAAT3 principalmente expresso no sistema nervoso perifrico (SNP), mas pode estar presente nas regies CA2 e CA4 do hipocampo, no giro dentado, na camada granular do cerebelo e camadas II-IV do crtex cerebral. EAAT4 e EAAT5 so acoplados a canais de cloreto, sendo o primeiro

expresso restritamente nas clulas de Purkinje e o segundo expresso principalmente na retina (STOFFEL et al., 2004). GLAST e GLT-1 so amplamente distribudos no crebro, sendo GLAST o transportador mais abundante no cerebelo, e GLT-1 expresso em outras regies do crebro (ANDERSON et al., 2001). A expresso de GLAST e GLT-1 tambm diferenciada ao longo do desenvolvimento do SNC. Enquanto GLAST tem sua maior expresso durante os primeiros processos da embriognese de mamferos, a expresso de GLT-1 aumenta progressivamente a partir da maturao psnatal (FURUTA et al., 1997). O transporte de glutamato acoplado a processos dependentes de sdio e potssio, sendo capaz de concentrar o glutamato dentro da clula em concentraes 10.000 vezes maiores que a concentrao extracelular (MARAGAKIS; ROTHSTEIN, 2006). Os transportadores de glutamato so modulados tambm pela atividade da bomba de sdio/potssio ATPase. Desta forma, um colapso no gradiente de sdio leva a condies limitantes de energia, o que pode promover ineficincias no transporte de glutamato. Uma das conseqncias do mau funcionamento destes transportadores o transporte reverso do glutamato, quando ao invs de ser captado, o glutamato eliminado da clula, aumentando assim a concentrao deste aminocido no meio extracelular a nveis txicos para as clulas (MONTIEL et al., 2005; MARAGAKIS; 21ROTHSTEIN, 2006). Alm da manuteno de nveis ideais de glutamato nos espaos extracelulares, o transporte normal de glutamato tambm essencial para vias metablicas como produo de energia e sntese de glutationa, um tripeptdeo com importantes funes antioxidantes no SNC (DANBOLT, 2001; RE et al., 2003). A expresso e funo de GLAST e GLT-1 podem ser reguladas por AMP cclico (SWANSON et al., 1997), bem como por fatores de crescimento. Zelenaia e

colaboradores (2000) demonstraram que EGF induz a expresso de GLT-1 em astrcitos imaturos. Alm disto, Suzuki e colaboradores (2001) demonstraram aumento na captao de glutamato por astrcitos corticais aps o tratamento com FGF2, IGF-1 e EGF, efeito acompanhado por aumento na expresso dos nveis de RNA mensageiro para GLAST nestas clulas. Alm de participarem ativamente do metabolismo neuronal e da modulao da transmisso glutamatrgica, os astrcitos podem modular o desenvolvimento de neurnios por interao com o microambiente, pela MEC. 1.4 - ASTRCITOS E HORMNIO DA TIREIDE O papel essencial do hormnio da tireide, triiodotironina ou T3, no crescimento, desenvolvimento e metabolismo em mamferos bem documentado. Durante o perodo fetal, a deficincia de T3 pode resultar em retardo fsico e mental, conhecido em humanos como cretinismo, afetando, principalmente, regies do crebro como o cerebelo, o hipocampo e o crtex cerebral (TRENTIN et al., 2006). Clos e colaboradores (1980) demonstraram que ratos hipotireoideos apresentam defeitos na formao da glia de Bergmann, interferindo na migrao neuronal e causando a morte em grande escala de clulas precursoras de neurnios granulares. O hipotireoidismo congnito tem uma importante influncia sobre a migrao e a diferenciao neuronal. Por exemplo, o hipotireoidismo perinatal resulta em reduo da arborizao dendrtica em clulas de Purkinje e da sinaptognese entre estas clulas e neurnios granulares, atraso na mielinizao e alteraes nas conexes entre neurnios cerebelares e fibras neuronais aferentes (KOIBUCHI; CHIN, 2000). Ao contrrio, T4 e T3 promovem arborizao dendrtica em clulas de Purkinje em camundongos BALB-C (KURODA et al., 2002). O principal produto secretado pela glndula tireide a tiroxina ou T4. O

transporte de T4 atravs da barreira hemato-enceflica mediado por transportadores da famlia OATP (protena transportadora de cidos orgnicos), presente nos capilares do crebro e plexo coride sendo altamente especfico para T4, com papel crucial no influxo desta molcula do sangue para o encfalo (revisado em VISSER, 2006). Por apresentar carter lipoflico, por muito tempo se acreditou que o mecanismo de entrada de T4 e T3 na clula fosse apenas por difuso (SUZUKI; ABE, 2007). Entretanto, diversos transportadores para iodotironinas tm sido descritos. Estas molculas pertencem famlia de transportadores de monocarboxilatos (MCT). A princpio, 32MCT8 foi identificado como transportador de T3. Entretanto, se verificou que camundongos que no expressam o MCT8 apresentavam nveis elevados de T3, retardo psicomotor, porm, sem defeitos neurolgicos. Recentemente, MCT10 tambm foi descrito como transportador de iodotironinas e de aminocidos aromticos, sendo o transportador preferencial de T3 e mais efetivo que o MCT8 (VISSER et al., 2007). No crebro, MCT8 expresso predominantemente em neurnios, sendo extremamente importante para a captao neuronal de T3 (VISSER, 2006). Ainda no so conhecidos transportadores de iodotironinas em astrcitos. Entretanto, tem sido proposto um mecanismo pelo qual o T4 captado pelos astrcitos, convertido em T3 e liberado para os neurnios. O T4, em comparao a T3, praticamente inativo, sendo por isso considerado por muitos autores como um pr-hormnio. Desta forma, atividade do hormnio da tireide regulada via converso do T4 em T3, por desiodao do anel externo pela ao 33de enzimas desiodases, no citoplasma (DARRAS et al., 1999; BIANCO; KIM, 2006). As desiodases de iodotironinas so enzimas que regulam a disponibilidade local do T3 para seus receptores nucleares. A desiodase I est presente predominantemente no

fgado, rins e tecidos tireideos e catalisa a desiodao de T4 em T3r, T3 em T4 e T3r em T2 nestes tecidos (BERRY et al., 1991; MANDEL et al., 1992; DARRAS et al., 1999). O tipo II de desiodase catalisa a monodesiodao do T4 e do rT3 (T3 reverso) em T3 e para diiodotironina (T2), respectivamente. Desta forma, o suprimento do hormnio ativo, T3, no crebro, depende da captao do T4 pelos transportadores celulares e da sua desiodao intracelular pela desiodase tipo II (VISSER, 2006). A desiodase tipo III catalisa a desiodao do anel interno do T4 em rT3 e do T3 em T2 (Figura 8). Como rT3 e T2 tm pouca atividade biolgica, essa enzima a responsvel pela regulao da concentrao intracelular de T3 e tem um papel essencial na maturao e funo cerebral (BIANCO; KIM, 2006). No SNC, a desiodase II predominantemente expressa nos astrcitos e tanicitos (BERNAL, 2005).

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