ANAÉROBIOS

Professora : Eulália Azevedo Ximenes

 Anaeróbios estritos
❖ Definição

Grupo de bactérias que produz infecções em humanos e animais e não tem

capacidade de multiplicar-se em presença de oxigênio atmosférico.

❖ Fisiologia dos anaérobios

▪ Oxigênio é um elemento tóxico para a bactéria anaeróbia;

▪ Isso ocorre possivelmente por reações mediadas por flavoproteínas que

resultam na produção de radical superóxido (O2- ),peróxido de hidrogênio (H2O2)
e outros produtos tóxicos oriundos da redução do oxigênio;
▪ O ânion superóxido (O2- ) e o (H2O2) podem produzir radicais hidroxilas livres
(OH) que são poderosos agentes oxidantes.
❖ Habitat normal

Pele, trato gastrointestinal, boca, laringe e trato genitourinário.

1000:1
❖ Localizações comuns de infecções por anaeróbios
 INFECÇÃO POR ANAEROBIOS
▪ Endógena Principais infecções endógenas:
• abscessos;
• Infecção causada pela própria microbiota do paciente; • diarreia e colite (antibioticoterapia);
• endocardite;
• Resulta da utilização de agentes imunossupressores e de doenças • infecções dentárias;
que levam ao comprometimento do sistema imunológico do • sinusite.
hospedeiro;

▪ Exógena
Principais infecções exógenas:
• Infecção causada por micro-organismos presentes no meio ambiente, • diarreia
• botulismo causado por alimento;
alimentos , solo • gastroenterite por Clostridium
• São as mais comuns e mais bem conhecidas; perfringens;
• mionecrose (gangrena gasosa);
▪ Mista • tétano.

• Está associada a bactérias anaeróbias e anaeróbias facultativas= Gangrena

de Meleney ( bacilos anaeróbios facultativos + bacteroides causam uma
necrose gangrenosa cutânea
❖ Aspectos clínicos característicos da infecção

▪ Secreção fétida;

▪ Tecido necrótico;

▪ Presença de gás em tecidos ou secreções;

▪ Coloração negra em secreção com sangue;

▪ Infecção decorrente de mordida humana ou de

animal;

▪ Gangrena gasosa
❖ Fatores predisponentes
▪ Diminuição do fluxo sanguíneo por isquemias ou doenças crônico- degenerativas;

▪ Presença de áreas necróticas pela presença de obstruções em vísceras por doença

maligna ou corpo estranho.

▪ Acúmulo de sais endógenos (por exemplo, pontos de calcificação);

▪ Infecção por bactérias aeróbias ou anaeróbias facultativas;

▪ Manipulações cirúrgicas e contaminações pela microbiota ;

▪ Esterilização intestinal pré-operatória;

❖ Principais bactérias de interesse médico

▪ Bacilos Gram positivos esporulados Clostridium

▪ Cocos Gram positivos gênero Pepstreptococcus, Peptococcus

Propionobacterium; Actinomyces
▪ Bacilos Gram positivos não esporulados Lactobacillus e Bifidobacterium

▪ Cocos Gram negativos gênero Veillonella

▪ Bacilos Gram negativos Bacteroides; Prevotella

Fusobacterium e Porphyromonas
❖ Prevalência das espécies anaeróbicas nas infecções em humanos

Grupo Bacteroides fragilis

Grupo Bacterioides melaninogenicus
Fusobacterium spp.
Peptostreptococcus spp.
Clostridium spp.
Propionibacterium acnes
 * Amostras adequadas à cultura de anaeróbios

• Sangue
• Medula óssea
• Pus coletado por aspiração
• Fluidos corporais estéreis
• Aspirados de pulmões
• Urina obtida por aspiração suprapúbica
❖ Aspectos laboratoriais
▪ Ocorrência de formas pleomórficas na coloração de Gram;

▪ Observação no material, de bacilos Gram positivos esporulados (sugestivo de Clostridium);

▪ Presença de bactérias na coloração de Gram mas que não crescem nos meios mantidos em
aerobiose;

▪ Crescimento de bactérias somente na parte inferior de tubos com meios de cultura líquido ou
semi-sólido.
❖ Coleta do material
▪ As amostras devem ser colhidas de forma que não entrem em contato com oxigênio e
não se contaminem com bactérias anaeróbias facultativas ou aeróbias da microbiota
normal;

▪ Por este motivo devem ser aspiradas com seringa, da qual é eliminado o ar
imediatamente após a obtenção da amostra;

▪ O material não pode ser colhido com swab;

▪Swabs só os revestidos com hemoglobina e glicerol para facilitar a sobrevida dos
microrganismos
❖ Transporte do material

▪ O transporte pode ser feito com a mesma seringa com que foi colhido o material;

▪ Encaminhado imediatamente ao laboratório;

▪ Podem ser utilizados tubos contendo tioglicolato de sódio e os meios semi-sólidos de

Cary–Blair, Stuart, Amies
 EXAME DIRETO

Coloração de Gram
Clostridium perfringens

Gram positivo, forma de tijolo, esporulado, esfregaço com pouco polimorfonucleares

Bacteroides e Fusobacterium

Gram negativo, coloração bipolar nos bacteroides e morfologia pleomórfica no caso de

fusobactérias.

Actinomyces:
Coloração de Ziehl-Neelsen, bacilos ramificados e filamentosos
Exame direto

Imunoflorescência

Anticorpos marcados para Prevotella melaninogenicus e Bacterioides fragilis

Esta técnica é equivalente a cultura

Exame direto

cromatografia gasosa

Detecção de produtos do metabolismo das bactérias geralmente produtos voláteis

❖ Meio de cultura para isolamento
Aerobiose Anaerobiose
Incubação por
▪ Ágar sangue para anaeróbios: 24 horas
Semeio de 2 placas

▪ Ágar sangue enriquecido para anaeróbios:

• Sangue de carneiro ou de coelho (5%);

• L-cistina; Redutor de oxigênio Incubação por

48 horas
• Hemina (fator V);

• Vitamina K; Fatores de crescimentos adicionais

• Extrato de levedura;

• Aminoglicosídeo (amicacina) Devido a resistência dos anaeróbios

❖ Meio de cultura para isolamento

▪ Caldo carne-picada glicose- Meio de ROBERTSON

• Carne bovina moída Fonte de aminoácidos e proteínas

• Glicose Fonte de carbono

• L-cistina Redutor de oxigênio

ENRIQUECIMENTO
 ❖ Meio de cultura para crescimento/ isolamento

▪ Tioglicolato enriquecido:
Indicadores de O2

• Extrato de carne ▪ Resazurina sódica;

▪ Azul de metileno
• Hidrolisado de fígado
Fontes de carbono e nitrogênio
• Caseína

• Glicose

• Hemina (fator V)
Fatores de crescimentos adicionais
• Vitamina K

• Tioglicolato de sódio
Redutores de oxigênio
• L-cistina
 Meios
Os meios de isolamento poderão ser meios comumente utilizados com
suplementação dos fatores de crescimento, antibióticos e agentes redutores.

Ágar Columbia
Ágar Brucela
BHI
Enriquecimento
Tween 80 – estimulante do crescimento de cocos anaeróbios
Hemina, Vitamina K etc.

Neomicina 75 µg/mL para isolamento de bacteroides, clostrídios e cocos anaeróbios

Vancomicina 75 µg/mL para isolamento de fusobactérias
Acido nalidíxico 10 µg/mL com Tween 80 para o isolamento de Peptoestreptococcus
❖ Produção de anaerobiose

▪ Câmaras anaeróbias (glove box)- Nitrogênio, gás carbônico, hidrogênio

▪ Sistema das jarras de anaerobiose com geradores químicos. – Çatalisador paládio

CATALISADOR
2H2 + O2 2H2O
 Identificação de anaeróbios
• Crescimento em ágar sangue com demandas variadas de oxigênio= Estudar o comportamento da cultura
• A placa destinada a cultura em anaerobiose deverá conter um disco de metronidazol
• Morfologia das colônias
• Prevotella melaninogenicus = em meio a base de sangue forma colônias escuras
• C. perfringens = formam em ágar sangue um duplo halo de hemólise ( hemolisina alfa e theta )
• Prevotella melaninogenicus e C. dificille =sob luz UV aparece com coloração vermelho tijolo
• Fusobacterium necrophorum = em meio a base de cisteína e sob UV aparece com colônias verdes ;
• C. dificille = em meio a base de cisteína e sob UV aparece com colônias florescentes amarelas.

• Coloração de Gram
• Localização e forma dos esporos – Clostrídios – terminal , subterminal ; oval, profuso
• Tolerância a corantes :
• Bacteroides spp= sensíveis a violeta de genciana ( 1:100.000) em meio à base de extrato de levedura enriquecido.
• Fusobactérias + resistentes
• Tolerância à bile
• Resistentes + Grupo Bacteroides fragilis – resistentes à penicilina
• Presença de lipases, lecitinase, hialuronidase etc. + Clostrídios, fusobactérias, bacteroides
• Toxina e antitoxina = Teste de Nagler identificação de Clostridium perfringens –
A reação de Nagler é utilizada para diferenciar o Grupo Perfringens de outros clostridios que também são lecitinase positivos
(Clostridium baratii, Clostridium absonum, Clostridium bifermentans, Clostridium novyi) pela adição de uma antitoxina
especifica que neutraliza a lecitinase C.
 Bacteroides

Fusobacterium

Actinomyces

Clostridium
Triptose sulfito cicloserina

Clostridium Peptostreptococcus
Prevotella