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Curso de Graduao em Farmcia

Microbiologia Clnica

Meios Comerciais
para Provas de Identificao
Fonte: biomedicinapadrao.com;
.brandres-laboratorioclinico.blogspot.com:

FAN08S1:
Rodrigo Queiroz
Sarah Pessoa
Sara Jssica
Gleide Martins
Simone J.
Glaubson Sotero
Patrcia

MEIOS DE CULTURA
gar Esculina
gar Fenilalanina
CTA Cystine Tryticase Agar
Caldo Triptona e SIM
Caldo Malonato

Fonte: www.novamed.co.il

1 gar Esculina
Fonte: www.lookfordiagnosis.com

Princpio
Capacidade de hidrolisar a esculina.
Esculetina com sais de ferro
Forma precipitado marrom escuro ou preto

Glicosidase

www.lookfordiagnosis.com

Utilidade
Diferenciar Enterobacterias e no fermentadores.
Identificao de Streptococcus e Enterococcus
usando o meio com blis (prova de Bile-Esculina).

1 gar Esculina

ou base de gar sangue.

C
itrato frrico
Esculina
gua destilada.

Picar o meio e semear


superfcie do Agar

Incubar a 35 C por 24 horas.

Fonte: labmedvet.blogspot.com

crescimento recente (18 24 h)

gar trptic de soja (TSA)


Fonte: www.centerkit.com.br

Inoculao
Inocular colnias

Fonte: www.uwyo.edu

Fonte: www.mediaagar.com

Produto
gar trptic de soja (TSA)

gar sangue
4

1 gar Esculina

Controle de qualidade
Positivo: Klebsiella pneumoniae (13883)
Negativo: Pseudomonas aeruginosa (27853)

Klebsiella pneumoniae
www.infoescola.com
thunderhouse4-yuri.blogspot.com

Fonte: www.lookfordiagnosis.com

Interpretao
Cor original: palha.
Positivo: marrom escuro ou preto.
Negativo: inalterado (palha).

Pseudomonas aeruginosa
asylumresearch.com,
textbookofbacteriology.net
5

1 gar Esculina
Conservao e validade
Conservar de 4 a 8C, de 6 a 8 semanas.
Recomendaes
Glicosidase presente em todas enterobacterias

E. coli em gar MacConkey

exceto a Escherichia coli


Usar lactose ou outra fonte de carbono

Resultado falso positivo


Pseudomonas aeruginosa
Produo de piocina (escurecer o meio)

Shewanella putrefaciens
Produo de H2S

Pseudomonas aeruginosa em
TSA, gar Mueller Hinton
Fonte: biomedicinapadrao.com; Merino,
2007.

Fonte: qualidadeonline.wordpress.com

2 gar Fenilalanina
Princpio
Produo de acido fenilpiruvico a partir da
fenilalanina por ao enzimtica.
Fenilalanina desaminase (FAD)
Utilidade
Diferenciar gneros e espcies de enterobacterias.

2 gar Fenilalanina

Revelar a atividade da enzima FAD

Fonte: www.solostocks.com.br

Produto
Meio comercial: gar Fenilalanina:
Soluo de cloreto frrico 10% (frasco mbar)

Fonte: www.pro-analise.com.br

Inoculao
Inculo denso
colnia pura de 18 a 24 horas.

Incubar a 35C por 18 a 24 horas.

2 gar Fenilalanina

Fonte: perso.wanadoo.es

Interpretao
Adicionar o cloreto frrico no tubo inoculado
Cor original do meio: amarelo palha.
Positivo: colorao esverdeada na superfcie
Negativo: o meio permanece inalterado.
PPA

PPA+

Controle de qualidade
Positivo: Proteus vulgaris (8427) ou
P. mirabilis (12453)
Negativo: Escherichia coli (25922)

2 gar Fenilalanina

Conservao e validade
Conservar de 4 a 8C
seis a oito semanas.

Recomendaes
Interpretado imediatamente aps a adio do reagente
Deve ser feita em at 5 minutos

10

3 CTA

Utilidade
Usado para diferenciar espcies de Haemophilus
spp., Neisseria spp., Branhamella catarrhalis e
Corynebacterium spp.

Fonte: us.vwr.com

Cystine Tryticase Agar (CTA)


Princpio
Meio semi-solido
Estudo de fermentao de carboidratos de microorganismos exigentes.

Tubo de CTA

3 CTA

Indicador vermelho de fenol (detectar cido)


pH: 7,3 +/- 0,2

Fonte: bagginis.blogspot.com

Produto
Meio comercial Cystine Tryticase Agar Medium.

Carboidratos
glicose, maltose, lactose, sacarose, frutose, manose.

manter a umidade da atmosfera

Fonte: aulavirtual.usal.es

Inoculao
Fazer um inoculo bem denso, no centro do meio.
Incubar a 35 C
Jarra com vela acesa (anaerobiose)
Gaze embebida em gua

Incubadora Anaerbica (CO2)

Esquema de Incubadora de CO2

3 CTA

indicando acidificao (fermentao) e turvao.

Negativo: cor original e sem turvao


Ausncia de crescimento.

Fonte: www.condalab.com/pdf/1502.pdf

Interpretao
Cor original: alaranjado.
Positivo: cor amarela

Controle de qualidade
Fonte: www.cdc.gov

Tabela. Controle de Qualidade do Meio CTA (Cystine Tryticase gar)


Positivo
Negativo
Glicose
Maltose
Lactose
Sacarose
Frutose

Neisseria sicca
N. sicca
N. lactamica
N. sicca
N. sicca
Haemophilus
Manose
parainfluenzae
Fonte: Brasil, 2013.

Branhamella catarrhalis
B. catarrhalis
N. sicca
B. catarrhalis
B. catarrhalis
H. influenzae

N. meningitidis em CTA (Maltose,


glicose, lactose e sacarose)

3 CTA

Fonte: www.stramedical.com.br

Conservao e validade
Temperatura ambiente por 3 meses.
Recomendaes
Caso de provas negativas
incubar um perodo maior (72 horas)

No autoclavar a base com o carboidrato


pode degradar o carboidrato.

Fazer inculo denso


inculos fracos podem dar falso negativo

Autoclave

4 Caldo Triptona e SIM


Fonte: pt.wikipedia.org

Princpio
Habilidade de metabolizar o triptofano em indol.
Oxidao do Triptofano e adio de reagentes
Reagente de Erlich ou Kovacs.

Triptofanase

Indol
REAGENTE

Cor vermelha

Fonte: lqes.iqm.unicamp.br

Utilidade
Diferenciar gneros e espcies de
enterobacterias, no fermentadores, Haemophilus
e anaerbios.

Triptofano

4 Caldo Triptona e SIM

Caldo Triptona
SIM (sulfato/indol/motilidade Agar).

Reativo Erlich
Reativo de Kovacs
Xilol ou xileno (dimetil benzeno)

Meio comercial

B) Meio SIM
Inocular com agulha bacteriolgica
meio na posio vertical

Reativos

Xilol

Fonte: www.soq.com.br

Inoculao
A) Meio Caldo Triptona
Inculo denso para Haemophilus
Incubar a 35C por 24 horas ou ate 48 horas

Fonte: www.kairosafe.it

Fonte: www.labfast.com.br

Produto
Meio comercial

4 Caldo Triptona e SIM


Fonte: es.wikipedia.org

Interpretao
Caldo Triptona (reativo de Ehrlich ou Kovacs)
Colocar xilol
homogeneizar vigorosamente e aguardar 1 minuto.

Adicionar reativo de Erlich e realizar a leitura.


Indol positivo: anel vermelho abaixo do xilol.
Indol negativo: anel amarelo abaixo do xilol.

Fonte: dianayjulian.galeon.com/bioquimicas.htm#SIM

Controle de qualidade para meio Caldo Triptona:


Positivo: Escherichia coli ATCC 25922.
Negativo: Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Indol positivo

4 Caldo Triptona e SIM


Interpretao
Meio SIM (reativo de Kovacs)
Leitura da motilidade e do H2S.
Motilidade + : migrao da linha do inculo (turbidez)
Motilidade - : apenas na linha do inculo (lmpido)
SIM- Motilidade

Controle qualidade para meio SIM


Proteus vulgaris ATCC 13315, Shigella sonnei ATCC 25931,
Escherichia coli ATCC 25922

Microrganismo
Proteus vulgaris
Shigella sonnei
Escherichia coli

Fonte: www.biosystems.com.br

Adio do reativo de Kovacs


H2S + : linha de inoculao de cor negra.
H2S - : linha de inoculao inalterada.
Indol + : um anel vermelho.
Indol - : um anel amarelo.

SIM- cido (H2S)

Controle de qualidade
H2S
INDOL MOTILIDADE
+
+
+
+
+
SIM- Indol

4 Caldo Triptona e SIM


Conservao e validade
Caldo Triptona e Meio SIM
6 meses se conservado de 2 a 8C.

Recomendaes
Baixar a produo de Indol
pH cido (relacionado a enzima)
Cultura no incubada em aerobiose

Alguns formam indol mas:


quebram ou baixam rapidamente a produo
Clostridium spp.

Indol positivo se perde aps 96 horas de incubao.


Pequenas modificaes BGNNF (fracos produtores de indol)
meio e nriquecido, meio BHI enriquecido com 2% de soro de coelho
extrao com xilol e revelao com reagente de Ehrlich.

Inculo denso em caldo triptona com incubao de 48h para


Algumas cepas de Cardiobacterium homens, Kingella spp., Sutonella indologenes,
Eikenella corrodens

5 Caldo Malonato
malonato de sdio

Princpio
Habilidade de utilizar malonato de sdio
como nica fonte de carbono
resultando em alcalinizao do meio

Indicador: Azul de bromotimol

Utilidade
Diferenciar gneros e espcies de enterobacterias e no
fermentadores.

5 Caldo Malonato

Procedimentos
Pesar e hidratar o meio
Ajustar o pH 6,7 0,2.
Distribuir 1,5 mL em tubos com tampa de rosca.
Esterilizar em autoclave.
Deixar esfriar em temperatura ambiente.

Inoculao
Inocular colnias puras de 18 a 24 horas.
Inoculo leve.
Incubar a 35C de 24-48 horas
observando o cultivo diariamente.

Fonte: www.renylab.ind.br

Frmula/Produto
Meio comercial: Caldo Malonato.

Ala bacteriolgica

5 Caldo Malonato

Controle de qualidade
Positivo: Klebsiella pneumoniae (13883)
Negativo: Escherichia coli (25922)

Caldo Malonato + (azul)

Fonte: dianayjulian.galeon.com/bioquimicas.htm#MALONATO

Interpretao
Cor original do meio: verde.
Positivo: azul.
Negativo: inalterado (verde).

5 Caldo Malonato

Conservao e validade
Conservar de 4 a 10C
6 a 8 semanas.

Recomendaes
Alguns resultados negativos de cor amarela
a fermentao da glicose aumenta a acidez

Alguns malonato positivo tem fraca alcalinizao


Incubar um tubo sem inoculo para comparao
Incubar por mais 24 horas
Se incubao prolongada tive cor azul fraco (azul esverdeado)
ser negativo

CONCLUSO
Meios Comerciais para Provas de Identificao
Importncia
Identificar
Detectar
Isolar

Espcies e gneros bacterianos


Com interesse clnico

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

BRASIL. Agencia Nacional de Vigilncia Sanitria. Microbiologia Clinica para o Controle de Infeco
Relacionada a Assistncia a Sade. Modulo 5 :Tecnologias em Servios de Sade: descrio dos meios de
cultura empregados nos exames microbiolgicos/Agencia Nacional de Vigilncia Sanitria. Braslia:
Anvisa, 2013.

MACFADDIN, Jean F. Pruebas bioqumicas para la identificacin de bacterias de importancia


clnica. Disponvel :
<http://books.google.com.br/books?id=FYWSzy7EjR0C&printsec=frontcover&hl=ptBR#v=onepage&q&f=false>. Acesso em: 15/11/2014.

Sarah Pessoa: apresentar, introduo e concluso


Rodrigo Queiroz: gar Esculina
Gleide Martins: gar Fenilalanina
Sara Jssica: CTA Cystine Tryticase Agar
Patrcia : Caldo Triptona
Glaubson Sotero: Meio SIM
Simone J.: Caldo Malonato