16/04/2009

NUTRIO E CULTIVO DE
MICRORGANISMOS

Vernica Ortiz Alvarenga

Introduo
O termo crescimento refere-se ao
aumento do nmero de microrganismos
presentes na populao.
Este aumento obtido atravs de
diviso binria, processo em que uma
clula d origem a duas outras pela
separao do material celular em duas
metades equivalentes

Nutrio microbiana
Fornecimento de nutrientes
Sntese de macromolculas

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Exigncias Nutricionais
GUA
Essencial para os microrganismos:
absoro nutrientes dissolvidos
Disponibilidade varivel no ambiente
Se ambiente possui < concentrao de
gua: clula aumenta
Concentrao de solutos internos
(bombeamento de ons para o interior
Celular ou pela sntese de solutos
orgnicos)

Exigncias Nutricionais
ENERGIA

Exigncias Nutricionais
Tipo

Fonte de Energia

Fonte de Carbono

Fotolitotrfico (ou

Luz

CO2

Luz

Composto orgnico

Quimiolitotrfico (ou

Oxidao de composto

CO2

quimioautotrfico)

qumicos inorgnicos

fotoautotrfico)
Fotoorganotrfico (ou
fotoheterotrfico)

Quimioorganotrfico
(ou

Oxidao de composto Composto orgnico

qumico orgnicos

quimioheterotrfico)

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Exigncias Nutricionais
CARBONO
todos os organismos requerem alguma
forma de carbono
esqueleto das 3 maiores classes de
nutrientes orgnicos : lipdeos,carboidratos
e protenas: fornecem energia para o
crescimento e servem como unidade bsica
para biossntese
heterotrficos utilizam compostos orgnicos
como fonte de carbono
autotrficos utilizam o CO2 como fonte de
carbono

Exigncias Nutricionais
NITROGNIO
todos os organismos necessitam em
alguma forma
parte essencial dos aminocidos
(protenas) e cidos nuclicos
bactrias so mais versteis para N que
eucariotos
podem utilizar o N2 (fixao biolgica),
nitratos, nitritos e sais de amnia
em
geral
compostos
nitrognio
orgnico: aminocidos e peptdeos

Exigncias Nutricionais
ENXOFRE, HIDROGNIO E FSFORO
essenciais a todos os organismos
S necessrio na biossntese de cistena,
cistina, metionina e de vitaminas (tiamina e
biotina)
P essencial para a sntese de cidos
nuclicos e ATP
sais inorgnicos (sulfatos e fosfatos) podem
ser utilizados para suprir
estes elementos tambm presentes em
fontes proticas (aa), DNA e RNA
alguns destes elementos so encontrados
na gua ou na atmosfera

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Exigncias Nutricionais
POTSSIO, MAGNSIO, CLCIO E
FERRO
K, Mg cofatores enzimtico
Ca estabilizao parede
formao de endosporos

celular

Fe faz parte dos citocromos, e protenas

transporte eltrons

Exigncias Nutricionais
MICRONUTRIENTES OU ELEMENTOS
TRAO:
Co, Cu, Ni, Mo, Mn, Se, Zn, Cr
necessrios em concentrao muito
baixa (g/L)
cofatores de enzimas
geralmente no preciso adicionar:
presentes na gua
se gua desmineralizada: adicionar
soluo elementos traos

Exigncias Nutricionais
FATORES DE CRESCIMENTO:
compostos

orgnicos:
vitaminas,
aminocidos, purinas e pirimidinas

muitas vitaminas (tiamina, biotina,

cobalamina) atuam como coenzimas
alguns m.o. no sintetizam os fatores
que devem ser disponveis no meio

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Condies de cultivo

importante, pois os
microrganismos no possuem qualquer
mecanismo de controle interno deste fator,
o que pode afetar as reaes qumicas da
clula.

Temperatura

Psicrfilos: ou microrganismos que crescem em

baixas temperaturas (7- 20C);
Mesfilos: ou microrganismos que crescem em
temperaturas moderadas (25 40C);

Condies de cultivo
Termfilos: ou microrganismos que crescem em
altas temperaturas;

Baseado nesta temperatura tem-se os

seguintes grupos:
Hipertermfilos: toleram ou crescem em
temperatura de 100 oC ou mais
Psicrotrficos: no possuem um timo de
temperatura. Crescem a 7 oC ou menos, alguns
crescem abaixo de 0 oC e outros podem crescer
em temperaturas entre 37 e 45 oC;

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Condies de cultivo
Exigncias
atmosfricas


os
microrganismos podem ser divididos, ainda,
de acordo com o seu requerimento em
oxignio e gs carbnico.
Aerbios obrigatrios: so microrganismos que,
para crescerem e se multiplicarem, necessitam
de uma atmosfera que contenha O2 em uma
concentrao equivalente ao ar atmosfrico (2021%).
Ex: micobactrias, fungos filamentosos (bolores);

Condies de cultivo
Microaerfilas:
o
oxignio
requerido
para
multiplicao menor do que aquele encontrado no
ar atmosfrico (cerca de 5% de O2)
Ex: Espcies de Campylobacter, causadora da diarria;

Anaerbios estritos: crescem somente na ausncia

total de oxignio.
Ex.: Clostridium botulinum;

Anaerbios facultativos: crescem tanto na presena

como na ausncia de oxignio.
Ex.: Enterobactrias, estreptococos e estafilococos;

Anaerbios aerotolerantes: no requer oxignio e

cresce melhor na sua ausncia, mas pode
sobreviver em atmosferas que contenham o mesmo.
Ex.: Lactobacilos.

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Condies de cultivo

Culturas
de
microrganismos
mostrando na seqncia aerbios,
anaerbios estritos, anaerbios
facultativos,
microaerfilos
e
anaerbios aerotolerantes.
Fonte: Brock et al. (1991).

Condies de cultivo
O2 poderoso agente oxidante e excelente aceptor
de eltrons na respirao
Processos celulares geram formas reativas de O2
Espcies reativas so oxidantes poderosos que
destroem constituintes celulares

clulas devem ser capazes de se proteger contra

estas espcies reativas para manter sua
integridade.

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Condies de cultivo
Superxido dismutase (SDO) e
catalase so as enzimas mais
importantes
Presena de catalase varivel
aerbios, facultativos, microaeroflicos e
aerotolerantes possuem SDO
Anaerbios estritos no possuem estas
enzimas e portanto no conseguem
sobreviver na presena de oxignio

Condies de cultivo

Condies de cultivo

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Condies de cultivo

Condies de cultivo
O envelope de Gaspak gera atravs
de adio de gua H2 e CO2
Jarra fechada e O2 presente
removido por reao com o H2
catalisada pelo paldio formando gua
usada para anaerbios aerotolerantes

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Condies de cultivo
Exigncia em Gs carbnico
Algumas bactrias crescem melhor na
presena de concentraes aumentadas
de CO2 , tais organismos so chamados
de capnoflicos.
Ex.: Campylobacter.

Condies de cultivo
pH
fator limitante do crescimento microbiano.
A maioria das bactrias cresce bem em
meios com pH ao redor de 7,0
Muitas espcies tolerarem variaes de pH
entre 4,0 e 9,0
timo de crescimento se localiza entre 6,5 e
7,5.
Poucas bactrias podem se desenvolver
abaixo de pH 4,5-5,0
mas esses so os
limites preferidos pelos fungos e leveduras.

Condies de cultivo
pH
Thiobacillus thiooxidans que transforma o
enxofre em cido sulfrico, e cresce bem a pH
1,0
Vibrio comma, agente causador da clera
asitica, que desenvolve a pH 10,0.

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Condies de cultivo
Presso Osmtica
meios de cultura com presses
osmticas
inferiores
da
clula,
geralmente no afetam sua viabilidade

que a rigidez da parede celular impede a
entrada excessiva de gua.
Entretanto, meios de cultura com
presses osmticas mais elevadas

causam a perda de gua intracelular,
podendo ter efeito bacteriosttico ou
bactericida.

Condies de cultivo
Isotnico - onde a concentrao de solutos em
um meio igual quela no interior da clula.
No h movimento de gua para dentro e para
fora da clula
Hipertnico - concentrao de solutos fora da
clula maior que no interior. A gua flui para
fora da clula resultando na desidratao e
contrao da clula
Hipotnico - a concentrao de soluto no
interior da clula maior que fora dela. A gua
flui para dentro da clula: pode inchar e se
romper - plasmlise

Condies de cultivo
Outras Exigncias


crescem
melhor
Haloflicos
concentraes aumentadas de sais.

em

Geralmente
as bactrias
crescem
em
concentraes de 0,9 %.
Bactrias Halfilas facultativas (2 a 15% de
NaCl)
Bactrias Halfilas extremas (30% de sal)

Xeroflicos
crescem melhor em ambientes

mais secos, com menor teor de gua.
Osmoflicos
crescem melhor em
ambientes com altos teores de acares.

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Condies de cultivo

Condies de cultivo
Meio de cultura
preparao contendo
os nutrientes necessrios para cultivar e
manter microrganismos viveis em
laboratrio.
Duas grandes classes de meios de
cultura
Meio definido ou sinttico: composio
qumica exata conhecida
Meio complexo: composio qumica exata
no conhecida (composto por extratos
naturais de carne, levedo, protenas
hidrolisadas)

Condies de cultivo

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Condies de cultivo
Substratos para meios complexos:
Extrato de Carne: extrato aquoso de
tecido muscular, concentrado sob a
forma de pasta, contm carboidratos, N
orgnico, vitaminas hidrossolveis e sais.
Peptona: produto da digesto da carne
(enzimtica ou cida), fonte de N
orgnico e vitaminas.
Triptona: hidrolisado pancretico de
carne , rica em nitrognio-amnico;
destinado ao isolamento de organismos
de difcil crescimento.

Condies de cultivo
Substratos para meios complexos:
Extrato de Levedura: extrato aquoso de
clulas de leveduras lisadas, fonte excelente
de substncias estimulantes do crescimento
como vitamina complexo B; contm
compostos orgnicos de N e C.
Extrato de malte: extrato aquoso de cevada
malteada. Rica em carboidratos, contm
material nitrogenado, vitaminas e sais
minerais.
Tripticase: peptona derivada da casena por
digesto pancretica,fonte rica em
nitrognio de aminocidos.

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Condies de cultivo
Meios complexos so altamente
nutritivos
geralmente mais fceis de preparar
so os mais usados ( composio exata
no necessria)
mais adequados para fastidiosos

Condies de cultivo
Quanto ao estado fsico os meios podem ser:
lquidos: (caldos) nutrientes so dissolvidos em
gua e esterilizados
slidos: so preparados a partir da adio, ao
meio lquido de um agente solidificante, antes
da esterilizao do meio.
gar-gar: polissacardeo obtido de algas
marinhas . Usado como agente solidificante dos
meios. Funde a 100C e gelifica qua ndo a
temperatura menor de 45C. Concentrao
1,5 - 2% p/v. No serve como nutriente!!!!
semi-slidos: obtido atravs da adio de uma
quantidade reduzida de agente solidificante (0,3
a 0,5% de gar)

Condies de cultivo
Meios lquidos: multiplicao celular ;
processos industriais em reatores
Meios slidos: usados para imobilizao
de m.o. em placas ou tubos
aparecimento de massas celulares: colnias
Colnia: originada da multiplicao de m.o.
em meio slido importante para a
caracterizao dos m.o. para colnia ser
visvel : 1 x 106 clulas so isolados em
meios slido visando obteno de culturas
puras
Cultura pura: contm um nico tipo de m.o.
sem contaminantes

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Condies de cultivo

Condies de cultivo

Meios de cultura com finalidades

especiais
Meios Seletivos
permitem crescimento
de um tipo particular de microrganismo
suprimindo o desenvolvimento de outros
gar Sabouraud: pH 5,6 e alta concentrao de
glicose (seletivo para fungos)
gar
verde
brilhante:
seletivo
para
enterobactrias Gram - (Salmonella); o corante
verde brilhante adicionado ao meio inibe as
bactrias Gram (+)
Adio de antibiticos: seletivos para os m.o.
resistentes estes agentes antimicrobianos

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Meios de cultura com finalidades

especiais

Meios de cultura com finalidades

especiais
Meios diferenciais : permitem a distino
entre diferentes grupos de m.o.
Produo de enzimas: adio substrato e
verificao halo hidrlise
Hemlise em gar sangue: Streptococcus e
Staphylococcus hemolticos

Meios de cultura com finalidades

especiais

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Meios de cultura com finalidades

especiais
Meios Seletivos/Diferenciais
agem como
seletivos e diferenciais
muito teis no
diagnstico de patognicos (coliformes fecais)
Ex: gar MacConkey - contm sais biliares e corante
cristal violeta, que inibem o crescimento de

Gram + e permitem o desenvolvimento de

Gram - e ainda lactose e o indicador
vermelho neutro, que distingue as Gram
negativas produtoras de cido (vermelhas)
das Gram negativas no produtoras de
cido (amarelas) identificao de coliformes

Meios de cultura com finalidades

especiais

Meios de cultura com finalidades

especiais
Meios de Enriquecimento
usados para
selecionar
microrganismo
presente
em
pequenas quantidades em relao populao
de um ambiente.
favorece o crescimento da espcie desejada,

mas no o crescimento das outras espcies

presentes em uma populao mista
Ex: isolamento de bactrias que oxidam o fenol
- podem ser isoladas de amostras do solo,
utilizando meio de enriquecimento, contendo
sais de amnia, e fenol como nica fonte de
carbono e energia somente os microrganismos
capazes de oxidar o fenol estaro presente em
grande nmero depois de vrios cultivos

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Meios de cultura com finalidades

especiais
Meios de Estocagem
utilizado para a
manuteno
da
viabilidade
e
das
caractersticas fisiolgicas de uma cultura
meio diferente do timo para o crescimento desenvolvimento rpido: morte rpida
a glicose favorece o crescimento, prefervel
omiti-la na preparao de um meio de
estocagem.

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