EXPRESSO GNICA

O termo expresso gnica refere-se ao processo em que a informao codificada por um determinado gene decodificada em uma protena. Teoricamente, a regulao em qualquer uma das etapas desse processo pode levar a uma expresso gnica diferencial.
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Objetivos da regulao da expresso gnica em bactrias e em organismos multicelulares

Nas bactrias o controle da expresso gnica

serve principalmente para permitir que as clulas se ajustem s mudanas nutricionais no ambiente, de forma que o seu crescimento e diviso sejam otimizados. Em organismos multicelulares(eucariotos) a expresso gnica controlada regula um programa gentico fundamental para o desenvolvimento embrionrio e a diferenciao.
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Como uma clula pode controlar as protenas que ela faz?

Controlando quando e como um determinado gene transcrito; Controlando como um transcrito primrio de RNA sofre o splicing ou processado; Selecionando quais mRNAs so traduzidos; Ativando ou inativando seletivamente as protenas depois da sua sntese.
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Estrutura Gnica e Definio de Termos

Gene: toda a seqncia de cido nuclico que necessria para a sntese de um polipeptdeo funcional ou molcula de RNA. Unidade de Transcrio : segmento de DNA que codifica a seqncia no transcrito primrio. Promotor: a seqncia mnima necessria para que a transcrio se inicie corretamente. Elementos Regulatrios em Cis: elementos que regulam a iniciao da transcrio.
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Diferenas na Iniciao da Transcrio em Eucariotos e Bactrias

Enquanto as bactrias contm um nico tipo de RNA-polimerase, as clulas eucariticas apresentam trs: RNA-polimerase I, RNApolimerase II e RNA-polimerase III. A RNA-polimerase bacteriana capaz de iniciar a transcrio sem o auxlio de protenas adicionais. As RNA-polimerases eucariticas requerem a ajuda de um grande conjunto de protenas chamadas fatores gerais de transcrio.
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Diferenas na Iniciao da Transcrio em Eucariotos e Bactrias

Em eucariotos as protenas reguladoras da expresso gnica (repressores e ativadores) podem influenciar a iniciao da transcrio, mesmo quando esto ligadas ao DNA a milhares de pares de nucleotdeos distante do promotor. Em bactrias os genes so freqentemente controlados por uma nica seqncia regulatria, tipicamente localizada prxima ao promotor. A iniciao da transcrio em eucariotos deve levar em considerao a compactao do DNA nos nucleossomos e as formas mais compactas da estrutura da cromatina.
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As Trs RNA-Polimerases das Clulas Eucariticas

RNA-polimerase I - transcreve os genes para rRNA. RNA-polimerase II - transcreve todos os genes que codificam protenas, mais alguns genes que codificam pequenos RNAs (p.ex., aqueles presentes nos spliceosomes). RNA-polimerase III transcreve os genes de tRNAs, rRNA 5S e genes para pequenos RNAs estruturais.

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Fatores Gerais de Transcrio

Os fatores gerais de transcrio so responsveis pelo posicionamento correto da RNA-polimerase no promotor, ajudam na separao das fitas de DNA para permitir o incio da transcrio, e liberam a RNApolimerase do promotor quando a transcrio se inicia.
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Formao do Complexo de Iniciao da Transcrio

TFIID liga-se a regio TATA, possibilitando a ligao de TFIIB. Isso seguido pela ligao de TFIIF e RNApolimerase II. TFIIE, TFIIH e TFIIJ ento se juntam ao complexo. TFIIH usa ATP para fosforilar a RNApolimerase II, mudando a sua conformao de forma que a RNA-polimerase liberada do complexo e capaz de iniciar a transcrio.
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Etapas na formao do complexo de iniciao da transcrio em eucariotos

Estrutura tridimensional da Protena que se liga a TATA (TATA-Binding Protein TBP)

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Complexo TBP-DNA

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Complexo TBP-TFIIA-DNA

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Complexo TBP-TFIIA-TFIIB-DNA

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Os Fatores Transcricionais Seletivos Aumentam a Atividade do Promotor

Os promotores isoladamente so geralmente ineficientes. Fatores de transcrio seletivos que se ligam regio upstream e a enhancers aumentam a iniciao. Em alguns casos, protenas adicionais (mediadores, coativadores) so requeridos para estimular a transcrio. Protenas que se ligam a seqncias de enhancer devem atuar de forma semehante quelas que se ligam prximas ao promotor. O DNA entre o enhancer e o promotor forma uma ala para permitir que as protenas ativadoras ligadas ao enhancer faam contato com as protenas ligadas ao promotor.
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Domnios Funcionais dos Fatores Transcricionais Seletivos

Domnio de ligao ao DNA - liga a protena no stio de ligao do DNA. Seqncias de localizao nuclear requeridas para transporte para dentro do ncleo. Domnio de ativao transcricional - realiza o contato com os fatores gerais de transcrio. Regio de dimerizao requerido para formar homo- ou heterodmeros com outras protenas. Domnio de ligao de ligante necessrio para ligao de composto que pode funcionar como ativador do fator.
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Motivos de Ligao a DNA nos Fatores de Transcrio

Homeodomnio consiste de trs -hlices adjacentes. A maior parte do contato com as bases do DNA feita pela hlice 3. Exemplos: protenas Hox e outras protenas reguladoras do desenvolvimento. Dedo de zinco (Zinc finger) - Esse motivo constituido de uma hlice e uma folha pregueada unidas por um on zinco. Exemplos: receptores de hormnioo esterides, Sp1. Regio bsica e zper de leucina (ou bZip) A regio bsica serve para o contato com o DNA e o zper de leucina serve para a formao do dmero. Exemplos: Fos, Jun (complexos Fos-Jun teriam funo central na mediao de resposta nuclear a sinais na superfcie celular) Hlice-ala-hlice Contm um motivo estrutural muito semelhante a b-zip, exceto que uma ala no helicoidal separa as duas -hlices em cada monmero. Exemplo: MyoD (fator regulatrio importante na determinao e diferenciao de msculo).

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Genes Eucariticos So Regulados por Combinao de Protenas

A maioria das protenas reguladoras de genes

atuam como parte de um comit de protenas reguladoras, todas essenciais para a expresso de um determinado gene na clula correta, em reposta a uma dada condio, no tempo certo e no nvel requerido. O termo controle combinatorial refere-se a forma como grupos de protenas trabalham juntas para determinar a expresso de um nico gene.
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Uma nica Protena Pode Coordenar a Expresso de Diferentes Genes

Embora o controle da expresso gnica em eucariotos seja combinatorial, o efeito de uma nica protena reguladora pode ser decisiva para ligar e desligar, simplesmente completando a combinao necessria para ativar ou reprimir um gene. Um exemplo disso em humanos o caso do receptor de glicocorticide. Para se ligar aos stos no DNA o receptor precisa formar um complexo com uma molcula de um hormnio esteride (p.ex. cortisol). Em resposta aos hormnios glicocorticides, as clulas do fgado aumentam a expresso de vrios genes.
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Efeito de uma nica Protena Reguladora na Diferenciao

Estudos com clulas musculares em diferenciao, em cultura, possibilitaram a identificao de protenas reguladoras importantes, expressadas somente em cleulas musculares, que coordenam a expresso gnica. Quando o gene que codifica uma dessas protenas reguladoras, MyoD, introduzido em fibroblastos, eles passam a se comportar como mioblastos e fundem-se para formar clulas semelhantes s musculares.
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Um nico Gene que Codifica uma Protena Reguladora Pode Estimular a Formao de um rgo Inteiro
Estudos sobre o desenvolvimento de olho em Drosophila, camundongo e humanos mostraram que um nico gene que codifica uma protena reguladora (Ey em moscas flies e Pax6 em vertebrados) crucial para o desenvolvimento do olho. Quando expressado num tipo celular apropriado, Ey pode desencadear a formao de um rgo inteiro (olho), composto de diferentes tipos de clulas, todas corretamente organizadas no espao tridimensional.
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Os processos de iniciao, alongamento, processamento e terminao da transcrio so acoplados em eucariotos

Maniatis & Reed NATURE |VOL 416 | 4 APRIL 2002

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Acoplamento das maquinarias envolvidas na transcrio, capping, splicing e poliadenilao

Maniatis & Reed NATURE |VOL 416 | 4 APRIL 2002

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Modelo de acoplamento de splicing a exportaao do mRNA e decaimento mediado por nonsense (NMD)
Maniatis & Reed NATURE |VOL 416 | 4 APRIL 2002

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Influncia da Estrutura da Cromatina na Transcrio em Eucariotos

A maior parte do DNA em uma clula eucaritica est complexada nos nucleossomos e a estrutura espiralada dificulta o acesso de fatores de transcrio e RNApolimerase. A iniciao da transcrio depende da remoo dos nucleossomos da regio promotora do gene.

Durante a sntese de DNA, quando os nucleossomos so substitudos, poderia haver competio entre as histonas e os fatores de transcrio (p.ex. TFIID) pelos stos promotores. A ligao e dirupo dos nucleossomos por ativadores.
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Disrupo e Reorganizao do Nucleossomo

Complexos poderiam estar envolvidos na disrupo dos nucleossomos:

Participao de fator GAGA e fator de remodelamento de nucleossomo (nucleosome-remodeling factor, NURF) Participao de complexo SW1/SNF Existe uma boa correlao entre acetilao de histona e a atividade transcricional da cromatina.

Competio entre histonas e fatores de transcrio poderia estar envolvida no controle da expresso genica.

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Regies Controladoras de Lcus (Locus Control Regions, LCRs)

Regies controladoras de lcus (LCRs) so seqncias de DNA essenciais para o estabelecimento de uma configurao aberta da cromatina. Elas so capazes de inibir a represso normal da transcrio sobre reas relativamente grandes contendo vrios genes. Um dos mais bem estudados o LCR que controla a expresso tecido- especfica da famlia de -globin.

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Correlaes entre a Metilao do Promotor e Inatividade Gnica

Em clulas sangneas vermelhas de humanos e galinhas, o DNA envolvido na sntese de globina est completamente (ou quase completamente) no-metilado. O gene de ovalbumina de galinha o est metilado nas clulas do oviduto, mas metilado nos outros tecidos. Nos somitos de camundongo, a demetilao de um enhancer de MyoD precede a transcrio de MyoD e essencial para a especificao dessas clulas como precursoras de msculo.
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