PROTEÍNAS

Biomoléculas com muitas funções celulares,

desde estruturais a funções no metabolismo
(enzimas). São polímeros de aminoácidos, com
estrutura tridimensional definida. Quando as
proteínas estão puras, podem ser cristalizadas,
e a cristalização apenas ocorre se há uma
unidade repetitiva que se junta.
A urease foi cristalizada em 1926, e mesmo
sendo uma molécula gigantesca, todas as
moléculas têm a mesma estrutura
tridimensional definida. Cristais da insulina: Estrutura primária
Sequência de aminoácidos da proteína. Define
a estrutura tridimensional e o tipo da proteína.
Nos permite fazer inferências evolutivas.

Determinação da sequência primária deu o

Estrutura das proteínas
A estrutura das proteínas é classificada em três
níveis:
-estrutura primária: sequência de aminoácidos
da proteína;
-estrutura secundária: como a sequência de
aminoácidos se dobra no espaço;
-estrutura terciária: dobramento da estrutura
secundária;
-estrutura quaternária: agregação de proteínas
com estrutura terciária.
prêmio Nobel a Frederick Sanger. Queria
encontrar a sequência da insulina, sintetizada
como uma pré-pro-proteína.
Para comparar duas sequências de proteínas,
precisa alinhar as sequências e ver quantos
aminoácidos são idênticos. Entre hemoglobina
e mioglobina, quando alinhados, há dois picos
de coincidência.

Normalmente, as proteínas contêm 100 ou

mais aminoácidos, que, nas proteínas, são
chamados resíduos de aminoácidos. Podem
conter uma única cadeia polipeptídica, e
podem ser formadas por mais de uma cadeia
peptídica, que são proteínas com estrutura Introduzindo quebra na sequência da
quaternária. hemoglobina, o número de resíduos idênticos
aumenta. Os números podem parecer baixos,
mas são estatisticamente relevantes.

Aminoácidos que pertencem à mesma classe

podem ser considerados nessa comparação,
aumentando a quantidade de aminoácidos
semelhantes.
Leghemoglobina é extraída de plantas, mas
ainda tem semelhança estrutural com a
hemoglobina.
α-hélice
Cadeia polipeptídica em volta de eixo
imaginário, com giro à direita, com uma volta a
cada 3,6 resíduos de aminoácidos. No meio
dessa volta estão as ligações peptídicas, e os
grupos R dos aminoácidos estão voltados para
a periferia da hélice.

Essas três proteínas acabam tendo estruturas

tridimensionais também semelhantes.

Isso permite fazer inferências evolutivas.

Primeiro havia ancestral comum, que se
derivou entre proteínas para plantas e para
animais, e nos animais houve nova
diferenciação, entre a mioglobina e as cadeias
da hemoglobina. Há forças de estabilizam essa estrutura. São
interações de hidrogênio a cada 3,6
aminoácidos. Cada ligação peptídica faz ligação
de hidrogênio com aminoácidos 3 posições a
frente.

Estrutura secundária
A ligação peptídica tem a característica de ter
quase duplas ligações, definindo planos rígidos
nessa cadeia. Isso permite a estrutura
secundária.

Representadas como uma fita enrolada.
Queratina
Representante da estrutura da α-hélice. Forma
os cabelos. São várias α-hélice, que formam
protofilamentos e protofibrilas, que formam a
estrutura do cabelo.
As cadeias de α-hélice se estabilizam umas com
as outras através de pontes dissulfeto. As
cisteínas podem sofrer reação de oxirredução e
formar essas pontes. Isso pode ser utilizado
para moldar o cabelo.
Agente redutor pode ser utilizado para quebrar
as pontes dissulfeto, e com calor e agente
oxidante essas pontes são refeitas.
Miosina
Tem grande cauda, formada por duas α-hélices
enroladas, e tem também uma cabeça. Na
miosina há metilisina, um aminoácido
modificado.
As proteínas fibrosas geralmente têm estrutura
em α-hélice. Mas isso nem sempre ocorre,
como é o caso da actina, que é um polímero (F-
actina) de proteínas globulares (G-actina).
Colágeno
Encontrado na pele, cartilagem, ossos, tecido
conjuntivo. Não é uma α-hélice, embora seus
filamentos sejam chamados de filamentos alfa.
Três filamentos se enrolam formando a fibra de
colágeno.
O que determina sua estrutura é três
aminácidos, sendo basicamente uma repetição
de Gly-Pro-Ala ou Gly-Pro-hidPro. A Gly fica no
meio das três fibras (em vermelho), e é
importante para a estrutura, sendo que a
mudança desse aminoácido causa problemas
congênitos.
 hidroxiprolina, o que é feito pela enzima prolil
hidroxilase. Essa reação é de oxidorredução, e
depende da vitamina C.

As fibras de colágeno formam estrutura

ramificada de filamentos, e resíduos de Lys ou
hidLys ligam uma cadeia a outra.

O mesmo ocorre com os resíduos de lisina, pela

lisil hidroxilase, que depende de vitamina C.
A hidroxilação muda o ângulo do resíduo e
permite um melhor empacotamento. Na falta
de vitamina C, não ocorre o empacotamento
adequado.

Folha-β
Ou também estrutura beta. Cadeia de
aminoácidos fica esticada. As pontes de
hidrogênio que estabilizam essa estrutura
ocorrem entre uma e outra cadeias peptídicas
em paralelo.

A colágeno é rico em Pro, Lys, Ala, os

aminoácidos pequenos, e em hidPro.

Essas cadeias podem estar orientadas no

mesmo sentido (paralelas), ou com sentidos
contrários (antiparalelas).

A falta de vitamina C causa o escorbuto. Isso

ocorre pois na estrutura do colágeno há prolina
e, para que as cadeias alfa se enrolem, a prolina
precisa sofrer mudança estrutural formando
De qualquer forma, conseguem se estabilizar
por ligações de H. É chamada folha beta pois o
esqueleto das ligações peptídicas forma como
uma superfície de uma folha, com os grupos R
voltados a parte superior ou inferior da folha.
Estrutura terciária
Estrutura primária se dobra no espaço, e forma
estrutura globular e compacta. Os mesmos
aminoácidos, em outras estruturas que não a
globular, formariam estrutura muito maior.

A albumina forma uma série de alfa hélices que

se dobram em estrutura mais compacta.

São representadas, cada cadeia peptídica,

como uma fita contendo uma seta que indica
sua orientação. As fitas não precisam estar no
mesmo plano, mas podem se dobrar no espaço.

A estrutura globular pode ser formada por

regiões na forma de estrutura secundária,
como folha beta e alfa hélices. Domínios são
estruturas comuns a várias proteínas, como a
alça βαβ e o barril β.
Fibroína
Proteína rica em estruturas beta, é produzida
por insetos, presente no fio de seda e na teia
de aranha. Várias folhas beta interagem umas
com as outras, ricas em aminoácidos pequenos
e hidrofóbicos. A interação entre as folhas beta
cria uma fibra extremamente resistente.

Esses domínios podem fazer parte de uma

estrutura maior, como o barril α/β, com as
folhas beta no centro e as alfa hélices na
periferia do barril.
GFP, proteína verde fluorescente
É uma proteína utilizada na biologia molecular.
Quando colada a outra proteína, emite luz
verde observável. É um barril beta em cujo
interior há resíduos que em reação de oxidação
emitem luz.
Estabilização da estrutura terciária
Determinada por aminoácidos hidrofílicos e
hidrofóbicos. Aminoácidos hidrofílicos estão na
superfície externa da proteína, e no interior da
proteína há aminoácidos hidrofóbicos. A
interação hidrofóbica no interior estabiliza a
estrutura da proteína.
Entre as forças que estabilizam as proteínas:
-nas alfa hélices, ligações de H intra cadeias;
-nas folhas beta, ligações de H entre cadeias;
-ligações iônicas entre aminoácidos carregados;
-ligações de H entre aminoácidos;
-interações hidrofóbicas;
-pontes dissulfeto.
Desnaturação de proteínas
Reagentes que interferem na estrutura da
proteína, como ureia e betamercaptoentanol
(agente oxidante que desfaz pontes
dissulfetos). Pode ocorrer com sais, mudança
de pH e mudança de temperatura. A estrutura
terciária é perdida.
No estado desnaturado, a proteína perde sua
atividade biológica.
A proteína pode recuperar sua estrutura, pois o
dobramento da proteína é determinada pela
estrutura primária. Porém, ocorre em exceções,
normalmente a proteína não se recupera.
É a estrutura primária que determina o
dobramento e a função da proteína. Por isso,
sequências diferentes de aminoácidos formam
proteínas diferentes.
O dobramento de uma proteína ocorre por
meio de intermediários, até que a configuração
final seja atingida. Toda proteína tem estrutura
tridimensional definida. Sequências iguais de
aminoácidos geram proteínas iguais.

O enovelamento de uma proteína pode ser
auxiliado por outras proteínas, como as
chaperonas, auxiliando para o correto
dobramento.
Uma mesma sequência de aminoácidos,
dependendo do contexto, pode formar
estruturas diferentes.
Príons
O dobramento de proteína é muito importante,
e há doenças associados a esse mal
dobramento.
A doença da vaca louca ou kuru é causada por
príons. É caracterizada por alterações no
cérebro, que forma um córtex espongiforme,
provocada por proteína infectante, o príon.
Os príons existe em duas conformações, o
príon celular, normal, mas que por mutação ou
desnaturação, sofre mudança conformacional e
se transforma no príon infectivo, com
dobramento errado.
Esse príon infectivo faz os príons normais se
dobrarem de forma errada. Essas proteínas mal
dobradas são resistentes a proteólise, e se
acumulam nos lisossomas de células do
cérebro.
Alzheimer
Se caracteriza por deposição da proteína
amiloide, formando placas. A proteína existe
em forma nativa, e, na desnaturação, exibe
aminoácidos hidrofóbicos, causando
precipitação de proteína mal dobradas que
forma as placas amiloides.
Em diabetes, peptídeo beta amiloide se dobra
de forma errada.
Estrutura quaternária
Proteína formada por mais de uma cadeia
polipeptídica. Essas cadeias podem ser iguais,
formando homodímero, ou cadeias diferentes,
formando heterodímero.
Mioglobina e hemoglobina
Hemeproteínas, pois têm em sua estrutura um
grupo prostético, não formado por
aminoácidos, nesse caso um grupo heme. O
grupo heme tem ferro, ligado na cadeia por
uma His, e a outra extremidade do ferro se liga
ao oxigênio. Portanto, são proteínas ligantes de
oxigênio.

Algumas proteínas são capazes de se ligar a
outras moléculas ou íons. Essa ligação
geralmente envolve mudança conformacional.
Essa ligação depende da concentração do
ligante, quanto maior a concentração, maior a
ligação. A constante de associação ou
afinidade da proteína pelo ligante é a
concentração de ligante que determina ligação
em metade das moléculas da proteína.
Quanto mais deitada a curva, menor a
afinidade. Quanto mais em pé a curva, maior a
afinidade.
A mioglobina, através de seu grupo heme, é
capaz de se ligar ao oxigênio. É uma reação de
alta afinidade, baixa concentração de O2 já se
liga a metade das moléculas de mioglobina.
As subunidades da hemoglobina são
semelhantes à mioglobina. A hemoglobina tem
duas subunidades alfa e duas beta, e a
estrutura quaternária interfere na ligação da
hemoglobina com o oxigênio.
A curva de associação não é uma hipérbole,
como na mioglobina, mas uma curva sigmoide.
A baixas concentrações de O2 há baixa
afinidade, e a maiores concentrações de O2 a
afinidade aumenta.
A curva sigmoides reflete uma transição entre
um estado de alta afinidade e um estado de
baixa afinidade.
Há interações iônicas entre as subunidades,
uma comunicação entre elas. Essa
comunicação reflete em dois tipos de
hemoglobina. Hemoglobina no estado T, a
desoxihemoglobina, e no estado R,
oxihemoglobina.
Há diferenças estruturais entre esses estados,
causadas pela ligação do oxigênio às
subunidades. A cavidade no centro das
subunidades é grande no estado T, e menor no
estado R.
hemoglobina pelo O2 é diminuída em baixas
concentrações de O2, liberando mais oxigênio
nos tecidos.

A ligação da molécula de oxigênio causa

mudança conformacional na subunidade, que é
sentida pelas outras subunidades. Isso aumenta
a afinidade das outras subunidades pelo
oxigênio, processo de cooperatividade.
O 2,3-bisfosfoglicerato, 2,3-BPG, é uma
molécula que nos eritrócitos deriva da via
glicolítica. Se aloca na cavidade da
hemoglobina, com interação dos seus
grupamentos fosfato com resíduos da cavidade
central, estabilizando a forma T.
Anemia falciforme
A anemia falciforme é uma doença hereditária
com mutação na cadeia beta da hemoglobina.
Ácido glutâmico na posição 6 trocado por
valina, causa deformação do eritrócito, que fica
em forma de foice.
O ácido glutâmico é carregado, e a valina é
hidrofóbica. Aminoácido hidrossolúvel é
trocado por aminoácido hidrofóbico. Não há
problema na ligação do oxigênio. Porém,
quando a hemoglobina S atinge a forma T,
desoxigenada, a Val é exposta na sua superfície,
e há interação entre moléculas de HbS,
causando polimerização. Os polímeros, feixes,
deformam a hemácia.

Na ausência do BPG, a hemoglobina passa a ter

comportamento de alta afinidade pelo O2,
como se fosse mioglobina. Em condições
normais, há cerca de 5mM de BPG no
eritrócito, estabilizando a forma T. A maior
síntese de BPG é uma adaptação dos indivíduos
que vivem em grande altitudes, diminuindo a
afinidade da Hb pelo O2.
Pela maior quantidade de BPG, a afinidade da
Purificação e estudo de proteínas separadas de acordo com seu tamanho. Um
O método mais utilizado é a cromatografia. detergente, o SDS, auxilia a eletroforese, pois
Uma coluna é preenchida com matriz, as desnatura as proteínas e se tornam neutras.
amostras são colocadas no topo da coluna, e Proteínas puxadas ao polo positivo.
com passagem do líquido as proteínas são
separadas de acordo com a interação com a
matriz, de acordo com suas propriedades.

Existem padrões de tamanho conhecido. Com a

comparação do tamanho da proteína com o
tamanho desses padrões, se identifica a
proteína.
Uma variante é a eletroforese bidimensional.
Proteínas são colocadas em gel com gradiente
de pH, e corrente elétrica é aplicada. Proteína
se move até atingir um pH igual ao seu pI,
tendo carga igual a 0, e para de migrar. Em
seguida, é aplicada eletroforese normal,
separando por tamanho. Forma um mapa
peptídico/mapa bidimensional.
Podem ser separadas pela carga elétrica. A
matriz pode ser carregada negativamente,
então as proteínas positivas se grudam na
coluna, e as proteínas negativas passam pela
coluna.

Na eletroforese, um polímero, um gel serve

como peneira para a passagem das proteínas, Proteínas do sangue podem ser submetidas à
eletroforese. A mais abundante é a albumina, e
as demais são globinas, separadas em zonas.
Em cada zona, há proteínas específicas.

Proteína aumentada em determinada região

indica condição patológica.

Imunoglobulinas
São formadas por duas cadeias pesadas e duas
cadeias leves, uma estrutura quaternária.
Cadeias unidas por pontes dissulfeto.

Felipe Piccoli Rostirolla