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- A partir do conhecimento do sítio de restrição se torna

DIAGNÓSTICO GENÉTICO MOLECULAR possível recortar essa parte do DNA.

PRINCÍPIOS

- Estrutura e propriedades bioquímicas dos ácidos

nucleicos: caráter ácido, cargas negativas, fitas
antiparalelas, complementaridade das bases e cadeia
dupla.

- Conhecimento do processo de replicação: DNA

polimerase, primer, abertura da flita e sentido 5’ -> 3’
(antiparalelo).

- O aumento da temperatura pode desfazer as ligações do

tipo ponte de hidrogênio, ou seja, pode abrir a molécula de
DNA.

- Conhecimento do processo de expressão gênica: cadeia

única 5’ -> 3’, fita anti-sense (DNA) e fita sense (DNA)
BIBLIOTECAS DE DNA

FERRAME NTAS MOLECULARES - É a mecânica em que separa o DNA em diversas partes e

estuda cada uma por vez.

PRIMERS - Utiliza o auxílio de plasmídio.

- Consegue encontrar uma sequência complementar da
sequência dele, acoplando e gerando uma extremidade OH
livre.

- Funciona como uma sonda, que consegue amplificar um

trecho específico do DNA

CDNA OU DN A COMPLEMENT AR
-É o DNA produzido a partir de uma molécula de mRNA,
que já passou por seu processamento.
DNA POLIMERASE
- Enzima responsável por fazer o alongamento da fita.

- Essa enzima, quando extraída de bactérias termo

aquáticas se chama de TAC polimerase e é resistente à
elevadas temperaturas. Desse, modo a enzima não se
desnatura após a elevação de calor.

ENZIMAS DE RESTRIÇÃO
- Identificam um DNA estranho e corta o DNA exatamente
nessa sequência de bases.
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REAÇÃO EM C ADEI A POLIME RASE – PCR

- É resultado a partir de ciclos de temperatura, que servem
para abrir a fita, anela os primers e agir a polimerase. Dessa
forma o DNA é amplificado em uma reação exponencial.

- O aparelho que promove os ciclos de temperatura é

chamado de termociclador.

- A PCR consegue selecionar um trecho do DNA, que será

enovelado por primers e o que estiver entre os primers será
amplificado. Ou seja, só trabalha com um trecho do DNA.

- RT PCR: é uma PCR em tempo real.

TESTE DE PATERNIDADE

- Nas extremidades dos cromossomos não há atividade

gênica, essas áreas estão sujeitas a mutação, portanto
dificilmente um indivíduo que sofreu mutação será
eliminado da evolução.

- As mutações realizadas nas áreas que não possuem

expressões gênicas são mantidas. Portanto existe uma
grande diversidade nessas regiões.

- Cada indivíduo possui um cromossomo do pai e um da

mãe, portanto cada cromossomo pode haver uma
diversidade diferente.

- Em um teste de paternidade deve ser comparados as

bandas do pai, mãe e filho.

- Em casos de indivíduos que só possui uma banda,

provavelmente esse indivíduo herdou tanto do pai quanto
da mãe o mesmo marcador (homozigose)

- Quimerismo: ocorre em indivíduos que possuem mais de

um tipo de DNA em suas células.

ELETROFORESE
- As moléculas são submetidas a um campo elétrico e serão
organizadas a partir de sua carga elétrica. Como o DNA
possui carga elétrica negativa, será atraído para o polo
positivo.

- Moléculas maiores demoram mais para atravessar o gel,

enquanto moléculas menores atravessam o gel mais
rapidamente.
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IPP: frequência em que o alelo está presente na população.

SEQUENCIAMENTO DE DN A

- Parte do princípio que a amplificação pode ser - A partir desse sequenciamento pode ser identificado uma
interrompida a qualquer momento, podendo colher uma mutação.
eletroforese desse resultado e consequentemente a
sequência de bases nitrogenadas.

- Dideox: nucleotídeo sem a hidroxila na posição 3’ ,

utilizado como um marcador.

-Método Sanger:

SÍNTESE DE OLIGONUCLOTÍDEOS

- Quanto maior o primer, menor a rentabilidade final (mais

caro e mais específico)

- A partir disso são construídos os testes.

Sequenciamento automático:
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- A partir do momento que o genoma do vírus é

sequenciado, se tona possível o desenvolvimento do teste
(Ex.: PCR)

BLOTINGS

- É realizada a amplificação e eletroforese do gene e coloca

o gel por cima do papel de filtro. Por cima do gel é colocada
uma membrana de nylon e várias folhas de papeis de filtro
e pressiona a área.

- Essas folhas vão ter um potencial de absorver a solução

tampão e os filtros vão realizar o seu papel sobrando a
membrana de nylon.

- A sonda vai encontrar a banda específica na membrana de

nylon.

ARRAYS

- São realizados em placas com varias porções com

marcadores, que são relacionados à uma região do DNA.

-A partir da extração do DNA e colocada na placa,

-Região crítica da síndrome de down
consequentemente vai reagir e emitir um sinal luminoso.

- Verde: a sonda hibridou com o material normal (expressa

na célula que foi extraída do DNA) – só expressa na cel
normal

- Amarelo: expressa na célula normal e tumoral

-Vermelho: expressa somente na célula tumoral

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- PCR quantitativa é o contrário da qualitativa.

- PCR qualitativa realiza várias amplificações do gene

- A importância da quantitativa está relacionada no

acompanhamento para saber se o tratamento está surtindo
efeito.

MECANISMOS DE HERANÇA

- É utilizado também em diagnóstico pré-natal (método não

invasivo)
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ALGUM TEMA

GRUPOS SANG UÍNEOS

- Presença de alelos múltiplos e interagem entre si.

- O alelo irá produzir peptídeos receptores de membrana,

podendo ser produzido de mais de um tipo ou não.

- Na população existe 3 tipos de combinações de alelos

nesse sistema (A, B e O). Os alelos responsáveis por A e B
exercem dominância sobre o O.

- O indivíduo que recebe a transfusão sanguínea não pode
possuir antígeno para as células que são recebidas.
- Cadeias expressas a partir do tipo sanguíneo do indivíduo.
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- Para que o indivíduo consiga produzir os tipos sanguíneos,
primeiramente necessita de um fator precursor, chamado
gene H (HH/Hh/hh). O hh será responsável por gerar o
“falso”, visto que independente dos alelos, o indivíduo vai
apresentar o grupo sanguíneo O nos testes.
- O fator RH é uma característica independente. Não possui
alelos múltiplos, apresentando somente os alelos D e d.
RH+ é homozigoto e heterozigoto dominante e RH- é
homozigoto recessivo.
ERISTOBLASTOSE FETAL
- Normalmente nos exames pré-natais é identificado se a
mulher já sofreu sensibilização
-Tratamento: imunossupressão, seleção de embriões.
HERANÇA MITOCON DRI AL
- Herdada tanto por homens, quanto por mulheres, mas
apenas a mãe transmite;
-Pelo fato das mitocôndrias possuírem proliferação
independente, há um risco de ocorrer mutações no mtDNA
- Exemplo: Neuropatia óptica hereditária de Leber (LHON).

ACONSELHAMENTO GENÉTICO
-Processo de comunicação que aborda os problemas
humanos relacionados com a ocorrência e a recorrência de
doenças genéticas em uma família.
HISTÓRICO
- Desenvolvimento de novas tecnologias e redução dos
custos dos exames.
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PAPEL DO PROFISSIO NAL DE S AÚ DE NO
ACONSELHAMENTO GENÉTI CO
1. Compreender fator sobre saúde, como: diagnótico,
curso provável da doença e tratamentos
disponíveis;
2. Compreender de que modo a hereditariedade
contribui para a origem da doença e os riscos de
repetição;
3. Compreender todas as alternativas para enfrentar
os problemas relacionados ao risco de recorrência;
4. Escolher uma ação apropriada em vista de seus
padrões éticos e religiosos
5. Adaptar-se à presença da doença ou ao risco de
recorrência da doença na família
- A quem se destina o aconselhamento genético: casais
consanguíneos, casais com infertilidade, casais com idade
avançada, histórico de doença na família (incluindo câncer)
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ERROS INATOS DE METABOLISMO

ALCAPTONÚRIA
- Escurecimento devido à presença de ácido gomogentísico
que escurece em contato com o ar. Essa substância é
acumulada por uma falta de enzima que participa nessa via
metabólica.

- Falta da conversão do ácido homogentísico

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ENZIMAS

- Todas as eximas possuem um gene para ser produzida.

- Se um gene não converter uma enzima específica, o

substrato resultante da ação dessa enzima não irá ser
produzido.

- Dessa forma, ocorrerá um acúmulo de substrato C

(exemplo da foto abaixo)

- Os problemas relacionados a esse fato pode ser pela falta

do substrato D ou pelo acúmulo do substrato C, neste caso
podendo desencadear vias acessórias.

- Todo acúmulo de uma substância que não é secretada se

torna toxico.

- A utilização de vias acessórias podem produzir substâncias

toxicas.
FENILCETONURI A (PKU)
- Falta da enzima fenilalanina hidroxilase (PAH) e acúmulo
da fenilalanina
- Fenilalanina e a tirosina são ingeridas na alimentação,
nesse caso o problema dessa patologia está relacionada
com o acúmulo da fenalalanina.
- Esse acúmulo de fenilalanina promove um inibição
competitiva na absorção celular com outros aminoácidos
hidrofóbicos pela barreira hematoencefálica (LEUCINA –
importante componente da mielina) e pode provocar uma
ausência de formação de mielina, consequentemente
gerando um caso de retardo mental.
- Além disso, outro problema relacionado está na
conversão de vias acessórias, como por exemplo o ácido
fenilpirúvico, que provoca inibição competitiva no
metabolismo da glicose e na síntese de ácidos graxos e
colesterol.
PKU DURANTE A GESTAÇÃO
- A criança só vai precisar da dieta somente após o
nascimento, visto que a alimentação da mãe é filtrada e
oferecida para a criança na dosagem correta.
- Fígado da criança só produz a enzima PAH após o
nascimento. Portanto, se a mãe possui PKA, mesmo a
criança não possuindo PKA, o excesso de fenilalanina no
organismo da mãe já íra provocar dano no
desenvolvimento neural da criança (grave e irreparáveis).
- Nesse caso, a mulher, para não causar danos ao filho,
necessita fazer uma dieta para regular os níveis de
fenilalanina.
- PKU2: suplemento que a criança diagnosticada com PKU
necessita ingerir.
ALBIN ISMO

- O teste do pesinho é um método para diagnóstico precoce

para essa patologia. Esse teste também verifica outras
doenças, como hemoglobinopatias, fibrose cística e
hipotireoidismo congênito, etc.
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- Nesse caso pode ocorrer os 3 tipos de problemas: falta do

produto final, do acúmulo do subproduto e das vias
acessórias.

- A conversão de galactose em galactiol é uma via acessória,

que é ativada com o acúmulo de galactose no organismo. O
galactiol irá induzir o aparecimento de catarata. O acúmulo
desse álcool no organismo irá promover um aumento do
potencial osmótico, consequentemente um edema será
gerado.

- A não conversão da galactose em glicose irá inibir a

síntese de glangliozídeo, cerebrozídeos e glicoproteínas.
Dessa forma, irá afetar o desenvolvimento do sistema
- Característica ocorrida pela falta de tirosina nervoso (gerando retardo mental severo).

FARMACOGENÉTICA

- Estudo das reações a drogas geneticamente

condicionadas.

- Resposta diferencial de paciente diversos a uma mesma

dose de uma droga.

- É a área da genética bioquímica que estuda a variabilidade

da resposta à drogas decorrentes da variação genética.

- Ciência que estuda a variabilidade genética dos indivíduos

com relação as drogas específicas. Determinados indivíduos
podem reagir diferente ao mesmo tipo de medicamento,
dependendo de sua etnia e ou outras variações genéticas.
- Nesse caso o problema está relacionado com a falta da
proteína final.

- O teste de tirosinase ocorre a partir da incubação do

bulbo capilar com tirosina.

GALACTOSEMIA

- Nesse caso o indivíduo possui um erro na via metabólica

da galactose, não conseguindo converter a galactose em
glicose, promovendo um comprometimento da nutrição e
consequentemente compromete o desenvolvimento do
indivíduo.
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- Prescrição de doses de medicamentos consideram apenas

o peso do indivíduo! (prática universalmente adotada)

- 3-5% admissões em hospitais: reações nocivas a

medicamentos

- Dentro dos hospitais: +/- 30% apresentam reações

patológicas induzidas por medicamentos

- Fatores que influenciam na biotransformação de um

medicamento:

DEFICIÊNCIA EM COLINESTERASE SÉRICA

- Atua na hidrólise de ésteres de colina (ex. acetilcolina)

formando colina livre e o ácido orgânico correspondente.

- Enzima mutante (atípica) com AÇÃO LENTA (afinidade

reduzida aos ésteres de colina por modificação num sítio
aniônico)

-Mesmo número de aminoácidos (574)

- Qual mutação ou uma má expressão dessa proteínas
podem interferir na ação do medicamento no individuo - Mesmo números de sítios ativos

- Administração de uma droga em um grande número de - ácido aspártico → lisina (posição 70)
pessoas com padronização dos fatores. → Observação de
uma variabilidade considerável (estatisticamente
significativa) nos níveis sanguíneos da droga em cada
indivíduo. → Metabolismo sob controle (influência)
genética. → Diversidade genética da população.

- Diferenças individuais são avaliadas de acordo com uma

MEIA-VIDA da droga, período onde sua concentração
plasmática permanece constante.

- Estes valores individuais quando plotados em um

diagrama, obtém-se uma curva de Gauss.
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- Conhecendo o genograma, são produzidas sondas

moleculares para genes específicos.

DEFICIÊNCIA EM ALFA-1-ANTRIPSINA

DESINTOXICAÇÃO E OS CITOCROMOS P450

-Grupo de enzima que é expressada principalmente no

fígado (concentradas nos retículos endoplasmáticos lisos)
responsável por eliminar substâncias tóxicas, teratogênicas,
agentes mutagênicos e agentes carcinogênicos

- Há variações genéticas nos níveis de expressão do P450

(herança quantitativa).

- O indivíduo que faz uso constante de medicamentos, com

um tempo ele irá aumentar o volume de retículos
endoplasmático lisos, visto que a demanda de metabolismo
é maior e apresentará uma maior produção de enzimas
para degradar as drogas (plasticidade fenotípica).

FARM ACOGENÔMICA

- “Medicamentos personalizados”

- Genômica: caracterização genotípica do indivíduo.